Способ клонального микроразмножения Vaccinium corymbosum L.

(12) госуддрствнннов ПАТЕНТНОЕ ведомство РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(54) СПОСОБ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ УАССГЬППМ СОКУМВОЗПМ Ь.Способ клоналъного размножения Уассйпйиш согушЬозцш Ь., включающий эксплантирование исходной ткани на пита тельную среду, культивирование поЛУЧВННЫХ регенерантов, ИХ РЗЗМНОЭКЕние, укоренение и высадку в почвенный субстрат, отличающийся тем, что культивирование И рЭЗМНОЖСНИВ РБГЕНЕРЯНТОБ ОСУЩЕствляют на модифицированной агаризованной среде, содержащей в своем составе 160 мг/л азотнокислого аммония, 202 мг/л азотнокислого калия, 198 мг/л сернокислого аммония,370 мг/л сернокислого магния, 130 мг/л хелата железа, 408 мг/л однозамещенного фосфорнокислого калия, 708 мг/ л азотнокислого кальция, 0,025 мг/л хлористого кобальта, АНБ (ВЧ)(73) Патентообладатель Центральный ботани ческий сад АНБ (В)6,2 мг/л борной кислоты, 16,90 мг/л сернокислого марганца, 8,60 мг/ л сернокислого цинка, 0,25 мг/л молибденовокислого натрия,0,83 мг/л иодистого калия, 80 мг/л аденин сульфата, 100 мг/л мезоинозита, 0,40 мг/л тиамина, 5 мг/л изопентиладенина, 1 мг/л индолилуксусной кислоты, 30 г/л сахарозы и 6 г/л агара, а укоренение регенерантов проводят на почвенном субстрате.Изобретение относится к сфере клонального микроразмножения растений. Область применения сельское и лесное хозяйство, пищевая и медицинская промышленность.Известно, что голубику можно размножать обычными вегетативными и генеративнымиметодами, а также путем клонального микроразмножения 1.Согласно прототипу 2-3 способ клоналъного микроразмножения Уассйпйиш согушьовцш состоит из эксплантирования исходной ткани на питательной среде, содержащей азотнокислый аммоний, азотнокислый калий, сернокислый аммоний, сернокислый магний, хелатжелеза, фосфорнокислый калий однозамещенный хлористый кобальт, борную кислоту, сернокислый марганец, сернокислый цинк,натрий молибденовокислый, мезоинозит, тиамин, сахарозу, агар, индолилуксусную кислоту, изопентениладенин, выращивания полученных регенерантов на среде для ризогенеза и пересадки регенерантов в почвенный субстрат.По нашему мнению, недостатком данного способа размножения является дорогостоящая процедура образования корней у микропобегов на среде для ризогенеза, требующая израсходования валютных реактивов - это во-первых,во-вторых, при отмывании корней от агара происходит их повреждение, что способствует проникновению инфекции и гибели растения.Укоренение 1 п уйго является наиболее трудоемким а следовательно и дорогостоящим этапом в микроразмножении.Задача изобретения заключается в модификации питательной среды прототипа с Целью получения регенерантов, способных образовать корневую систему непосредственно в субстрате, минуя стадию укоренения на питательной среде.Поставленная задача решается тем, что в способе клонального микроразмножения Уассйпйцш согушъозиш, включающем эксплантирование исходной ткани на питательной среде, содержащей азотнокислый аммоний,азотнокислый калий, сернокислый аммоний,сернокислый магний, хелат железа, фосфорнокислый калий однозамещенный, хлористый кобальт, борную кислоту, сернокислый марганец, сернокислый цинк, натрий молибденовокислый, мезоинозит, тиамин, сахарозу, агар,индолилуксусную кислоту, изопентениладенин, размножение регенерантон осуществляют на питательной среде, содержащей вышеуказанные компоненты и дополненной азотнокислым кальцием, иодистым калием, аденином сульфатом при следующем соотношении компонентов в мг/л азотнокислый аммоний азотнокислый калий сернокислый аммоний сернокислый магний хелат железа фосфорнокислый калий однозамещенный азотнокислый кальцийКислотность среды равна 4,8.Модифицированная нами питательная среда позволяет получить регенеранты, способные образовать корневую систему непосредственно в субстрате, минуя стадию укоренения их на питательной среде.В качестве эксплантов используют верхушечные и боковые почки однолетних побегов интродуцированных сортов голубики высокой. Почки с кусочком стебля длиной 10-15 мм промывают 2-3 часа в проточной воде, затем 30 минут в дистиллированной воде для удаления с поверхности эксплантов продуктов феНольною окисления. Экспланты стерилизуют в 0,1 И, растворе диацида или сулемы в течение 10 минут. После стерилизации почки промывают в трех сменах стерильной бицистиллированной воды по 10-15 минут в каждой смене. Срезы стебля обновляют. Стерильные экспланты высаживают на модифицированную нами питательную среду, содержащую в мг/лКислотность среды равна 4,8. Колбы с высаженными эксплантами инкуби руют при температуре 25 С, фотопериоде 16 ч,освещенности 4000 лк, относительной влажности воздуха 60.На жизнеспособных эксплаитах на З-4 день наблюдается рост верхушечной почки и активация пазушных меристем. Спустя З 4 недели материал черенкуют и пересаживают на питательную среду того же состава.Через 6-7 недель инкубирования от каждою микрочеренка получают 3-4 микропобега длиной 20-30 мм.Размноженные таким образом регенеранты высаживают в стерильный субстрат торф перлит, минуя стадию укоренения на питательной среде.Растения высаживают по 10 штук в один горшок, помещают в условия оранжереи с повышенной влажностью воздуха 8 О-90,температурой 25-28 С, освещенностью 5001000 лк, накрывают полиэтиленовым каркасом, что препятствует испарению. По истечении трех недель высаженные растения образуют полноценную корневую систему.Разработанный способ клонального микроразмножения Уассйпйцш согушьоэцщ позволяет исключить из технологического процесса стадию укоренения регенерантов на питательной среде. Это дает преимущество, во-первых, в экономии дорогостоящих реактивов, необходимых для ризогенеза, во-вторых, в сокращении рабочего времени, затрачиваемого на мытье и стерилизацию посуды, приготовление и автоклавирование сред, работу в ламинаре,в-третьих, в уменьшении сроков получения регенерантов, готовых к высадке в почву,в-четъертых, в упрощении процедуры их переноса в субстрат, не требующий отмыва корней от агара.г Государственное патентное ведомство Республики Беларусь.