Штамм Pasteurella multocida D 47 L – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(72) Авторы Стрельченя Ирина Ивановна Андросик Николай Николаевич Полоз Светлана Васильевна Андрусевич Андрей Сергеевич Андросик Лилия Дмитриевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(56) Методические рекомендации по изготовлению типоспецифических сывороток и их применению для серологической типизации пастерелла мультоцида. Москва, 1984. - С. 3-9.1100303 А 1, 1984.2103355 1, 1998. Станиславский Е.С. Бактериальные структуры и их антигенность. - Москва Медицина, 1971. - С. 139-153.(57) Штамм 47 КМИЭВ-47- штамм-антиген. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и касается штамма, выделенного от телят, больных пастереллезом, обладающего высокой антигенной активностью и предназначенного для конструирования диагностических и лечебно-профилактических препаратов при данном заболевании. Известен штамм, участвующий в патогенезе пастреллеза крупного рогатого скота 1. При микроскопии в мазках из тканей имеет овоидную форму,длина от 1 до 2 мк, толщина от 0,3 до 0,7 мк. Неподвижна, не образует спор, в культурах на плотных средах имеет удлиненные формы. В препаратах из органов и культур окружена нежной капсулой. Окрашивается всеми обычными анилиновыми красителями биполярно, более интенсивно по полюсам, грамотрицательна. Характеризуется выраженной индивидуальной изменчивостью (полиморфизмом). В мазках из органов и в молодых культурах имеет форму овоида, в культурах на плотных средах становится удлиненной,иногда нитевидной. При добавлении к агару поваренной соли образует различные причудливые формы (шаровидные, колбовидные, нитевидные, зернистые), которые обычно называют инволюционными. Выявлено наличие фильтрующихся форм.- аэроб, может расти и в анаэробных условиях. Культивируется в обычных средах с 6,9-7,0. Температурный оптимум роста 25-30. Развивается и при температуре 0-45 и 5,8-8,0. На косом агаре культура растет в виде вязкой прозрачной слизистой массы. На пластинчатом агаре она образует колонии с мутно-белым центром, окруженным фестончатой каймой, напоминающие кружево или смятые кружевные платочки. В бульоне об 10485 1 2008.04.30 разует поверхностную пленку со спускающимися вниз нитевидными образованиями наподобие сталактитов и хлопьевидный осадок. В качестве стимуляторов роста применяют свежую гемолизированную кровь, а также экстракт из сарцин и живые сардины (кормилки).обладает внутривидовой изменчивостью. Сравнительно легко диссоциирует от -форм, с которыми связана вирулентность, к авирулентным -формам. Этот переход происходит через -формы. Биохимические свойства не разжижает желатины, не образует индола, восстанавливает нитраты в нитриты, ферментирует с образованием кислоты глюкозу, левулезу, мальтозу, галактозу, ксилозу, манит. Антигенные свойства содержит 18 антигенов, из них хорошо изученными являются специфический капсульныйантифагоцитарный термолабильный и неспецифический соматический термостабильный антиген. Кроме капсульного и соматического, содержится токсичный для мышей и крыс антиген, который под действием формалина переходит в анатоксин, гемолизины и другие токсические вещества. Антигенная активность составляет 5,1 2. Устойчивостьчувствительна к высыханию и высокой температуре,кипячение убивает их в течение минуты, нагревание до 60 - в течение часа. От действия 5 раствора фенола погибает через 5-10 минут и 5 раствора лизола - через 2-10 минут 2. Известен штамм, обладающий аналогичными культуральноморфологическими, биохимическими и другими свойствами, но антигенность которого составляет 6,8 2 3. Однако эти известные штаммы обладают недостаточными антигенными свойствами для телят. