Способ получения производных простагландина

госыцдготвенный номутЕтсссРпо ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ и отнгытии(71) Две Веллкам Фаундейтн Пиитед(56) 5. Мопсаа Е. Сгу 31 еизк 1, 5. Випгйпв, 1.Е. Чаше. Ад епиуше 1 во 1 асе Егош агйегйез Егацзйогшв рго 5 са 51 пд 1 пепдоретох 1 де 5 со ап цпв аЪ 1 е виъзсапсе Енас 1 п Ь 1 Ь 1 Ев р 1 асе 1 е а 33 ге 3 аЕ 1 оп.1 Несите, 263, 5579, 1976, р. 663-665.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫ ПРОСТАГПАНДНА(57) Изобретение касается нростан-Е гландинов, в частности продзноднрш простациклина общей формулы 1.мЫй катион, которые как обладающие антнагрегирующим действием на тромбоциты могут бытъ.исполъзованы в медицине. Для выявления фармакологической активности у соединений указанноч го класса получены новые соединения 1. Процесс ведут путем дегндродегалоидировання соответствующего пронзВодного 5 йод 9-деокси 6 9 ч-эпокСнпроетагландина Рад основанием, с ПОСЛЕДУЮЩИН При необходимости гидрог лиэом сложноэфирного производного в присутствии основания.Соединення 1 Обладают СИЛЬНЫ Противоагрегнрующим действием в отношении тромбоцитов, а также являются сосудорасшряющн ве ществом.Изобретение относится к способу агрегации тромбоцитов человека, обуслолучення новых производных класса ловленной арахидоновой кислотой, при простациклина, именно к лроизводньш концентрации 0,2 нг/мл этой соли и простагландина ее нестабильность в воде в кислой5 среде, а также другие данные с соответствующими свойствами натриевой соли (52)-5,6-дидегидро 9-деокси-6,9 М-зпоксипростагландина Р,ф.139 ЯМ спектр с высоким разрешением раствора кристаллов в диметилсульфоксиде-ов показал наличие ожи Щоос.ЪС) даемыи 20 резонанснвш полос, причем ОЪ эти химические полосы полностью соггде К, - фармакологически приемлемы пасуются с химической структурой,катион, 5 установленной для простациклнна.Ниобладающих рядом ценных фармакологи каких примесей не обнаружено. ческнх свойств. Цель изобретения получение но- П Р И М е р 2. Метиловъй сложныи вьж производньш класса простациклина, эфир 5 йд 9 дек 6 9 9 эпкси обладающих преимуществами в фармако- 30 РТагЛ 3 днн Баш (50 МГ) ер 9 меш логическом отношении перед природны- вают етлаТм натрия длУЧеыМ д дростагдадинаИ из 0,23 г (10 мол.экв.) натрия и П Р И Ме р 1 Перемешанньй раст- 3,5 мл метилового спирта, в атмосфевор РСР сложного метилового эфира Ре дзота при кМатНй температуре(50 мг) В ЙростОмэфдре (1 Мл) 0 бра 25 в течение 8 ч. К желтому реакционбатывают 115 О мг (10 мл. экв.) бн- У ратврУ дбавлЯют дРЧдь карбоната-натрия и 1 мл.воды затем НЬЙ Раствор гидроокиси натрия по каплям в течение 2 ч вводят в вод- (25 МЛ) Тем Сам Ны 9 ыВая гдрд 3 иый раствор трехйодистого калия (0,7 эфирной части, и спустя 2 Ч В вакумопярный, 0,261 мл). После перемешивазо Уме испаряют при комнатной темперания в течение 8 ч реакционную смесь х туре метиловьй спирт. Иа оставшегося встряхивают с простым эфиром и вод- Р водного раствора спонтанно выделяетнм раствором тиосульфата натрия . ся масса бесцветных тонких игольчаЭФНРНУЮ фазу отделяют, промывают во- тых кристаллов требуемой соли натдой, сушат над сульфатом магния и 35 рин (формулы 1 .Н На). Ее охлаждаупаривают с получением желтого остат ют, собирают, промывают умеренно ка метилового сложного эфира 5 йод однонормапьной водной гидроокисью-9-деокси-6, 9 Ыэпоксипростагланди- натрия, сушат на воздухе и хранят в на- Ед . у пробирке, закрытой пробкой. ПолученРаствор.метилового сложного эфира.до Над СОЛЬ С 383 мг) иМеетЙд(КВГдНСК) Б-йод-Э-деокси-б, 9 иэпоксипро- 1692 см (0 СС) н двадцать 13 с рестагдаддина Бчц (100 мг) В МеТан 0 дь зонансных полос наблюдают (при 182,7 ном метилате натрия, приготовленном (С 1) 1582 (С 6) тдого И 13 д 3 из 46 мг натрия и 0,70 мл сухого ме- (С 13) 149 10097 С 59 8795 (С 15)типового спирта, оставляют в атмосфе- 45 В 06 И 755 (С 9) 11 ЪВ 0 (С 12)9 ре сухого азота на 5 ч и аатем вы- д 9 О д 58 д 2 г 4 д 19 375 3508деляют израстворителя в высокомваку- (С 15).316 29,9 2993 267 (С 19) уме.