Способ диагностики злокачественного новообразования

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ(71) Заявитель Григорович Николай Александрович(72) Автор Григорович Николай Александрович(73) Патентообладатель Григорович Николай Александрович(57) Способ диагностики злокачественного новообразования у обследуемого, заключающийся в том, что определяют содержание фибриногена и альбумина в плазме крови и время обесцвечивания 0,2 мл 0,15 -ного раствора метиленового синего, смешанного с 1 мл сыворотки крови, при 100 С, вычисляют онкологический диагностический коэффициент ОДК по формуле где ФГ - содержание фибриногена в плазме крови, г/л А - содержание альбумина в плазме крови, г/л ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови, с,и при значении ОДК 19,5 или более диагностируют наличие злокачественного новообразования, а при значении ОДК менее 19,5 диагностируют отсутствие злокачественного новообразования. Предлагаемый способ относится к медицине и ветеринарии, в частности к диагностике злокачественных новообразований у людей и животных. Ранее было установлено, что развитие злокачественных новообразований, а также воспалительной реакции в организме, сопровождается определенным количественным нарушением взаимоотношений между грубодисперсным белком плазмы крови - фибриногеном и мелкодисперсным белком - альбумином. Содержание альбумина в пробе венозной крови определялось унифицированным методом с бромкрезол зеленым, содержание фибриногена также находили унифицированным лабораторным методом, так называемым весовым 12320 1 2009.08.30 методом. Выявление у обследуемого определенного соотношения между указанными белками в плазме крови (0,8 и больше) позволяет заподозрить при диагностике наличие злокачественной опухоли 1. Американские исследователи М. Блэк и другие обнаружили снижение способности сыворотки крови больных злокачественными опухолями обесцвечивать раствор метиленового синего (МС) определенной концентрации во время тепловой коагуляции сыворотки с последующим выдерживанием коагулята при 100 С. Если восстановление метиленового синего коагулятом сыворотки здоровых происходило в течение времени до 9,5 минут, то у онкологических больных это время оказалось большим - 10 и более минут. На основании этих наблюдений был предложен способ скрининга злокачественных новообразований 2. Способ основан на определении степени помутнения плазмы обследуемого после нагревания ее при 100 С в течение 10 секунд. У больных злокачественными новообразованиями величина помутнения плазмы после этой процедуры возрастала на 60 и более. Предложенный М. Блэком и др. способ осуществляется следующим образом. К 1 мл сыворотки крови добавляют 0,2 мл 0,15 -ного водного раствора метиленового синего и нагревают содержимое пробирки на интенсивно кипящей водяной бане до образования коагулята и полного обесцвечивания его при продолжающемся нагревании при 100 С. Затем 1 мл цитратной плазмы обследуемого разводят дистиллированной водой в 5 раз, определяют оптическую плотность разведенной плазмы и нагревают ее в течение 10 секунд на кипящей водяной бане и вновь определяют оптическую плотность этого образца после охлаждения его в воде со льдом до комнатной температуры. При времени обесцвечивания метиленового синего в нагреваемом коагуляте плазмы больше 9,5 минут и степени помутнения разведенной плазмы крови более чем в 1,4 раза ставился диагноз наличия злокачественного новообразования. Недостатком обоих способов является нестандартность и необходимость специального персонала для проведения этих исследований. Кроме того, техническая сторона исполнения способа 2 представляется в настоящее время устаревшей и не имеющей под собой рационального биохимического объяснения остается неясным с позиций биологической химии и коллоидной химии, за счет каких компонентов плазмы крови развиваются феномены, используемые для диагностики злокачественных новообразований по этому способу. Его осуществление требует много времени - более 30 минут на одно исследование, что делает этот способ непригодным для массовых обследований. Задачей предлагаемого способа было создание способа диагностики злокачественных новообразований, основанного в основном на применении унифицированных лабораторных методов исследования, которыми владеют сотрудники всех клинических лабораторий, а также сокращение времени проведения исследований. Задача решается за счет того, что в способе диагностики злокачественного новообразования у обследуемого, заключающемся в том, что определяют содержание фибриногена и альбумина в плазме крови и время обесцвечивания 0,2 мл 0,15 -ного раствора метиленового синего, смешанного с 1 мл сыворотки крови, при 100 С, вычисляют онкологический диагностический коэффициент ОДК по формуле 100 ФГВОМС ОДК,А где ФГ - содержание фибриногена в плазме крови, г/л А - содержание альбумина в плазме крови, г/л ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови, с,и при значении ОДК 19,5 или более диагностируют наличие злокачественного новообразования, а при значении ОДК менее 19,5 диагностируют отсутствие злокачественного новообразования. Способ применяют следующим образом. 