Штамм FRICHOSPORON KASHIWAYAMA-продуцент вещества, обладающего стимулирующим действием на репаративные процессы кожи, и способ получения вещества, обладающего стимулирующим действием на репаративные процессы кожи

Изобретение относится к икробио логи, в частности к микробиологическому производству лекарственны средств.Цель изобретения разработка слособа получения вещества, используе мого для стимуляции репаративныш процессов кожи, и вьшвление штаммапродуцента, способного вырабатывать ве 10шество, обладающее стимулирующим дей ЕТВНЕМ на РЕПЕРЕТНВНЫЕ ПРОЦЕССЫ КОЖНо0 глюкоза В-галактоза мальтоза, рафиноза-, сахароза, лактозалактатнатрия Вксилоза эритрит Вманнит, Ъсорбоза, инозитол-,трегапоза- В-арабннозат, Ьарабиноза-, сукцинат натрия, цитрат нат ТО-суток при 25 С наблюдаются клетки, Штамм Т 1 сЬоврогоп казЬ 1 иауата депонирован в коллекции культур НИИ ферментации, Яирння, под номером РЕКИ-Ф д 821 и характеризуется следующими признаками.Форма и размер (жидкая-среда на солодовом экстракте МЧ).рия, ацетат натрия ннулнн раст 15 воримый крахмале, этанол, глицерин целлобиоза-, ( используется, не используется). Использование нитратов не используется. Т 20 Использование нитритов не ис пользуются Использование зтиламина гидрохлорида не используется. Разложение глюкозида (арбутин)25 разлагается. Образование ЗНЗПОГОВ КБЗХМЭЛЗЕНЕмеющие прямоугольную или овальную форму и размер (3 д)ж (220)мкм, после проведения культивирования в течение 5 сут и более форма клетокобразуется. становится нерегулярной ц, наконец, Образование пигмента не образу клетки становятся мицелиоидными. етсН Об азование псевдом елия (К ль р Ц У 30 Образование сложных эфиров об тура не предметном стекле, культуральная среда агар с картофельным экстрактом).коагулирует. Клетки псевдогифальные или псевдо . Потребность в витамнак не треММЦЕЛИЕПЬНЫЕ, ИМЕЮТ ХЭРЗКТЕВНЫЭ ЗИГ буетзагообразные артроспоры но без ко 35 . индий ч Устойчивость к соли критическая .д А концентрация 6-82 (мас./об). Аскоспоры. Аскоспор клетки не Оптимальная темература 25 С. имеют. Оптимальное значениерН 5,0. Баллистоспоры. Баллистоспор клет до Разложение мочевины не разлагаЮн не имеют. етсн. Кулвтуральные признаки. Рост при 37 С не растет. Колония на агаровой культуральной Образование кислоты из глюкозы среде со штриховой разводкой (ага- не образуется. ровая культуральная среда на солодо- 45 Устойчивость к циклогексимду еом экстракте МЧО. резистентен. Тускпая белая, волосовидная и гру Жиры и масла разлагает. бая поверхность, очень мягкая, без Выделяет при культивировании на подъемов, но с реснитчатой перифери среде, состоящей из 0,3 (мае./об.) ческой частью. 7 Ц 59 глюкозы, 0,5 (мае./об.) снятого Пленка на жидкой культуральной сре молока и,0,05 (мае./об) дрожжевого де (вицкаякультуральная среда на экстракта, при рН 4,0-6,0 при 20-3 ОС солодовом экстракте М). в течение 20 ч биологически актив Белая, воцосовидная, клопьевицная ное вещество, и фильтрат, содержаН прочная ПЛЕНКЗ. 55 ЩНЙ данное ВЕЩЕСТВО, ИМЕЕТ СЛЕДУЮНа 50 (мае/мае) глюкозном агаре ще свойства. рост отсутствует, на 602 (нас/нас) Бесклеточныйочищенный фильтрат агаровой среде с дрожжевым экстрак надосадочной жидкости культУралъно том не растет. го продукта содержит небольшие ко 3 1327791 лнчества аминокислот, сакаридов н липидов. При проведении количественного анализа фильтрата оказалось,что суммарный азот составляет 0,0050015, адсумщариый фосфор - 0,004 ч ОО 14.Фильтрат представляет собой прозрачную жидкость цветом от бесцвет 10 ного до слабо желтоватого и имеет слабый запах.20 мл фильтрата унаривают на водяной бане до уменьшения объема при 15 блнзитепьно до 50 мл. Затем к концентрату добавляют 1 мл раствора иин гидриновой пробы. После нагревания смеси в течение 30 мн жидкость преобретает фиолетовую окраску. 20 5 мл азотной кислоты добавляют кконцентрату полученному проведением Упариваннем по известной методике, и смесь кипятят в течение 20 мин. После охлаждения смеси ее нейтрализуют 25 10 ным раствором гидроокиси натрия. Затем к смеси добавляют 2 мл раство ра аммониймопибдатной пробы. Если смесь нагревают, жидкость приобрета ет желтоватую окраску. Если к жид 30 кости добавляют 102 ный раствор гидроокиси натрия, она становится бесцветной.К 5 мл фильтрата добавляют 10 мг индола н 2 мл клористоводородной кис 35 лоты, и смесь встряхивают достаточное время. Когда смесь затем нагревают в течение 10 мин, жидкость ста 5новится красной . Физические характеристики до Удельный весКоэффициент пре потения (п) г, 330-1 340Остаток после испа рения,2 0520 Содержание воды6,25) Следы Содержание липидов 55Содержание эолы 1 Содержание сакара,2 Суммарное содержание сухого вещества,Кислотность по титро 10ванию, число мл 1 н шеПОЧИ, оттитрованньгх ДЛЯ нейтрализации 100 гСодержание азота в фор ме летучих оснований, нъ.