Производные индотрикарбоцианина в качестве фотосенсибилизатора фотодинамической терапии злокачественных опухолей

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОТРИКАРБОЦИАНИНА В КАЧЕСТВЕ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ(71) Заявитель Научно-исследовательский институт прикладных физических проблем им. А.Н. Севченко (НИИ ПФП)(73) Патентообладатель Научно-исследовательский институт прикладных физических проблем им. А.Н. Севченко (НИИ ПФП)(57) Производные индотрикарбоцианина общей формулы, где 1-Н, СН 3 2-СН 3, С 2 Н 5 3-,в качестве фотосенсибилизатора фотодинамической терапии злокачественных опухолей. Изобретение относится к области биологически активных соединений, в частности к производным индотрикарбоцианиновым красителям общей формулы где 1, 23, 3 С 1 СН 3, 2 СН 3, 3 С 1, 225, 313, 2 СН 3, 31, 2(СН 2)3-СООСН 3, 3 С,которые могут использоваться в качестве активного поглощающего вещества для фотодинамической терапии злокачественных опухолей. Указанное свойство дает возможность предположить использование этих соединений в медицине. Соединения - описаны ранее как активные рабочие вещества жидкостных лазеров. Наиболее близким по структуре, относящемуся к классу цианиновых красителей и аналогичному биологическому действию является соединение формулы,которое может быть использовано в качестве сенсибилизатора фотодинамической терапии рака, однако эффективность при его использовании не высока 1. Лучшим из известных соединений, использующихся для фотодинамической терапии рака является хлорин Е 6 2. Однако при использовании последнего возможно производить лечение только на открытых поверхностях тела, так как область поглощения активного соединения совпадает с областью поглощения тканей организма, кроме того, у этого соединения коэффициент экстинции имеет недостаточно высокое значение. Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на раковые клетки посредством фотодинамической терапии при использовании светового излучения в области прозрачности биологических тканей. Эта цель достигается использованием химических соединений в соответствии с формулой -. Указанные соединения получают конденсацией солей индоленина с перхлоратом 5-диметиламина-3 хлор-2,4-(о-фенилено)-2,4-пентадиен-1-илиден-диметиламмония или перхлоратом 5-диметиламина-3 фтор-2,4-(о-фенилено)-2,4-пентадиен-1-илиден-диметиламмония в уксусном ангидриде в присутствии триэтиламина. Пример 1. Соединение . Смесь 0,36 г (0,001 М) перхлоратом 5-диметиламина-3-фтор-2,4-(о-фенилено)-2,4 пентадиен-1-илиден-диметиламмония 5, 0,61 г (0,002 М) перхлората (2,3-диметил-1,3-диэтилиндолия), 0,1 мл (0,001 М) триэтиламина в 5 мл уксусного ангидрида кипятят 5 мин. После охлаждения добавляют 40 мл абс. эфира и выпавший целевой продукт отфильтровывают, промывают на фильтре водой и сушат. Кристаллизуют из этилового спирта. Получено 0,47 г (73 ), т.пл. 157-158 С, ах 716 нм, 2,2 105 М-1 см. Пример 2. Соединение . Аналогично примеру 1 с использованием соли перхлората (1,2,3,5-тетраметил-3 этилиндолия). Выход 0,49 г (76 ), т.пл. 171-172 С, ах 724 нм, 2,0 105 М-1 см. Пример 3. Соединение . Смесь 0,37 г (0,001 М) перхлоратом 5-диметиламина-3-хлор-2,4-(о-фенилено)-2,4 пентадиен-1-илиден-диметиламмония,0,74 г(0,002 М) перхлората 2,3-диметил-3-этил-1-(карбоксиметилпропил-1)-индолия-, 0,1 мл (0,001 М) триэтиламина в 5 мл уксусного ангидрида кипятят 5 мин. После охлаждения добавляют 40 мл абс. эфира и выпавший целевой продукт отфильтровывают и промывают водой. Кристаллизуют из этилового спирта. Получено 0,56 г (68 ), т.пл., ах 718 нм, 2.4 105 М 1 см. Данные элементного анализа соединений - согласуются с брутто формулой этих соединений. Таблица 1 Данные элементного анализа соединений Соединения Острая токсичность соединений определялась на беспородных белых крысах пола массой 100-150 г при внутривенном способе введения по методу Диксона и Муда. Результаты этих данных приведены в табл. 2. В картине отравления проявляется снотворный эффект, животные засыпают. Смерть наступала без судорожных эффектов. Таблица 2 Острая токсичность соединений Токсичность в мг/кг ЛД 10 ЛД 50 3,3 4,5 3,1 3,5 4,2 5,0 3,1 3,5 4,2 5,0 2 3569 1 Противораковая активность соединений - определялась на белых беспородных крысах пола весом 100150 г. Саркома М 1 крысам прививалась подкожно в паховую область путем введения 0,5 мл 10 -ной клеточной суспензии саркомы М 1. Спустя 7 суток после прививки внутривенно вводили исследуемый препарат в дозе 0,5 мг/кг, после инкубационного периода проводили локальное фотооблучение опухоли. Для уменьшения светорассеяния шерсть над опухолью выстригали и кожу смазывали вазелином. Кинетику накопления препаратов в опухоли и их выведения из организма крыс исследовали путем регистрации флуоресценции. Возбуждение флуоресценции производилось криптоновым лазером -120(647 нм или 676 нм, мощность излучения до 0,6 Вт) или полупроводниковым лазером (807 нм, мощность излучения 0,3 Вт). Регистрация флуоресценции производилась с использованием световодов, что позволило производить измерения на крысах без введения их в состояние нейролептанальгезии через любые интервалы времени. Для оценки противоопухолевого эффекта фотодинамического воздействия проводили измерения наибольшего и наименьшего диаметров опухоли, затем производили расчет среднего диаметра опухоли, который составлял 15-30 мм, и среднестатистической ошибки. Облучение производили полупроводниковым лазером и светом ксеноновой лампы со светофильтрами, вырезающими видимую и ультрафиолетовую часть излучения с дозой 160 Дж/см 2. Морфологические исследования воздействия препаратов на опухоли проводились на основе метода прижизненного окрашивания с использованием синьки Эванса. На основе этой методики производилась оценка функционального состояния сосудистого русла и размеров повреждения тканей опухоли после фотодинамического воздействия. Некроз опухоли определялся визуально после умерщвления животных по размеру окрашенной зоны (табл. 3). Таблица 3 Фотодинамические свойства соединенийпрепарата- полный некроз опухоли по всему объему- некроз опухоли, кроме небольшой полоски по глубине. Таким образом, заявляемое соединение характеризуется выраженным эффектом фотодинамического воздействия на злокачественные образования и может найти применение для создания лечебных препаратов злокачественных опухолей. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.