Препарат против диареи телят “Молозивный арготиоглобулин”

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ПРЕПАРАТ ПРОТИВ ДИАРЕИ ТЕЛЯТ МОЛОЗИВНЫЙ АГРОТИОГЛОБУЛИН(73) Патентообладатель Красочко Петр Альбинович(57) Препарат против диареи телят, включающий источник противовирусных антител - молозивный иммуноглобулин, отличающийся тем, что он содержит молозивный иммуноглобулин на сбалансированном водносолевом растворе и дополнительно противовирусный компонент-протаргол и антитоксический компонент тиосульфат натрия при следующем соотношении ингредиентов, мас.протаргол 0,4-0,5 тиосульфат натрия 4-5 молозивный иммуноглобулин на сбалансированном водно-солевом растворе остальное.(56)1560344 В, 1980.4843065 , 1989.4976970 , 1990. Изобретение относится к ветеринарии, в частности к лечению заболеваний диареей молодняка крупного рогатого скота. Известен лечебно-профилактический препарат, содержащий сыворотку крови убойных животных в синтетической среде Игла или 0,5 гидролизате лактальбумина на сбалансированном водно-солевом растворе Хенкса с добавлением тривитамина 1. Однако этот препарат содержит недостаточное количество антител к возбудителям диареи телят (рота-,корона- и диарейному вирусам), препарат вводится в больших количествах (500-1000 мл) в подогретом до 37 С виде до первой выдойки молозива. Наиболее близким к заявляемому является препарат для профилактики и терапии гастроэнтеритов телят 2. Однако недостатком данного препарата является то, что в его состав входят только антитела к ротавирусам человека, которые антигенно родственные ротавирусам крупного рогатого. Антитела к другим возбудителям гастроэнтеритов, вызываемых вирусами диареи и коронавирусами, отсутствуют. Задачей изобретения является создание препарата, обладающего высокой противовирусной активностью с повышенным содержанием антител к возбудителям вирусно-бактериальной природы, вызывающих энтериты новорожденных телят, и стимулирующего иммунную систему животных. Поставленная задача достигается тем, что препарат против диареи телят, включающий источник антител к возбудителям диареи телят на сбалансированном водно-солевом растворе, в качестве источника антител содержит молозивный иммуноглобулин и дополнительно протаргол и тиосульфат натрия при следующем соотношении ингредиентов, маспротаргол 0,4-0,5 тиосульфат натрия 4-5 3865 1 молозивный иммуноглобулин на сбалансированном водно-солевом растворе остальное. Использование молозивного иммуноглобулина в качестве источника противовирусных и антибактериальных антител в предложенном препарате обусловлено тем, что в молозиве 1-2 удоя содержание антител к возбудителям вирусно-бактериальной природы, вызывающих энтериты новорожденных телят, в 10-12 раз больше, чем в сыворотке крови (табл. 1). В отличие от сыворотки крови, молозивный иммуноглобулин обладает еще и высоким физиологическим действием на организм новорожденных телят 3. Представленные в табл. 1 результаты сравнительного состава антител сывороток крови и молозивного иммуноглобулина свидетельствуют о более высокой биологической активности молозивного иммуноглобулина по сравнению с сывороткой крови. Использование в молозивном арготиоглобулине протаргола (альбумината серебра) вызвано тем, что наряду с общеизвестными бактерицидными свойствами он обладает еще и противовирусными 4. Изучение ингибирующих свойств протаргола в отношении репродукции вируса диареи на культуре клеток показало,что в концентрации 0,3-0,5 он задерживает репродукцию вируса, а в 2,5 концентрации действует токсически на культуре клеток (табл. 2). Кроме того, проведены исследования по изучению стимулирующих свойств протаргола на иммунную систему, содержания Т- и В-лимфоцитов, фагоцитов, бактерицидную активность сыворотки крови (табл. 3). Из табл. 2 видно, что протаргол в концентрациях от 0,3 до 1,5 предотвращает репродукцию вируса диареи и в то же время не токсичен для культур клеток. Из табл. 3 видно, что протаргол активизирует как клеточные, так и гуморальные звенья иммунной системы. При этом к 15 дню наблюдения отмечается повышенное содержание абсолютного количества