Ферментационная среда для биосинтеза рифамицина B

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР(71) Белорусское производственное объединение медицинских препаратов БепмедпрепаратыАвторское свидетельство СССР Мг 1522749. кп. С 12 Р 17/18.1989.Изобретение касается биосинтеза рифамицина В. являющегося доминирующим компонентом рифамицинового комплекса,образуемого культурой Мосагсна теопеггапе и суммарно определяемого спектрофотометрически. Из всех компонентоа составляющих комплекс. только рифамицин В служит исходным продуктом для получения лекарственного препарата рифамицина.Для биосинтеза рифамицина В извест но применение ферментационных сред раз личного состава. Недостатком известных ферментационных сред является низкий уровень образования рифамицина В в. производственных условиях. Прототипом изобретения является ферментационная среда по авт, св. М 1522749. обеспечивающая наиболее высокий уровень биосинтеза в области промышленного получения рифамицина В. Среда содержит.(54) ФЕРМЕНТАЦИОННАЯ СРЕДАДЛЯ БИОСИНТЕЗА РИФАМИЦИНА В(57) Использование изобретение относится к получению антибиотиков путем биосинтеза с использованием культур микроорганизмов, а именно к получению рифамицина В. Сущностысреда содержит следующие компоненты. мас. глюкоза 4.07.О сахароза 9,011.0 соевая мука 257-35 фипьтроперлит 0.52.0 аммоний сернокислый О.81.0 аммоний фосфорнокислый двузамещенньлй 0.05-0.О 7 магний сернокислый 0.10.3 мел 1.517 барбитал 038-020 микроэлементы 0.5 вода остальное.мас. глюкоза 2.03.0 сахароза 55-65 соевая мука 2.7-35 аммоний сернокислый 0,6-0.7 аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0.02-0.035 барбитал 0,14-0.17 магний сернокислый 0.10.3 мел 13-14 смесь известных микроэлементов 0.5 вода остальное. В процессе ферментации концентрацию углеводов поддерживают на определенном уровне путем дробного дозирования раствора. содержащего сахарозу и аммоний сернокислый в соотношении 1(0.1 О.125) При этом активностькультуральной жидкости в производствен ных условиях с использованием штамма Р 84 достигает 15150 мкг/мл при съеме с одного аппарата вместимостью 063 м 523 млрд. ед. В культуральной жидкости. получаемой при ислопьзовании ферментационной среды по прототипу, содержится до 10у специфических примесей. состоящих из би ОЛОГИЧВСКИ НЕЭКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ рифа МИЦИНОВОГО КОМППВКСЭ. которыеобразуются конкурентно целевому продукту - рифамицину В.Недостатком ферментационной среды по прототипу является низкий уровень биосинтеза рифамицина В инизкое качество культуральной жидкости за счет образования биологически неактивных примесей.Целью изобретения является повышение выхода рифамицина В и улучшение качества культуральной жидкости.Указанная цель достигается использованием ферментационной среды. .содержащей, мас. глюкоза 407.0 сахароза 9.0-11,О соевая мука 27-35 аммоний сернокислый 0.81.0 аммоний фосфорнокислый двузамещенный 005-007 мел 1.51.1 магний сернокислый 0.10.З барбитал 018-020 фильтроперлит 0,5-2,0 смесь известных микроэлементов 0.5 вода осталь, ное. К Суть изобретения состоит в обогаще Юнии ферментационной среды по основным компонентам на фоне введения в нее фильтроперлита - вещества, не используемого культурой в процессе ферментации. Использование предлагаемой среды Позволяет достигнуть в производственных условиях 19200 мкг/мл рифамицина В при съеме с одного аппарата вместимостью 0.63 мз 6,5 млрд. ед.