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, обладающего высокой антигенной активностью для телят. Поставленная задача достигается тем, что штамм 47(КМИЭВ-47) - штамм-антиген выделен из легочной ткани больных пастереллезом телят в 2003 году в колхозе Рассвет Несвижского района Минской области. Штамм 47(КМИЭВ-47) - штамм-антиген депонирован в коллекции микроорганизмов РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси. Коллекционный номер КМИЭВ-47. Таксономическая принадлежность. Микроорганизм отнесен к семейству , виду 47(КМИЭВ-47). Патогенность для животных. Штамм 47(КМИЭВ-47) патогенен для телят и лабораторных животных. Культурально-морфологические признаки. Данный микроорганизм в мазках, приготовленных из бульонных и агаровых культур, окрашенных по Граму, имеет вид мелких грамотрицательных кокко-овоидов размером 0,3-1,50,15-0,25 мкм, располагающихся изолированно, иногда парами, реже цепочками. Культура пастерелл неподвижная, имеет капсулу, спор не образует. В МПБ в первые дни выращивания (24-48 часов) дает легкое равномерное помутнение сред, иногда образуется пристеночное кольцо. На 4-5 день на дне пробирки образуется характерный слизистый осадок с полным просветлением бульона поднимающийся при встряхивании пробирки в виде косички. На простом аминопептидном и сывороточном МПА образует прозрачные колонии с ровными краями, сероватобелого цвета диаметром 2-3 мм. Первичный рост может быть также в виде тонкого налета на поверхности среды. На МПА пастереллы растут в виде нежных мелких росинчатых колоний, слегка опалесцирующих в косопроходящем свете. Биохимические свойства. В биохимическом отношении 47(КМИЭВ-47) слабоактивна. Бактерии обладают способностью ферментировать глюкозу,сахарозу, маннозу, галактозу, маннит и сорбит с образованием кислоты без газа. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная, на индол - положительная. Не продуцирует гемолизин и уреазу. 2 10485 1 2008.04.30 Антигенный состав. Имеет в своем составе капсульный 47 (КМИЭВ-47) и соматический антигены. Другие особенности и маркерные свойства.47(КМИЭВ-47) обладает свойством образовывать интенсивный хлопьевидный флоккулят при взаимодействии с раствором 11000 акрифлавина, оседающий на дне пробирки и не разбивающийся при встряхивании. Способы и условия хранения. Хранят в ампулах при 2 - 4 С после лиофильного высушивания в сахарозо-желатиновой среде в течение 5 лет. Жизнеспособность поддерживается путем пересева на питательные среды - ПЖА, МПА 1 раз в течение месяца при условии хранения при 2 - 4 С. Антигенные свойства. Антигенность штамма 47(КМИЭВ-47) составляет 8,2 2. Иммуногенность штамма 47(КМИЭВ-47) составляет 92 . Вирулентность. Штамм 47(КМИЭВ-47) обладает слабой вирулентностью. Чувствительность к антибиотикам. Штамм чувствителен в более 50 случаев к антибиотикам норфлоксацину, цефатоксиму, энроксилу, цефалексину, гентамицину, канамицину, карбенициллину, рифампицину, пенициллину, левомицетину, доксициклину, окситетрациклину, амоксициллину. 1. Пример выделения штамма 47(КМИЭВ-47) - штамма-антигена. Штамм 47(КМИЭВ-47) выделен при посеве кусочков легких на границе патологической и здоровой ткани на мясо-пептонный бульон с добавлением 0,2 мл аминопептида-2 на пробирку. В первые сутки выращивания отмечали легкое равномерное помутнение среды, иногда образование пристеночного кольца. Через 7-10 дней хранения при температуре 2 - 4 С на дне пробирки образовывался характерный слизистый осадок с полным просветлением бульона. 2. Пример определения антигенной активности штамма 47(КМИЭВ-47). Антигенные свойства изучали в реакции непрямой гемагглютинации в разведении сыворотки до 1024. В качестве антигена использовали бактериальную культуру штамма 47(КМИЭВ-47). Результаты реакции показали, что антигенная активность штамма 47(КМИЭВ-47) составляет 8,2 2. Таким образом, штамм 47(КМИЭВ-47) обладает высокой антигенной активностью - 8,2 2, по сравнению с известными штаммами-антигенами(6,8 2), который может быть использован для конструирования диагностических и профилактических препаратов в качестве штамма-антигена. Источники информации 1. Станиславский Е.С. Бактериальные структуры и их антигенность. - М., 1971. - 47 с. 2. Пяткин К.Д. Микробиология. - М Медицина, 1971. - С. 194-197. 3. Методические рекомендации по изготовлению типоспецифических сывороток и их применению для серологической типизации пастерелла мультоцида. - М., 1984. - 16 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3