12320 1 2009.08.30 У обследуемых определяют содержание альбумина и фибриногена в сыворотке и плазме крови. В качестве антикоагулянта используют 3,8 -ный раствор лимоннокислого натрия,взятый в отношении с цельной кровью 110. Сыворотку получают стандартным путем, удаляя образовавшийся сгусток крови. Определяют время обесцвечивания 0,15 -ного раствора метиленового синего сывороткой крови в процессе коагуляции и последующего нагревания коагулята при 100 С до полного его обесцвечивания. При этом количество фибриногена и альбумина находят унифицированными в СНГ методами 3 фибриноген определяют наиболее точным способом - биохимическим путем (биуретовым методом), альбумин находят с помощью цветной реакции с бромкрезоловым зеленым. Время обесцвечивания коагулятом сыворотки метиленового синего находят по методике 2 к 1 мл сыворотки крови добавляют 0,2 мл 0,15 -ного раствора метиленового синего, смесь нагревают на интенсивно кипящей водяной бане и образовавшийся коагулят продолжают нагревать в этих условиях до полного его обесцвечивания. Время обесцвечивания определяют по секундомеру, в секундах. Полученные результаты обрабатывают методами вариационной статистики, используя стандартный пакет Статистик, находя среднюю арифметическую (М) каждого из исследуемых параметров в группе онкологических больных и в группе практически здоровых лиц, стандартную ошибку средней арифметической (м) и квадратичное отклонение . Затем определяют 99 -ный доверительный интервал средней арифметической. Онкологический диагностический коэффициент ОДК вычисляют по формуле 100 ФГВОМС ОДК,А где ФГ - содержание фибриногена в плазме крови, г/л А - содержание альбумина в плазме крови, г/л ВОМС - время обесцвечивания метиленового синего сывороткой крови, с. Предлагаемым способом было обследовано 406 человек. Когорта обследованных состояла из 2-х групп. Первая группа - онкологические больные 72 человека 1-2 стадий заболевания, преимущественно 2 стадии (все больные 2-й клинической группы) и 226 больных со злокачественными новообразованиями 3 и 4 стадий (2-й и 4-й клинических групп). Таким образом, всего было обследовано 298 больных. Вторая группа практически здоровых состояла из 108 человек. Диагноз злокачественного новообразования во всех случаях подтверждался морфологически. Для каждой из групп обследуемых были получены следующие величины. В группе онкологических больных верхняя граница 99 -ного интервала средней арифметической коэффициента ОДК составляла 22,56, нижняя граница - 24,01 (22,56-//-24,01). В группе практически здоровых верхняя граница 99 -ного интервала составляла 17,25, нижняя граница - 15,58 (17,25-//-15,58). Исходя из полученных значений доверительных границ ОДК при 99 -ной точности,была рассчитана дискриминантная величина этого показателя между группами онкологических больных и здоровых. Дискриминантная величина между доверительными границами средних величин ОДК групп онкологических больных и здоровых оказалась равной 19,5. Таким образом, при значении ОДК 19,5 или более диагностируют наличие злокачественного новообразования, а при значении ОДК менее 19,5 диагностируют отсутствие злокачественного новообразования. На основании полученного материала были рассчитаны основные информационные параметры предлагаемой системы диагностики рака диагностическая чувствительность 82,2 , диагностическая специфичность - 83,3 , диагностическая эффективность 82,5 , диагностическая ценность положительного заключения - 93,2 , диагностическая ценность отрицательного заключения - 62,9 . Таким образом, предлагаемый способ с высокой точностью позволяет из когорты обследуемых выделить здоровых и тех лиц, у которых может быть еще клинически неманифестированное опухолевое заболевание. 3 12320 1 2009.08.30 Сказанное проиллюстрируем несколькими клиническими примерами. Пример 1 Больная Л.И.Д., 68 лет, обратилась с жалобами на боли в животе разлитого характера,слабость. Предварительный диагноз - непроходимость неясной этиологии. По результатам проведенного лабораторного исследования фибриноген - 5,04 г/л, время обесцвечивания метиленового синего в сыворотке крови при коагуляции последней 570 секунд, альбумин 41,5 г/л, величина ОДК - 25,8. Заключение злокачественная опухоль. Лабораторный диагноз подтвержден при хирургическом вмешательстве. Диагностирована аденокарцинома ректосигмоидного отдела прямой кишки. Пример 2 З.Ж.И. Возраст - 40 лет. Фибриноген - 3,87 г/л, время обесцвечивания метиленового синего - 360 секунд, альбумин - 47,8 г/л, ОДК - 15,6. Заключение - практически здорова. Предлагаемый способ может применяться без ограничения в любой клинической лаборатории, так как основан на унифицированных лабораторных методах, и может использоваться при массовых обследованиях. Затрачиваемое на одно обследование время не превышает 15 минут при высокой точности диагностирования. Источники информации 1. Патент РБ 7458 // Официальный бюллетень.-3.- 2005. 2.. ..- 1949.- .16,2.- . 169-174. 3. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В.Меньшикова. - М. Медицина, 1987. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4