Среда для культивирования лептоспирозных бактерий

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ(71) Заявители Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Кондратенко Мария Юльяновна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Кондратенко Мария Юльяновна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(73) Патентообладатели Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Кондратенко Мария Юльяновна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(57) Среда для культивирования бактерий рода , содержащая сыворотку крови овец или кроликов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи фосфатный буфер с 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов гриба 3-8 фосфатный буфер,7,0-7,4 остальное. Изобретение относится к микробиологии, в частности - к производственному культивированию лептоспирозных бактерий, используемых в диагностике и изготовлении вакцин. Для культивирования лептоспирозных бактерий используют следующие питательные среды вводно-сывороточная среда Ферваорт-Вольфа (1928) Кортгофа (1932) Тарасова(1937) синтетические безбелковые среды Шенберга (1967), Торнея (1974), Элленгаузена(1967), Элленгаузена для ветеринарных целей (1976), Рассела (1986), твин-альбумин 14677 1 2011.08.30 сывороточная среда Эллиса, альбуминовая среда ГНКИ (М.А. Бабич, Ю.М. Дигальцев,1965) и др. 1-6. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда Любашенко 3. Среду Любашенко готовят путем фильтрации через бумагу и стерилизации при 1 атм. в течение 30 мин нехлорированной водопроводной, колодезной или речной водой. После охлажденияводы устанавливают 7,3-7,4 и добавляют 5 сыворотки крови кролика или барана, прогретой при 56 С в течение 1 ч. Среду фильтруют через пластинки СФ в приборе Зейтца при небольшом вакууме (660 мм ртутного столба) и асептически разливают в пробирки. Для проверки на стерильность пробирки выдерживают при 37 С 48 ч. При соблюдении всех необходимых условий штаммы лептоспирозных бактерий вырастают в этой среде через 5-7 суток, накопление их не превышает 80-100 млн./см 3 микробных клеток. Цель изобретения - повышение выхода и биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы и буферного раствора добавляют стимулятор. В качестве стимулятора роста лептоспир используют 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов гриба. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для культивирования бактерий родасодержит сыворотку крови овец или кроликов и дополнительно 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи фосфатный буфер с 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 0,4 раствор биологически активных веществ ми 3-8 целия и метаболитов грибафосфатный буфер, рН 7,0-7,4 остальное. Пример 1 Для приготовления фосфатного буфера 1/15 раствора двузамещенного фосфата натрия и однозамещенного фосфата калия данные вещества смешивали в соотношении 73, смесь разводили дистиллированной водой в соотношении 110.устанавливали 7,07,4 добавлением первого или второго растворов и стерилизовали при температуре 120 С в течение 60 минут. Кровь барана дефибринировали, отделяли сыворотку, прогревали при температуре 5658 С в течение 30-60 минут. Прогретую сыворотку фильтровали через стерилизующие фильтры. Сыворотку крови овец, 0,4 раствор биологически активных веществ метаболитов и мицелия грибаи фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 5392. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 750-840 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, вызывала у иммунизированных кроликовв титре 1800 к серогруппам Помона и Тарассови и 1200 к серогруппе Иктерогеморрагия. Пример 2 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 5441. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 720-830 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, вызывала у иммунизированных кроликовв титре 1800 к серогруппам Помона и Тарассови и 1200 к серогруппе Иктерогеморрагия. 14677 1 2011.08.30 Пример 3 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но для изготовления среды использовали сыворотки крови кроликов. Накопление лептоспирозных бактерий составило 810-860 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, обеспечивала проявление иммунной реакции у иммунизированных кроликов в 1800 к серогруппам Помона и Тарассови и 1200 к серогруппе Иктерогеморрагия. Пример 4 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 2148. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 380-420 млн/см микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, обеспечивала проявление иммунной реакции у иммунизированных кроликов в 1400 к серогруппам Помона и Тарассови и 1100 к серогруппе Иктерогеморрагия. Пример 5 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 11980. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 410-430 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, обеспечивала проявление иммунной реакции у иммунизированных кроликов в 1400 к серогруппам Помона и Тарассови и 1100 к серогруппе Иктерогеморрагия. Пример 6 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но 0,4 раствор биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибав среду не добавляли. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 85-100 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из смеси культур лептоспир, обеспечивала проявление иммунной реакции у иммунизированных кроликов в 1400 к серогруппам Помона и Тарассови и 1100 к серогруппе Иктерогеморрагия. В ходе экспериментальной работы нами установлено, что при содержании сыворотки животных в питательной среде менее 5 и более 10 существенно снижается интенсивность роста и деления лептоспирозных бактерий. При содержании в питательной среде менее 3 и более 8 раствора биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаинтенсивность роста и деления лептоспир существенно снижается. Из представленных данных видно, что для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, используемых для изготовления вакцин, целесообразно применять питательную среду, содержащую 5-10 сыворотки крови овец или кроликов, 3-8 раствора биологически активных веществ мицелия и метаболитов грибаи 82-92 фосфатного буфера. Питательная среда вышеуказанного состава обеспечивает накопление лептоспир 720840 млн/см 3 микробных клеток. Источники информации 1. Волина Е.Г. и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. -1. - С. 3-5. 2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и применения вакцин Дисс. д-ра вет. наук. - Москва, 1997. - С. 58. 14677 1 2011.08.30 3. Справочник ветеринарного лаборанта / Ф.З.Андросов, И.Я.Беляев, Р.Т.Клочко и др. / Под ред. В.Я.Антонова. - М. Колос, 1981. - С. 37. 4.3092 1, 1999. 5.1237707 Ф 1, 1986. 6.828459, 1983. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4