Способ предварительной диагностики опухолевого заболевания

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕВОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ(71) Заявители Григорович Николай Александрович Григорович Татьяна Михайловна(72) Авторы Григорович Николай Александрович Григорович Татьяна Михайловна(73) Патентообладатели Григорович Николай Александрович Григорович Татьяна Михайловна(57) Способ предварительной диагностики опухолевого заболевания, заключающийся в том, что определяют время обесцвечивания 0,2 мл 0,15 -ного раствора метиленового синего 1 мл сыворотки крови пациента при нагревании до 100 С, содержание фибриногена в крови качественно по рисунку высохшего отпечатка крови на стекле, вычисляют диагностический коэффициент (ДК) по формуле ДК(ВОМС/457,3)-1 К,где ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови пациента, с К - содержание фибриногена в крови пациента, которое при нормальном содержании фибриногена принимают равным 0, а при повышенном содержании - равным 1,и диагностируют наличие опухолевого заболевания при ДК 0 или отсутствие опухолевого заболевания при ДК 0. Предлагаемый способ относится к медицине, а именно к онкологии - диагностике злокачественных опухолей. Возникновение и развитие злокачественной опухоли сопровождаются увеличением содержания в крови грубодисперсного белка - фибриногена. Определение содержания последнего легло в основу выявления злокачественных опухолей легких, толстого кишечника 1, 2. Это многоэтапный метод, требующий отдельного специалиста для его проведения. Для определения фибриногена забирают кровь от пациента в пробирку с антикоагулянтом, осаждают центрифугированием форменные элементы крови, переносят плазму крови в другую пробирку, осаждают фибриноген путем добавления к плазме крови дорогостоящего реактива - тромбопластина, выделяют и отмывают выпавший фибриноген, и переносят его на фильтровальную бумагу (весовой метод) или переносят в другую пробирку с раствором щелочи, и определяют этот белок химическим способом по интенсивности цветной реакции с биуретовым реактивом. На конечном этапе работы высуши 16505 1 2012.10.30 вают и взвешивают фибриноген 1 или же определяют его количество по интенсивности цветной реакции в фотоколориметре 3. Недостатком указанного способа является сложность определения содержания в крови фибриногена. Существует также метод диагностики рака, основанный на описании высохшей капли крови на стекле, в основе изменения которой также лежит повышение концентрации в крови фибриногена 2. Кроме того, развитие злокачественной опухоли и опухолевый рост сопровождаются уменьшением в крови мелкодисперсного белка - альбумина, а также изменением конформации его молекул, снижением содержания в них сульфгидрильных групп. Определение этих параметров альбумина проводят в способе 1, в котором для интегральной оценки количественных и качественных свойств альбумина используют способность содержащихся в нем сульфгидрильных групп обесцвечивать метиленовый синий. Для оценки этой способности альбумина к 1 мл содержащей альбумин сыворотки крови добавляют 0,2 мл 0,15 раствора метиленового синего и определяют время обесцвечивания его коагулятом сыворотки при 100 С. Это время при опухолевом росте удлиняется по сравнению с таковым у здоровых. К сожалению, этот способ предусматривает количественное определение содержания альбумина в сыворотке, что методически сложно, требует специального реактива 3 и поэтому, как правило, не выполняется в клинических лабораториях. Задачей предлагаемого способа является создание высокоинформативного и оптимального по критерию эффективность/стоимость метода диагностики злокачественных новообразований, основанного на оценке качественных свойств альбумина крови обследуемого пациента и качественного определения содержания фибриногена крови. Поставленная задача решается за счет того, что в способе диагностики опухолевого заболевания, заключающемся в том, что определяют время обесцвечивания 0,2 мл 0,15 ного раствора метиленового синего 1 мл сыворотки крови пациента при нагревании до 100 С, содержание фибриногена в крови пациента качественно по рисунку высохшего отпечатка крови на стекле, вычисляют диагностический коэффициент (ДК) по формуле ДК(ВОМС/457,3)-1 К,где ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови пациента, с К - содержание фибриногена в крови пациента, которое при нормальном содержании фибриногена принимают равным 0, а при повышенном содержании фибриногена - равным 1,и диагностируют наличие опухолевого заболевания при ДК 0 или отсутствие опухолевого заболевания при ДК 0. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Сыворотку крови получают стандартным методом. Затем определяют время обесцвечивания метиленового синего коагулятом альбумина сыворотки крови, при этом к 1 мл сыворотки крови добавляют 0,2 мл 0,15 раствора метиленового синего. Окрашенную метиленовым синим сыворотку нагревают в интенсивно кипящей водяной бане до 100 С и по секундомеру определяют время обесцвечивания содержимого пробирки в секундах. Качественное определение фибриногена проводят, как описано в 1, а именно кожу фаланги 1-го пальца, обработанную дезраствором и высушенную, прокалывают. Выступившую первую каплю крови удаляют ватным тампоном. К последующим каплям крови,вытекающим самопроизвольно, последовательно быстро прикасаются предметным стеклом, делая на нем 6-8 отпечатков выступающей крови, не сдавливая при этом палец. Полученные отпечатки крови высушивают на воздухе, рассматривают невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа. При нормальном содержании фибриногена отпечатки высохшей капли крови на стекле, рассматриваемые невооруженным глазом и под микроскопом, представляются в виде гомогенной пленки, пронизанной нитями фибрина. Такую ситуацию обозначают цифрой 0. 2 16505 1 2012.10.30 При повышенном содержании фибриногена в крови пятно высохшей капли крови сплошь пронизано пустыми, свободными от эритроцитов пространствами, так называемыми лагунами. Такую ситуацию обозначают цифрой 1. Полученные при обследовании пациента результаты представляют в виде формулы ДК(ВОМС/ВОМС зд - 1)К,где ДК - диагностический коэффициент ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой обследуемого пациента в секундах ВОМС зд - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой здоровых в секундах (верхняя граница нормы) К - показатель, отражающий уровень фибриногена в крови 0 - нормальный, 1 - выше нормального,и при величине диагностического коэффициента (ДК) больше 0 судят о наличии опухоли,а равной 0 и меньше - об отсутствии опухоли. Собственные исследования проведены на 132 пациентах, из которых 62 человека практически здоровые, а 70 человек - онкобольные, преимущественно с опухолями ранних стадий. Диагноз всех больных подтвержден гистологически. Полученные результаты обрабатывают методами вариационной статистики 4. Находят- среднее арифметическое и- среднюю квадратичную ошибку среднего арифметического. Практически здоровые- 62- 426,21 с 10,36. Доверительные границы средней (3) при 95 доверительном интервале 395,13457,3. В качестве показателя времени обесцвечивания метиленового синего (ВОМС) у здоровых принята величина, равная 457,3 с. Предлагаемый способ характеризуется высокой информативностью и оптимальным соотношением эффективность/стоимость. В заключение приводим примеры использования предложенного нами способа диагностики рака. Пример 1. Пациент Ц. 60 лет. Время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови при нагревании 290 с. Капли высохшей крови на стекле сплошные, фибриноген К (0). ДК(290/457,3-1)00,63-10-0,370. Данных за опухолевый процесс нет. Окончательный диагноз хронический панкреатит. Пример 2. Пациент К. 56 лет. Время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови при нагревании 390 с. Капли высохшей крови на стекле сплошные. Фибриноген К (0). ДК(390/457,3-1)00,85-10-0,150. Данных за опухолевый процесс нет. Окончательный диагноз подагра. Пример 3. Пациент Л. 62 лет. Время обесцвечивания метиленового синего сывороткой при нагревании 650 с. Капли высохшей крови на стекле с лагунами. Фибриноген повышен К(1). ДК(650/457,3-1)11,42-111,421. Заключение может быть опухолевое заболевание. Окончательный диагноз рак желудка. Пример 4. Пациентка Т. 70 лет. Время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови при нагревании 700 с. Капли крови на стекле крови с лагунами. Фибриноген повышен К (1). ДК(700/457,3-1)11,53-111,531. Заключение может быть опухолевое заболевание. 3 16505 1 2012.10.30 Окончательный диагноз рак левой молочной железы,в легкие. Пример 5. Пациентка С. 60 лет. Время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови при нагревании 500 с. Капли крови на стекле крови с лагунами. Фибриноген повышен К (1). ДК(500/457,3-1)11,09-111,091. Заключение может быть опухолевое заболевание. Окончательный диагноз гиперплазия эндометрия. Источники информации 1. Патент РБ на изобретение 12320, 2009. 2. Григорович Н.А., Круглый А.З., Круглый З.Л. Вычислительная лабораторноклиническая система для скрининга злокачественных новообразований. Инструкция по применению. - Минск, 1994. - 47 С. 3. Лабораторные методы исследования в клинике справочник / Под ред. В.В. Меньшикова. - М. Медицина, 1987. 4. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Изд. 3-е. - Минск Вышэйшая школа,1973. - 320 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4