Способ профилактики гиперплазии стенки венозного графта с использованием фотосенсибилизатора

(51) А 611 2106 НАЦИОНАЛЬНЫЙ цЕНтР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОИ СОБСТВЕННОСТИСТЕНКИ ВЕНОЗНОГО ГРАФТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА(73) Патентообладатели Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларусиучреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение Республикан Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр Кардиология Государственное учреждение образования Белорусская ме дицинская академия последипломного образования (ВУ)ский научно-практический центр Кардиология Государственное учреждение образования Белорусская медицинская академия последипломного образования (ВУ)(72) Авторы Шуканова Наталия Андреевна Лобанок Елена Станиславовна Островский Юрий Петрович Янущко Андрей Вячеславович Швед Иван Адамович Владимирская Татьяна Эрнстовна Сугак Наталья Константиновна (ВУ)1. Способ профилактики гиперплазии стенки венозного графта с использованием фотосенсибилизатора, заключающийся в том, что лигированнь 1 й с обеих концов и содержащий аутовенозную кровь графт помещают в (1106) М раствор мероцианина 540 с рН 7,4 при температуре 20 1 2 С, инкубируют в течение 5-10 мин, при этом освещают 3-5 мин светом слайд-проектора с лампой КГМ 150 Вт при плотности мощности излучения 75 Вт/м 2, после чего графт извлекают, снимают лигатуры и промывают физиологическим раствором.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что длина венозного графта составляет 5 см или более.Изобретение относится к сосудистой хирургии и может быть использовано при операциях аутовенозного шунтирования для обеспечения продолжительного функционирования графтов в артериальных позициях.Наиболее близким по сущности и достигаемому результату является способ профилактики гиперплазии стенки венозного графта, принятый за прототип 1. Способ осуще ствляется путем введения гепарина животным, выделения венозного графта (размером 2-3 см) из сосудистого русла кролика, промывания изолированного графта физиологиче ВУ 8970 С 1 200741248ским раствором, содержащим гепарин И папаверин, заполнения графта этим раствором с последующей перевязкой концов вены, охлаждения венозного графта до 2 С и перенесения в раствор 0,01 метиленового синего (рН 7,4), освещения графта в растворе метиленового синего в течение 5 минут светом слайд-проектора (1000 Ш), промывания графта свежим физиологическим раствором и имплантации фотооксидированного графта в венозное русло животного, через 4 недели после имплантации животному венозного графта извлечения его из сосудистого русла для гистологического и морфологического анализа состояния стенки фотооксидированной вены.Недостатком известного способа является проведение эксперимента на мелких животных (кролики), использование сосудов ограниченного размера (длиной до 3 см) с малым диаметром, необходимость создания специального температурного режима (охлаждение венозного графта до 2 С), заполнение графтов физиологическим раствором, содержащим спазмолитики (папаверин) и антикоагулянты (гепарин), применение фотосенсибилизатора(метиленового синего), обладающего неспецифическим взаимодействием с клетками, которое не зависит от типа и функционального состояния клепок, отсутствие данных о функциональном состоянии фотооксидированных вен в отдаленные сроки (более 1 месяца).Задачей изобретения является поиск новых, более эффективных фотосенсибилизаторов для сосудистой хирургии, обладающих повышенной специфичностью к пролиферативноактивным клеткам, в частности к гладкомышечным клеткам стенки вены упрощение метода обработки венозных графтов использование сосудов по размерам, максимально приближенным к сосудам человека с диаметром более 3 мм и продольным размером более 5 см (сосуды получены от собак массой выше 20 кг).