Это превышает показатели по прототипу на 27 по концентрации рифамицина В и на 24 - по сьему с аппарата. Кроме того, содержание специфических примесей в кул ьтурал ьной жидкости снижается до 5(вместо 10 по прототипу). П р и м е р 1. Биосинтез п вводят в ферментере вместимостью 0.63 м . Продуцент рифамицина В Мосагойа теопеггалег. штамм Р-84. выращивают на ПОСЕВНОЙ среде ИЗВЕСТНОГО состава сначала в колбах. затем в аппаратах вместимостью 0.1 м 3 передают в ферментер вместимостью 0.63 мз, содержащий ферментационную среду следующего состава. мас. глюкоза 5.5 сахароза 10.0 соевая мука 3,1 фильтролерлит 1,25 аммоний сернокислый 0.9 аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0.06 мел 1.6 барбитал 0.19 Магний сернокислый 0.2 Ивестные микроэлементы 0.5вода остальное. Для приготовления фер ментационной среды компоненты вносят в воду в указаном выше порядке. стерилизацию проводят при 117118 С в течение 20 мин. рН среды не корректируется и составляет после стерилизации 7.17.4.Процесс биосинтеза ведут по известному способу (Прототип). В течение ферментации осуществляют периодический контроль количества биомассы и содержания углеводов до тех пор. пока концентрация сахарозыв среде не достигнет 3,5. Далее эту концентрацию поддерживают путем дробной подачи раствора. содержащего 20 сахарозы и 2,3 аммония сернокислого (соотношение сахарозы и аммония сернокислого 120,115). Дозирование продолжается до момента начала автолиза. Количество сахарозы и аммония сернокислого. дополнительно введенное в среду. составляет 7,5 мас. и 0,85 мас. соответствено.Уровень образования рифамицина В со ставляет 19200 мкг/мл. а съем с аппарата 6.5 млрд. ед.П р и м е р 2. Процесс биосинтеза проводят как в примере 1. но с ипользованием ферментационной среды. содержащей. масдЪ глюкоза 4.0 сахароза 9.0 соевая мука 2.7 фильтроперлит 0,5 аммоний сернокислый 0.8 аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0.05 мел 1,5 барбитал 0.18 магний сернокислый 0.1 известные микроэлементы 0,5 вода остальное. Поддержание уровня концентрации сахарозы в культуральной жидкости осуществляют раствором. содержащим 20 сахарозы и 2 аммония сернокислого (соотношение сахарозы и аммония сернокислого 111.1), Количество сахарозы и аммония сернокислого,вводимое дополнительно в среду в процессе ферментации. составляет 7.0 мас. и 0.7 мас. соответственно.Уровень образования рифамицина В составляет 18900 мкг/мл. а съем с аппарата 6.2 млрд. ед. ,П р и м е р 3. Процесс биосинтеза проводят как в примере 1. но с использованием ферментационной среды. содержащей, мас. глюкоза 7,0 сахароза 11.0 соевая мука 3,5 фильтроперлит 2,0 аммоний сернокислый 1.0 аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0.07 мел 1,7 барбитал 0.20 магний сернокислый 0.3 известные микроэлементы 0,5 вода остальное. .Поддержание концентрации сахарозы в культуральной жидкости осуществляют раствором. содержащим 20 сахарозы и 2,5 аммония сернокислого (соотношение сахарозы и аммония сернокислого 1 20,125).Уровень образования рифамицина В со ставляет 18700 мкг/мл, а съем с аппарата 6.35 млрд. ед.По прототипу уровень образования рифамицина В составляет 15150 мкг/мл при съеме с аппарата 5.23 млрд. ед.Формула изобретения Ферментационная среда для биосинтеза рифамицина В с использованием культуры Мосагспа теоътеггале Р-84. содержащая глюкозу. сахарозу. соевую муку. аммоний 5 сернокислый, аммоний фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый. мел. барбитал, микроэлементы и воду. о т л и ч аю щ а я с я тем. что. с цепью повышения выхода целевого продукта и улучшения ка- 10честна, оно дополнительно содержит филь троперлит при следующем соотношении компонентов. мас.ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР6 Глюкоза Саха роза Соевая мука ФильтроперлитАммоний сернокислый Аммоний фосфорнокислый двуэамещенный Магний сернокислый Мел