Полученное аморфноетвердое ведест И 13,4 (С-20) частей на миллион из вопромывают вбензоле,выдерживают на ТМ 8 в диметилсульфоксиде-се. Продукт воздУхе 8 чи перемешиваютс нормальным натрий (52)-5,6-дидегицро-9-деоксн Воднымрастворшчгидроокисинатрия 50 -6,9-эпоксипростагландин Да (синС 0,5 ъи 0 сволучением суспенаиибесцвет тетический натрийпростациклин) полнымелкихкристалловиголъчатойдюрмы. ностью подавляет агрегацию тромбоци Кристаллы собирают, промывают нескольким каплями нормальной водной гидроокиси натрия, сушат на воздухе 55 с получением натриевой соли 9-деокиСИ-6,9 Ц -эпокси- А 5 простагландинатов, вызываемую арахидоновой кислотой (В человеческой плазме, обогащенной тромбоцитами) при 1 иг/мл, н его профиль биологической активности на аорте кролика, брюшной аорте кролика, полоске желудка крысы н толстойкишке крысы совпадает с тем, которьй отвечает натрийпростациклнну, полученному биосинтезом. После сушки на воздухе получают соль, покрытую карбонатом натрия (примерно 3,5 вес.),который защает винилзфирную часть от гидролиза,.катализирУеМ 0 Г 0 Углекислм газом.П р и м е р 3. В течение нескольких часов при комнатной температуре метиловый сложный эфир 55-йод-9 деокси 6 , 9 иэпоксипростагпандина Е,ф обрабатывают 15-диазабицикло-5-ноненом (ДБН). ДБН и йодисты водород удаляют адсорбцией на колонке 510 приготовленной из суспензии 810, в ЕЕ ОАс/Е,Ы 5 О 1 и виниловьй простой эфир злюируют такой же растворяющей системой. ИК спектроскопиейна тонкой пленке УстановленоОтдд 1 о1738 (СО,Ме) и 1696 см-то 9-9). н Ямв с,д,вь,ы 191 д,22 триплет трнплетов 12,3 6,9 и 1 О ГЦ (С-5 ВНнидэовьпй протон) и 5 С ЯМР в Седа-Ед 19 характерным признаком являетси резонанс при 159,8 С 1, 155,8 5(С 5, 84,1 (С-15), 17,3 и 72,2 (С-9,11) и 51,1 (метиловый сложный эфир) частей на миллион из ТМС.Метиловый сложны эфир ВИНИЛ 0 В 0 го простого эфира (52)5 бдИдеГНд ро-Этдеоксн-6,9 Ы-эпоксипростагланди-,на гидролнзуют воднм раствором гидроокиси натрия с получением натри-простациклина (формул 1 С КНаТРН ем).Вьшо установлено, что микросомы,получаемые из различным тканей мле копитающих, каталнзирЮт Ферментаттнвное превращение простагландинэндоперекисей в производное простагландина (в дальнейшем именуемое простацикЛННОМ), КОТОРОЕ не вызывает СЖЗТНЯЗОРТЫ КРОЛНК 8 ВЫЗЫВЗЕТ расслабление полосокбрюшной, брышечной и коронарной артерий, обладает сильным протиВОЗГРЕГИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ В ОТНОШЕНИИ тромбоцитов, является сильным сосудо расширяющим препаратом в отношении всех животных. 5Микросомы, приготовленные из кровеноснык сосудов кролика или свиньисей. Микросомы, приготовленные из легочной ткани кролика и пиролисной ткани крысы, вызывают 25-ное прев 127 А 6214 ращение простагландинэндоперекисей ,В ТО ВРЕМЯ как МЙКРОСОМЫ, ПОЛУЧЕННЫВ гиэ почки, мозга селезенки, печени,сердца, и семенны пузырьков крысы,вызывают 5-нос превращение или даже более НИКУЮ СТЕПЕНЬ превращенияпростагландинэндоперекисей. ПРОСТЕЦИКЛИН В водиойсреде ПРИ комнатной температуре нестабилен,имеет период полупревращения,равны примерно 10 мин- Однако противоагре гнрующая активиостьпростациклнна может сохраняться в течение нескольких дней при его.раствореииш в водной щелочи или сухом ацетоне и хранении раствора при -20 С. Антиагрегирующая активность простациклииа в 10-40 раз выше, чем-активность РСЕ и в 5 . 20 раз выше, чем у РБВ 2, который сам по себе является сильным ингибитором агрегации тромбоцитов. Простациклин может быть получен бносиитетически инкубированием РСС,или РСН, с ммкросомам аорты в под ходящем буферном растворе, например, трис-буффере, примерно в течение2 мин при температуре приерно 22 С. Превращение простагландинендолер,эсней составляет-85.дд Экстракця простациклина достига 1 ется добавлениемк инкубированной Псмеси холодного (0 С) сухого серногозфира. При добавлении холодного эфираферментативная реакця прекращается и простациклин переходит в эфирную.