Результат достигается тем, что в способе профилактики гиперплазии стенки венозного графта с использованием фотосенсибилизатора путем введения животному гепарина, вь 1 деления венозного графта из сосудистого русла, помещения венозного графта в раствор фотосенсибилизатора, освещения раствора фотосенсибилизатора с венозным графтом в течение определенного времени источником света, отмывки графта культуральным раствором, имплантации фотооксидированного графта в сосудистое русло, в качестве фотосенсибилизатора используют мероцианин 540 (Мц 540), причем освещение венозного графта осуществляют при комнатной температуре (20 1 2 С) функциональная способность фотооксидированного имплантированного графта сохраняется при любой необходимой длине (в том числе 5 см и более) в качестве животных, в частности, используют собак.Мц 540 - флуоресцентный зонд, обладает амфифильными свойствами и имеет отрицательно заряженную группу 2. Мц 540 не проникает внутрь клетки и встраивается преимущественно в гидрофобные области клеточной мембраны, в присутствии сыворотки крови избирательно связывается с незрелыми дедифференцированными и трансформированными клетками 3, что позволило использовать его для определения нарушений в системе кроветворения и при диагностике лейкозов 2. Способность Мц 540 при поглощении света сенсибилизировать инактивацию клетки, с которой он связан, была положена в основу метода экстракорпоральной очистки костного мозга от опухолевых клеток при его аутотрансплантации 4, 5. Из литературных источников неизвестно применение Мц 540 в сосудистой хирургии для профилактики гиперплазии стенки венозного сосуда.Способ осуществляют следующим образом. Проводят предварительную внутривенную гепаринизацию (1,5 мг/кг веса) животного выделяют яремные и бедренные вены,проксимальные и дистальные участки которых перевязывают. Выделенный участок сосуда с лигированными боковыми ветвями, содержащий аутокровь, помещают при комнатной температуре в раствор фотосенсибилизатора (мероцианин 540 в концентрации 104-107 М,рН 7,4), инкубируют при комнатной температуре 5-10 минут, освещают в этом растворе в течение 3-5 минут светом слайд-проектора Пеленг 500 К (лампа КГМ, 150 Вт). Сразу после освещения венозный графт промывают в культуральном растворе, снимают лигатуры с проксимального и дистального участков вены, после чего графт имплантируют в артериальное русло животного (бедренная и сонная артерии). В различные сроки после постановкиЖИВОТНОГО В ЭКСПЕРИМЕНТ ПРОВОДЯТ ОЦЕНКУ функционирования фотооксидированных графтов С минимальным СРОКОМ ЖИВОТНОГО В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 3 месяца.В качестве КОНТРОЛЯ предлагаемого способа ПРОВОДИЛИ имплантацию ВЕНОЗНОГО граф та в сосудистое русло по указанному способу, но без фотосенсибилизированной обработки (венозный графт не помещали в раствор фотосенсибилизатора И не освещали светом).В таблице представлены результаты МИКРОСКОПИИ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ препаратов ПОРезультаты микроскопического и морфометрического исследования венозных графтов.