Штамм Escherichia coli КМИЭВ-18 – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(72) Авторы Ломако Юрий Васильевич Андросик Николай Николаевич Полоз Светлана Васильевна Карпович Валентина Константиновна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(56) Зайцев В.В. и др. Ученые записки Учреждения образования Витебская Ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины,2003. - Т. 39. - Ч. 2. - С. 29-30.2232189 1, 2004.2222591 2, 2004.(57) ШтаммКМИЭВ-18 - штамм-антиген. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биотехнологии,и касается штамма, выделенного от телят, больных колибактериозом, обладающего антигенной активностью, и может быть использовано для конструирования диагностических и профилактических препаратов при данном заболевании. Известно, что традиционные штаммы бактерий виданаселяют желудочно-кишечный тракт животных и человека 1. Известны штаммы, участвующие в патологических процессах пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных 2. Известны штаммы эшерихия коли О 8, О 55, участвующие в патогенезе колибактериоза животных 3. К недостаткам этих штаммов следует отнести тот фактор, что в антигенной структуре их не содержится специфических белков, комплиментарных возбудителям колибактериоза животных, циркулирующим в определенном регионе. Это касается и штамма, на основе которого в Московской ветеринарной академии создан препарат, применяемый для иммунизации глубокостельных коров с целью профилактики диарей новорожденных телят 4,т.к. в этот штамм не входит антиген, который играет роль в патогенезе колибактериоза телят в условиях Республики Беларусь. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, пригодного для конструирования диагностических и профилактических препаратов при колибактериозе телят, обладающего наличием в антигенной структуре соматического антигена со стабильными свойствами, безвредностью, высокой иммуногенностью. Поставленная задача достигается тем, что в качестве штамма-антигена был селекционирован штамм 18-М (КМИЭВ-18), обладающий стабильными свойствами 10979 1 2008.08.30 и высокой иммуногенностью по отношению к эпизоотическим штаммам, циркулирующим в хозяйствах Республики Беларусь. Штаммвыделен из мозговой ткани теленка однодневного возраста,больного гастроэнтеритом в 2001 г. в колхозе им. Карла Маркса Воложинского района Минской области путем посева мозговой ткани на среду Эндо с последующим выделением чистых культур, сбора коллекции штаммов и отбора из них активного в антигенном отношении штамма вида, из которого путем селекции выделен штамм 18- (КМИЭВ-18), отличающий наличием в антигенной структуре соматического антигена 018, который был определен в реакции агглютинации с монорецепторной сывороткой. Штамм бактерий 18-М депонирован в коллекции РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского Национальной академии наук Беларуси под номером КМИЭВ-18. Таксонометрическая принадлежность. Согласно определителю бактерий Берджиотносится к 5-й группе факультативно анаэробных грамотрицательных палочек, подгруппе 1 - семейство , роду , виду. Культурально-морфологические признаки. При окраске по Граму штамм имеет вид толстых, коротких грамотрицательных, не образующих спор, палочек размером 0,2-0,72-4 мкм, расположенных одиночно, парами, реже группами. Физиолого-биохимические признаки. Растет на МПБ, бульоне на основе перевара Хоттингера с интенсивным помутнением среды, иногда с образованием поверхностной пленки. Культуры на плотных питательных средах формируют круглые, сочные, блестящие, равномерно выпуклые колонии на среде Эндо образовывают колонии красного или малинового цвета с металлическим блеском. На средах, содержащих углеводы и многоатомные спирты, штаммы ферментируют глюкозу, лактозу, манит, сорбит, арабинозу, мальтозу, ксилозу, манозу, галактозидазу и проявляют инертность в отношении адонита, инозита, целлобиоза, оксидазы, продуцируют индол, не образуют сероводород, не разжижают желатин. Чувствительность к антибиотикам. Штамм 18-М (КМИЭВ-18) высокочувствителен к энроксилу, левомицетину, тетрациклину, неомицину, гентамицину, неомицину, канамицину, флюмеквину, спектиномицину (спектаму), мономицину, умеренно устойчив к доксициклину, олеандомицину, линкомицину, амоксициллину (ветримоксину),окситетрациклину, ристомицину. Вирулентность, иммуногенность, антигенная структура. Штамм 18-М(КМИЭВ-18) патогенен. При внутрибрюшинном введении вызывает гибель новорожденных телят и белых мышей массой 14-16 г. ЛД 50 для белых мышей составляет 2,4510-9 м.к./0,5 мл 18-ти часовой бульонной культуры. Иммуногенность штамма 18- составляет 100 , антигенноеть - 8,64 2. Отличительным признаком штамма 18-М является наличие в антигенной структуре соматического антигена О 18. Пример 1. Штамм 18- (КМИЭВ-18) выращивали на среде Эндо следующего состава дистиллированная вода 1000,0 питательный агар, сухой 26,5 ЭКДА 1,22 фуксин основной 0,23 сахар молочный 10,7 динатрийфосфат 0,48 сульфит натрия безводный 0,83 натрий углекислый ( 7,20,2) 0,03. Оптимальная температура инкубирования 37 С. 2 10979 1 2008.08.30 Источники информации 1. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред.Дж. Хоулта. - М. Мир, 1980. С. 141-144. 2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. Биргера М.О. - М. Медицина, 1967. - С. 224-225. 3. Зайцев В.В., Фроленко Т.В., Дремач Г.Э. Пути конструирования эффективной вакцины против колибактериоза животных. Ученые записки УО Витебская Ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 39. Ч. 2. - Витебск, 2003. С. 29-30 (прототип). 4. Исмегулова Ф.М. Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной вакциной с целью профилактики диарей новорожденных телят Автореф. дис. канд. вет.наук,1994. - 15 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3