Штамм Escherichia coli КМИЭВ-38 – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(72) Авторы Ломако Юрий Васильевич Андросик Николай Николаевич Полоз Светлана Васильевна Карпович Валентина Константиновна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М. Медицина, 1967. - С. 224-227.2209081 С 1, 2003.46187 А, 2002.(57) ШтаммКМИЭВ-38 - штамм-антиген. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биотехнологии,и касается штамма, выделенного от телят, больных колибактериозом, обладающего антигенной активностью, и может быть использовано для конструирования диагностических и профилактических препаратов при данном заболевании. Известно, что традиционные штаммы бактерий виданаселяют желудочно-кишечный тракт животных и человека 1. Известны штаммы эшерихия коли О 124, К 72, участвующие в патологических процессах пищеварительного тракта человека 2. Известны штаммы эшерихия коли О 101, О 115, участвующие в патогенезе колибактериоза животных 3. К недостаткам этих штаммов следует отнести тот фактор, что в антигенной структуре их не содержится специфических белков, комплиментарных возбудителям колибактериоза животных, циркулирующим в определенном регионе Республики Беларусь. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, пригодного для конструирования диагностических и профилактических препаратов, обладающего стабильными свойствами, безвредностью, высокой иммуногенностью,наличием в антигенной структуре адгезивного антигена. Поставленная задача достигалась тем, что в качестве штамма-антигена использовали полученный штаммК 99 (КМИЭВ-38), выделенный в 2000 году в колхозе им. Ленина Рогачевского района Гомельской области из фекалий одномесячного теленка,больного гастроэнтеритом. В результате отбора и проведения исследований был селекционирован штамм эшерихия коли К 99-Ф (КМИЭВ-38), отличающийся наличием в антигенной структуре адгезивного антигена К 99. 10978 1 2008.08.30 Штамм бактерийК 99 (КМИЭВ-38) депонирован в коллекции РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси. Использование штаммаК 99 (КМИЭВ-38) для получения монорецепторной диагностической сыворотки или в качестве составной части противоколибактериозной вакцины позволяет применять его в комплексе мер по профилактике колибактериоза телят. Таксонометрическая принадлежность. Согласно определителю бактерий Берджи,относится к 5-й группе факультативно анаэробных грамотрицательных палочек, подгруппе 1 - семейство , роду , виду. Культурально-морфологические признаки. Данный микроорганизм в мазках, приготовленных из бульонных и агаровых культур, при окраске по Граму имеет вид тонких, коротких (0,2-0,72-4 мкм) грамотрицательных палочек. Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Растет в МПБ, в бульоне на основе перевара Хоттингера с интенсивным помутнением среды и образованием на дне пробирки осадка, легко разбивающегося при встряхивании. Культура на плотных питательных средах формирует круглые, блестящие, выпуклые колонии с приподнятым,более оптически плотным центром. На среде Эндо бактерия образует колонии красного цвета с металлическим блеском размером от 0,2 до 0,5 см, с более интенсивно окрашенным центром, на среде Минка колонии растут ви -формах. При -формах наблюдаются ровные края, колонии выпуклые с точкой уплотнения в центре. В биохимическом отношении на средах, содержащих углеводы и многоатомные спирты, штамм ферментирует глюкозу, лактозу, манит, сорбит, арабинозу, мальтозу, ксилозу,манозу, дульцит с образованием кислоты и газа, продуцирует индол, не образует сероводород, не разжижает желатину, не утилизирует цитраты, дает отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, слабо подвижен. Антигенный состав. Имеет в своем составе антиген К 99, О-антигены, не типируемые коммерческим набором О-сывороток, Н-антиген. Чувствительность к антибиотикам. ШтаммК 99 (КМИЭВ-38) чувствителен к канамицину, левомицетину, гентамицину, умеренно устойчив к эритромицину(галлимицину), карбенициллину, спектиномицину (спектаму), стрептомицину, мономицину, устойчив к ампициллину (амписуру), доксициклину, пенициллину, олеандомицину,метициллину, линкомицину, кобактану, амоксициллину (ветримоксину), тетрациклину,окситетрациклину, ристомицину. Вирулентность, иммуногенность. ШтаммК 99 (КМИЭВ-38) патогенен. При внутрибрюшинном введении вызывает гибель белых мышей массой 14-16 г. Иммуногенность штаммаО 18 составляет 100 , антигенность - 8,32 2. Пример 1. ШтаммК 99 выращивали на среде Минка по следующему рецепту, мл фосфатно-буферный раствор ( 7,4-7,5) 950 раствор микроэлементов 2 40 -ный раствор глюкозы 25 10 -ный раствор дрожжевого экстракта 10 10 -ный раствор гидролизата казеина 20. Пример 2. Компоненты в колбе размешивают, затем нагревают смесь до температуры 45-50 С,после чего к ней добавляют 1 мл расплавленного 4 -го раствора агар-агара. Готовую среду (2 -ный агар Минка) разливают в колбы по 100-200 мл и стерилизуют при 0,5 атм,110 С в течение 15 мин, хранят среду не более 1,5 мес. Перед употреблением ее расплавляют в водяной бане и разливают в лабораторную посуду. 2 10978 1 2008.08.30 Пример 3. В бактериологические чашки Петри разливают по 20 см 3 стерильного мясопептонного агара. На застывший агар засевают суточную бульонную культуру. Культивируют при 37 С. Через 24 ч выросшую культуру смывают 0,85 -ным стерильным раствором натрия хлорида из расчета 5 м 3 на 1 чашку. Концентрацию биомассы доводим по стандарту мутности до 10 млрд. микробных клеток в 1 м 3. Источники информации 1. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж.Хоулта. - М. Мир, 1980. С. 141-144. 2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Биргера. - М. Медицина, 1967. - С. 224-225 (прототип). 3. Зайцев В.В., Фроленко Т.В., Дремач Г.Э. Пути конструирования эффективной вакцины против колибактериоза животных. Ученые записки УО Витебская Ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 39. Ч. 2. - Витебск, 2003. С. 29-30. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3