азота через раствор, может быть получен простациклин в виде остатка,который в дальнейшем может быть суспендирован в водном растворе для дополнительной проверкн или растворен в безводном ацетонеи сохранен при-20 С для последующего использования. Микросомн аорты, приеняемые в С смеси, которая подвергается инкубированию, может быть зкстрагированы из аорты свиньи или кролика. Аорты могут быть заморожены в жидком азоте и затем измельчен до порошкообразного состояния. Полученный порошок сус ленднруют в подходящем буферном ра створе и затем гомогенизируют. Гомогенат затем подвергают центрифугировани с целью вьшюления микросомной фракци, которую могут суспенднровать в деионезированной воде и лио г 274 е 2 аагрегации тромбоцитов человеческой К крови в агрегометре Борна (СМ- ЧЕР тел). было показано, что инкубированная смесь оказывает прямое проти- 5 воагрегирующее действие.Простациклин может быть получен существенно аналогичным способом при использовании других тканей, идентичны указанны выше. Повидимому,полу-10простациклни отличается от-других продуктов простагландинзндоперекисей,описанны ранее. По своему биологическому эффекту, оказьшаемому на вы-15 деленные ткани, нестабильности н по сильной противоагрегирующей активности простациклин отличается от РСЕ 2 или РСДЩ . Описано присутствие в гомогенатах некоторых тканей простагландинВ,-изомеразы. Поскольку простациклин являетсяпестабнльным соединением и обладает более сильной противоагрегирующеи активностью, чем Р 6 В это соединение не может быть РСВ,. Более того, простагландин-В,изомераза нуждается в глютзционекак в совместно действующем факторе,и инкубнрованне проводят в отсутствии совместно действующих факторов. РСЕ 3 о Рог, и РСВ, не являются субстратам микросом аорты и, следовательно,15-кето-простагландины и другие продукты простагландинового катаболиз ма не могут рассматриваться как про- 35 стациклин.Простацилин и его соли также оказывают сосудорасшмряющеев действие на кровеносные сосуды и, следовательно, могут использоваться в качестве противогнпертонических препаратов для млекопитающих, в том числе и человека. Тромбоциты могут быть ассимлированы сосудистым эндотелием или внедрены в зндотелиальные клетки. Биохимическое взаимодействие тромбоцитов и сосудистого эндотелия при синтезе простациклина способствуетвосстановлению сосудистого эндоте ЛИЯ, СЛВДОВЗТЕЛЬНО, ПРОСТЗЦНКПНН Н 50его соли могут также использоватьсяв качестве препаратов, ускоряющи заживление ран у млекопитающих, в частности у человека.применяться всякий раз, когда необходимо подавить агрегацию тромбоцитов,снизить адгезионный характер тромбо 55цнтов, а также для лечения и для предотвращенияобразования тромбову млекопитающих, в том числе у людей. Например, они могут приеняться при лечении и профилактик инфарктов миокарда, при лечени заболевания периферических сосудов, для лечения и профилактики послеоперационным тромбозов, для стимулрования раскрытого состояния сосудистых трансплантатовв хирургии и для лечения осложнении артериосклероза и состояний, такихдруги клинических состояний, в которым основная этиология ассоцитгйг ется с липидньш разбалансом или гнперлнпидемей. 7Эти соединения также могут применяться в качестве добавок к крови,к продуктам крови, кровезаменителямются при искусственной циркуляции вне организма и кровеснабжении изолированных частей тела, например, конечностей и органов, независио от того, соединены ли они с донорным организмом, отделены и хранятся, приготовлены для трансплантации или приКРЕПЛЕНЫ К рецмпиенту. При указанны циркуляциях и кровеснабжеии агрегатированные тромбоциты стремятся закупорить кровеносные сосуды и части циркуляционной аппаратуры. Такой закупорки можноизбежать в присутст-. вин простациклина. для указанным целей простациклин нлиего соли могут добавляться постепенно или однократно ил нескольким отдельными порциями в цнркупирующую кровь, в кровь донорного животного, в отделенную часть тела, связанную или несвязанную с реципиентом, или во все перечисленные органы при суммарной постоянной дозе О,ОО 1-10 мг на литр циркулирующей жидкости. Особенно целесообразно применять простацикпин в пабораторной практике на кошках, собакак, обезьянах, кроликах и крысахпри отработке новыщ методов и техники трансплантации органов и КОНЕЧностей.Для достижения терапевтического эффекта применяемые количества простациклина или его солей (в дальнейшем именуемых активными компонентами) меняются в зависимости от схемы лечения. Обычно для млекопитающих