Тлимфоцитов, фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса и особенно повышена бактерицидная активность сыворотки крови. К 30 дню эти показатели пришли к уровню исходных показателей. Тиосульфат натрия, входящий в состав предложенного препарата, обладает антитоксическими и иммуностимулирующими свойствами, позволяет снять токсикоз при диарее и в некоторой степени стимулировать угнетенную иммунную систему 5, кроме того, используемые концентрации протаргола и тиосульфата натрия не снижают титр противовирусных антител в молозивном иммуноглобулине (табл. 4). Исследования, приведенные в табл. 4 свидетельствуют о том, что как протаргол, так и тиосульфат натрия,а также их сочетания не снижают титр антител в молозивном глобулине. Пример приготовления молозивного арготиоглобулина. Молозиво 1 и 2 удоя от клинически здоровых коров 3-й и более лактаций подогревают до 40-43 С, сепарируют для отделения жира, тщательно перемешивают и вносят один из ферментных препаратов - 10 раствор пепсина из расчета 15-20 мл на 1 л молозива или сычужный фермент - 1,5-2 мл на 1 л. Процесс створаживания длится до 3 ч. После полногоствораживания молозива в течение суток в холодном месте(температура 7 - 15 С) происходит формирование казеинового сгустка и отделение молозивной сыворотки. Молозивную сыворотку отделяют с помощью сифона и лавсанового фильтра для отделения казеина и оставляют на 24 ч для осветления. В полученную молозивную сыворотку вносят полиэтиленгликоль ПЕГ 115 молекулярной массой 6000 до 10 концентрации для осаждения иммуноглобулинов. Через 18-24 ч формируется осадок иммуноглобулина, который отделяют от сыворотки центрифугированием при 3-5 тыс.об./мин. в течение 15-30 мин или сливом надосадочной жидкости при достаточно плотном осадке. Полученный осадок иммуноглобулинов растворяют до 10 концентрации сбалансированным водно-солевым раствором Рингера, состоящим из раствора натрия хлорида, калия хлорида и натрия гидрокарбоната на дистиллированной воде 6. После получения раствора молозивного иммуноглобулина в него добавляют протаргол до 0,40,5 концентрации и тиосульфат натрия до 4-5 концентрации. Полученный молозивный арготиоглобулин для осветления и стерилизации пропускают через фильтрующий и стерилизующий фильтры Сальникова. Стерильный препарат фасуют в стерильные флаконы объемом 200,0 и 500,0 мл, хранят в темном прохладном месте при температуре 4 - 10 С. Проведение лабораторных исследований антидиарейного препарата Молозивный арготиоглобулин на лабораторных животных показало, что все серии препарата стерильны, нетоксичны и безвредны для лабораторных животных. Следующим этапом работ явились исследования по отработке оптимальной терапевтической дозы компонентов в препарате и их соотношения. В табл. 5 представлены результаты отработки оптимального соотношения ингредиентов молозивного арготиоглобулина при пероральном введении больным диареей телятам. Как видно из табл. 5, наивысшую лечебную эффективность показал молозивный арготиоглобулин со следующим соотношением компонентов 0,4-0,5 протаргола, 4-5 тиосульфата натрия и до 100 молозивного иммуноглобулина на растворе Рингера. Для отработки терапевтической дозы предлагаемого препарата были сформированы 4 группы новорожденных телят, заболевших энтеритами вирусно-бактериальной этиологии. Первая группа телят (5 голов) по 2 3865 1 лучала перорально 25 мл молозивного арготиоглобулина, вторая группа (5 голов) - по 50 мл, третья группа 100 мл, четвертая группа (контроль) - 100 мл сбалансированного водно-солевого раствора Рингера, результаты определения терапевтической дозы молозивного арготиоглобулина подставлены в табл. 6. Как видно из табл. 6, оптимальной терапевтической дозой молозивного арготиоглобулина является 50100 мл при пероральном применении. После отработки оптимального соотношения компонентов и терапевтической дозы препарата проведены сравнительные исследования лечебно-профилактической эффективности антидиарейного препарата (прототип) и молозивного арготиоглобулина. Для этого в опыт было взято 203 теленка с признаками диареи. Из них 89 обработали двукратно арготиоглобулином и 114 - антидиарейным препаратом. Результаты опыта представлены в табл. 7. Изучение терапевтической эффективности антидиарейного препарата молозивного арготиоглобулина в сравнительном аспекте дает основание утверждать, что при двукратном применении предлагаемый вариант более чем в 4 раза превосходит прототип. Преимуществом антидиарейного препарата Молозивный арготиоглобулин является 10-кратное уменьшение оптимальной терапевтической дозы по сравнению с прототипом, что облегчает процесс лечения новорожденных телят. Таблица 1 Антительный состав сывороток крови и молозивного иммуноглобулина коровп/п 1 2 3 4 5 6 7 8 Наименование сывороток Сборная сыворотка крови коров (серия 1) Сборная сыворотка крови коров (серия 2) Сборная сыворотка крови коров (серия 3) Средний титр сборной сыворотки крови коров(серии 1, 2, 3) Молозивный иммуноглобулин (серия 1) Молозивный иммуноглобулин (серия 2) Молозивный иммуноглобулин Средний титр сборных серий молозивного иммуноглобулина Титры антител к вирусам ИРТ ВД 132 132 164 132 132 164 142,7 1128 1256 1256 Таблица 2 Ингибирующие свойства протаргола в отношении репродукции вируса диареи на культуре клеток ЦПД вируса диареи с протарголом Интенсивность Время наступлеЦПД ния ЦПД ЦПД с раствором протаргола Интенсивность Время наступления ЦПД ЦПД ЦПД вируса диареи с протарголом Интенсивность Время наступлеЦПД ния ЦПД ЦПД с раствором протаргола Интенсивность ЦПД 3865 1 Таблица 3 Иммуностимулирующие свойства протаргола Бактерицидная Сроки Группы исследова- активность животных сыворотки ния крови Опытная Исходные 19,63,22 группа данные КонтИсходные рольная 24,36,99 данные группа Опытная На 15-й 58,65,19 группа день КонтНа 15-й рольная 23,93,22 день группа Опытная На 30-й 11,92,23 группа день КонтНа 30-й рольная 11,92,08 день группа Таблица 4 Влияние тиосульфата натрия и протаргола на титры антител к вирусам диареип/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Концентрация тиосульфата натрия 3865 1 Таблица 5 Испытание терапевтической эффективности молозивного арготиоглобулина при различных соотношениях компонентов Ингредиенты молозивного арготиоглобулина Протаргол Тиосульфат натрия Молозивный иммуноглобулин на растворе Рингера-Локка Протаргол Тиосульфат натрия Молозивный иммуноглобулин на растворе Рингера-Локка Протаргол Тиосульфат натрия Молозивный иммуноглобулин Протаргол Тиосульфат натрия Молозивный иммуноглобулин Контроль Таблица 6 Отработка оптимальной терапевтической дозы препарата Молозивный арготиоглобулина на клинически больных телятахп/п Таблица 7 Сравнительная терапевтическая эффективность молозивного арготиоглобулина и антидиарейного препарата Молозивный арготиоглобулин голов процент 89 100 Показатели Всего больных телят в опыте Выздоровело после первой дачи препарата Выздоровело после второй дачи препарата Всего выздоровело после двукратной дачи препаратов Выздоровело после многократного применения в сочетании с другими препаратами Продолжительность лечения Терапевтическая эффективность после двукратного применения Антидиарейный препарат голов процент 114 100 1 1,1 2,2 дня на голову 96,6 81 71,1 5,4 дня на голову 21,9 3865 1 Источники информации 1. А. с. СССР 1070726, МПК А 61 К 31/00. Препарат для лечения и профилактики диспепсии новорожденных телят Антидиарейный / З.П. Наумец, Е.В. Андреев, А.В. Драгомир, П.П. Хмельницкий. Заявл. 05.06.78 2624807/30-15. 2.1560344.61 К 39/15/./ . 15618/7714.04.1977. 3. Иванов Молозивный иммуноглобулин в профилактике и лечении желудочно-кишечных болезней новорожденных телят. Автореф. дис. канд. вет. наук. - Витебск, 1986. - С. 17. 4. Красочко П.А. с соавт. Использование протаргола с глобулином для профилактики и терапии смешанных вирусных респираторных инфекций молодняка крупного рогатого скота (рекомендации). - Кишинев. Молдагроинформреклама, 1992. - С. 8. 5. Тот А.И., Чекишев В.М. Применение тиосульфата натрия для стимуляции противосальмонеллезного иммунитета у телят. Новосибирск, ИЭВСиДВ. 1991. - С. 3. 6. Червяков Д.К. с соавт. Лекарственные средства в ветеринарии. - М. Колос, 1977. - С. 520. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 6