г осве- Фото- Время По г ще сенси Длина после П/П Способ С НИЯ бишь граф- опера Морфология Морфометрия та, см мин. затор ции Проходимость сосуда4 Щ д ованный не- циты положительны на 1 3 . неоинтимы необрабо- дели а-БМ аспп), большое ко- 2 1,94 1 0,61 ммтанныи личество РСЫА венозный положительных клетоктирован- и частично в медии оп ный 4 Не ределяются гладкие мио- Площадьотоокси- циты положительны на неоинтимы 2 5 3 ДелиОп е еляется обт иКонтроль р Дий о ганизонный Интима По способа руъощ р всему перитромб с незначительной(имплан- метру сосуда реканализациеи, с разтирован 3 ме астанием сое инитель замещена СО 3 ный - - - 5 р Д единительной сяца нои ткани на среднюю необрабо- ОбОЛОЧК ЭН ОТеЛИО И тканью. Толщитанный О С) а С на неоинтимы ты т т тв т н в м венозныи П Отюенииуп освета 49,16 1 10,95 графт) р р мкм сосуда. Проходимость сосуда Ва иант сох анена. Эн отелиор р Д Толщина способа циты уплощены, сохра- ИНТИМЫ импланти- нены на всем п отяжении(ованный Ме о п освета Интгма ол 141 023 р р 3 ме- р УТ мкм (Р 0,01). 4 фотоокси- 20 5 Цианин 5 щена равномерно. В несяца Толщина дирован- 540 оинтиме и частично в едии оп еделяются неоинтимы ныи м р 9,29 1 0,36венозныи гладкие миоциты (окра- МКММорфометрия проводилась с помощью вычислительной системы обработки и анализа изображения (Ье 1 са, Германия) на увеличении 400 в 5 полях зрения по всему периметру каждого венозного графта (в каждом поле зрения - по 10 измерений), р 0,05.Тромбоза фотооксидированных (освещенных в присутствии фотосенсибилизатора) венозных графтов не наблюдалось, проходимость сохранена на всем протяжении венозного графта.Использованные параметры морфометрического анализа (определение толщины неоинтимь 1 венозного графта) более Корректны, т.к. в отличие от площади неоинтимы не зависят от диаметра сосуда.Изобретение поясняется конкретным примером.Собаке весом 20 кг проводят внутривенную гепаринизацию (1,5 мг/кг веса) под общим наркозом выделяют бедренные вены, проксимальные и дистальные участки которых перевязывают. Выделенный участок сосуда с лигированными боковыми ветвями, содержащий аутокровь, помещают в раствор мероцианина 540 в концентрации 106 М (рН 7,4),инкубируют при комнатной температуре 5 минут, освещают в этом растворе в течение 3 минут светом слайд-проектора Пеленг 5 ООК (лампа КГМ, 150 Вт). Сразу после освещения венозный графт отмывают от мероцианина 540 в физиологическом растворе, снимают лигатуры с проксимального и дистального участков вены, после чего графт имплантируют в артериальное русло собаки (сонная артерия). В качестве контроля использовали венозный графт, подвергнутый аналогичным процедурам, но без фотооксидации. Через 3 месяца после постановки собаки в эксперимент извлекают венозные графты, оценивают функционирование фотооксидированных и нефотооксидированных графтов и проводят морфометрический анализ стенки сосудов.Таким образом, мероцианин 540 может быть использован в качестве фотосенсибилизатора для профилактики гиперплазии стенки венозного графта. Способ профилактики гиперплазии упрощен за счет исключения процедуры внутривенного введения папаверина, использования аутокрови для заполнения графта вместо физиологического раствора,содержащего спазмолитики и антикоагулянты, исключения процедуры охлаждения.1. Ке-Хйап Ыи, РишйоУашашого, 5 аго 5111 5 е 11 пе а а 11. 1 п 1 пЬйгогу Ейесг оГ Ме 11 у 1 епе В 111 е-1 пбисеб Рпогоохйбайоп оп 1 ш 1 ша 1 Т 111 с 1 еп 1 п 3 оГ Уейп Стай Апп Т 11 огас Бит 1999, 68,р. 84-88.2. Уа 11 п 51 у .Е., Кегсп Е., Еазтоп ТС. Ешр 1 оушеш оГ а шегосуапйпе буе Гог Не бегесйоп оГ шайпапг 1 е 111 осуг 1 с се 115 // Ппйгеб Згагез Рагеш. - 1984. - Не 4, 424, 201, Дан. 3.3. Уа 1 ш 51 у .Е., Еазгоп Т.6., Ке 1 с 11 Е. Мегосуапйпе 540 аз а Пиотезсеш ргоЬе оГ тешЬтапез 5 е 1 есйуе згайпйп оГ 1 е 111 еш 1 с апб йшшагиге Ьешоройегйс се 115// Се 11. - 1978. - У. 13. Р. 487-499.4. 51 еЬег Е, Стай А., Кшеег 6.1., ЗПШЬ К.Е., А 511 КС. Аигоггапзр 1 апгагйоп оГЬопе шаггош айет ригйп шип шегосуапйпе 540 апб 11311 // В 1 оо 1. - 1986. - У. 68.-Р. 292 (аЬзгг).5. 51 еЬег Р. Маггош ригйп Ьу шегосуапше 540-шедший р 11 ого 1 у 515// Вопе Маггош Тгап 5 р 1 а 1 п. - 1987. - У.2 - Р.29.Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.