Штамм Escherichia coli КМИЭВ-22 – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(72) Авторы Андросик Николай Николаевич Ломако Юрий Васильевич Полоз Светлана Васильевна Карпович Валентина Константиновна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(56) Зайцев В.В. и др. Ученые записки Учреждения образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 39. Ч. 2, С. 29-30.2222592 2, 2004.2035916 1, 1995.(57) ШтаммКМИЭВ-22 - штамм-антиген. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биотехнологии,и касается штамма, выделенного от телят, больных колибактериозом, обладающего антигенной активностью, и может быть использовано для конструирования диагностических и профилактических препаратов при данном заболевании. Известно, что традиционные штаммы бактерий виданаселяют желудочно-кишечный тракт животных и человека 1. Известны штаммы, участвующие в патологических процессах пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных 2. К недостаткам известных штаммов следует отнести тот фактор, что они имеют отличную антигенную структуру. Известны штаммы эшерихия коли 117, 119, участвующие в патогенезе колибактериоза животных 3. К недостаткам этих штаммов следует отнести тот фактор, что в антигенной структуре их не содержится специфических белков, комплиментарных возбудителям колибактериоза животных, циркулирующим в определенном регионе. Это касается и штамма, используемого для создания в Московской ветеринарной академии препарата,применяемого для иммунизации глубокостельных коров с целью профилактики диарей новорожденных телят 4, т.к. в состав его входит штамм, отличающийся по антигенной структуре отсутствием соматического антигена, который имеется у штаммов, выделенных от больных животных из хозяйств Республики Беларусь. Задачей изобретения является селекционирование штамма, пригодного для конструирования диагностических и профилактических препаратов при колибактериозе телят, обладающего наличием в антигенной структуре соматического антигена со стабильными свойствами и высокой иммуногенностью. 10884 1 2008.08.30 Поставленная задача достигается тем, что в качестве штамма-антигена был селекционирован штамм 33, обладающий стабильными свойствами и высокой иммуногенностью по отношению к эпизоотическим штаммам, циркулирующим в хозяйствах Республики Беларусь. Штамм выделен в 2001 году в колхозе Звезда Чаусского района Могилевской области из почечной ткани теленка пятидневного возраста, больного гастроэнтеритом, путем посева ткани почки на среду Эндо с последующим выделением чистых культур, сбора коллекции штаммов и отбора из них активного в антигенном отношении штамма вида, из которого путем селекции выделен штамм 33, отличающегося наличием в антигенной структуре соматического антигена О 33-П, который был определен в реакции агглютинации с монорецепторной сывороткой. Штамм бактерий 33 (КМИЭВ-22) депонирован в коллекции РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси. Таксонометрическая принадлежность. Согласно определителю бактерий Берджиотносится к 5-ой группе факультативно анаэробных грамотрицательных палочек, подгруппе 1 - семейство , роду , виду. Культурально-морфологические признаки. ШтаммО 33 (КМИЭВ-22) при окраске по Граму имеет вид толстых, коротких (0,2-0,72-4 мкм) грамотрицательных, не образующих спор, палочек. Физиолого-биохимические признаки. Растет на МПБ, бульоне на основе перевара Хоттингера с интенсивным помутнением среды, иногда с образованием поверхностной пленки. Культуры на плотных питательных средах формируют круглые, сочные, блестящие, равномерно выпуклые колонии на среде Эндо образовывают колонии красного или малинового цвета с металлическим блеском. На средах, содержащих углеводы и многоатомные спирты, штаммы ферментируют глюкозу, лактозу, манит, сорбит, арабинозу, мальтозу, ксилозу, манозу, галактозидазу и проявляют инертность в отношении адонита, инозита, целлобиоза, оксидазы, продуцируют индол, не образуют сероводород, не разжижают желатин. Чувствительность к антибиотикам. ШтаммО 33 (КМИЭВ-22) высокочувствителен к гентомицину, левомицетину, энрофлоксацину, неомицину, тетрациклину,амоксициллину (ветримоксину), карбенициллину, флюмеквину, спектиномицину (спектаму), линкомицину, колистину, слабочувствителен к стрептомицину, рифампицину, окситетрациклину, мономицину. Вирулентность, иммуногенность, антигенная структура. Штамм 33(КМИЭВ-22) патогенен. При внутрибрюшинном введении вызывает гибель новорожденных телят и белых мышей массой 14-16 грамм. ЛД 50 для белых мышей составляет 2,92109 м.к./0,5 мл составляет 18-ти часовой бульонной культуры. Иммуногенность штамма 18 составляет 100 , антигенность - 8,99 2. Пример 1. Производственный штамм выращивают в течение 8-10 часов (не более 12 часов) при температуре 37 С скорости вращения мешалки в начале культивирования - 70, а в конце 300 об/мин подаче стерильного воздуха в процессе всего периода культивации - 0,1 л/л среды. Через каждый час культивирования отбирают пробы микробной суспензии, определяют уровень накопления бактериальной массы (по оптическим стандартам мутности) и устанавливают рН среды. Понижение рН в растущей культуре до 7 и ниже регулируют подщелачиванием путем добавления 10 -ного растворадо рН 7,6-7,8. Через 2, 4,6 часов от начала засева среду трижды обогащают раствором глюкозы из расчета 0,3 сухого вещества глюкозы на 1 л среды. 2 10884 1 2008.08.30 Пример 2. Выращенную культуру проверяют на чистоту роста микроскопией мазков. Культура должна иметь типичный рост на питательных средах и морфологию бактериальных клеток, характерную для . (в мазках). После окончания срока выращивания концентрация бактериальной массы должна быть в пределах 8-12 млрд. м.т. в 1 мл. Концентрацию определяют по стандарту мутности. Источники информации 1. Исмегулова Ф.М. Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной вакциной с целью профилактики диарей новорожденных телят Автореф. дис. канд. вет. наук МВА,1994. - С. 15. 2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. - М. Медицина, 1967. - С. 224-225. 3. Зайцев В.В., Фроленко Т.В., Дремач Г.Э. Пути конструирования эффективной вакцины против колибактериоза животных. Ученые записки УО Витебская Ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 39. Ч. 2. - Витебск, 2003. С. 29-30 (прототип). 4. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. - М. Мир, 1980. С. 141-144. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3