лСодержание тяжелых металлов Св виде РЬ)0,01 ч/мин) Не вьшвле но (пределНе выявлено предел детектирова ния 0,11)Число дрожжей Содержание пропионовой кислотыСложный эфир пгидро ксибенэойной кислотыСуммарное содержание внтамна ССодержание пантоге новой кислоты, мг.2 0 Содержание холинаНе выявле но (предел детектирования 2 мг.2) 45Нин 0,03) Содержание фолиевой кислоты Не выявлено (предел детектирования 1 мкг.) Не выявлено (предел детектироваНин, 0,03 мг 2)(предел детектирования 0,02 мг.2) Значение рН 4,9 Амнокислотный состав амнокнсло ты в 100 г образца(Цистин метод окисления надмуравънной кислотой, триптофан анализ с помощью микроорганизмов) Аргинин менее 0,01 Лизин менее 0,01 Гистидин менее 0,01 Фенилаланин Менее 0,01 Ь Тирозин Менее 0,01 Лейцин Менее 0,01 Изолейцин- Менее 0,01 Метионин Менее 0,01 Валин Менее 0,01 Аланин Менее 0,01 Глицин Менее 0,01 Пролин Менее 0,01 Глутамновая кислота Менее 0,01 Серин Менее 0,01 Треонин Менее 0,01 Аспарагиновая кислота Менее 0,01 Триптофан Менее 0,01 Цистин Менеет 0,01Бесклеточная стерильная надосадоч нан жидкость может быть использована в качестве дерматологического лекарственного аппарата н без концентрирования. Однако предпочтительно концентрировать бесклеточную стерильную надосадочную жидкость. Кроме того,ВОЗМОЖНО ПРИМВНЕННЕ КОНЦЭНТРТЗ С высокой степенью концентрирования,превышающей 25, или сухого продукта. Подобный концентрат, имеющий ВЫСОКУЮ СТЕПЕНБ КОНЦЕНТРЕЦИ ИЛИ.в качестве дерматологического лекарственного препарата. Кроме того,Дерматологический препарат может быть, получен смешиванием подобного кон 5основой или другим Носителем. Результаты испытания на токсич Аность с использованием куриного эмб- Юриона показывают, бесклеточный стерильный концентрат (степень концентрирования 4) токсичностью не обладает. Результаты кожной аплергид ческой пробы на теле человека и пробы на непрерывное раздражение кожи человека показывают, что кондентрат совершенно нетоксичен для кожи человека. Результаты пробы на раздраже ние слизистой оболочки глаза кролика 20показывают, что концентрат не является раздражителем совсем. Результаты антибиотической пробы показывают, что концентрат не содержит ан тибиотических веществ. 25Дерматологический препарат оказы вает лечебный эффект в отношени кожньш пятен, потрескавшейся кожи, контактных дерматитов и обожженойПроба на излечение кожных пятен. Отбирают 621 женщин, имеющих кож 15 гические госпитали (150 женщндерматит, предположительно вызван причинами, не связанными с Данным лечением. Долл пациенток, для которых наблюдается значительное или УМЕРенное улучшение, составляет 802. Кроме того, у 60 из 365 женщин, у котопых состояние существенно улучхша- лось, пятна на коже исчезли полностью.Проба на излечение трепшн кожи и мелких морщнон.Для банной пробы отбирают 962 жен ЩИН ИЗ числа ШФСТУХТНВЕЧНХДЕРМЗТО-ПО в возрасте 25-30 лев, 218 женщин в возрасте 30-35 лет 248 женщин в возрасте 35-40 лет, п 72 женщины в возрасте 4 О 5 О лет и 174 женщины в возрасте свыше 45 пек. После, промывания КОЖИ ЛИЦЕ. ПОРЬЪ КОЖИ СТКРЫВЗЮТСЯ 030 ном и паром, на кожу лица плотно наКПЭДЫВЭЮТ марш, ПРОПИТННУЮ КОНЦЕНТ ратом (степень концентрирования 2) дбесклеточной надосацочной жидкостии марлю покрывют лентой из пленки Багап-Ыгар. Обшчение инфракрасными лучами проводят в течение 152 Оммн ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ЗПЕОНИКЗНИЯ кондентра та в кожу. Обнружено, что послеодной обработки потрескавшаяся кожа значительно улучшилась у 698 женщинные пятна на лице,3 аисключением (732), сравнительно улучшалась у пациентов имеющх заболевание женщин (162), состояние не изпечени или гинекологические иаруше 35 МеНИд 09 т .У 2 женщин (32)ния, а также беременныш женщн, поступивших в дерматологические гос питали для Излечения кожных пятен.,После проживания лица кожные поры от и состояние не укудшилось ни у одной из женщн, остается 36 женщин(42 . Хчитвая тот факт, что растрескивание кожи развивается в конечномкрывают воздействием озона И параи на 40 5 ЧдТе Е МЕЛКИЕ НПРЩНнКИ можно счи область нахождения пятен наносят марлю, пропитаннуюконцентратом (степень концентрировании 2)-бесклеточь ной надосадочной жидкости. Нанесенную марлю покрывают лентой пленки марки агап-Икар И производят облучение инфракрасными лучами для улучшения проникновения концентрата в кожу. Эту.обработку проводят раз в недепю и продолжают в течение 3 мес. ОЕ-на- 50 ружено,что состояние сильно улучшилось 363 женщин (58,42) чостоиние сравнительно улучшилось у 122 жен щн (19,82), никакого улучшения у 55 133 женщин (21,4), состояние ухудшилось у одной женщины (0 О 2) и контактный дерматит возник у остальных двух женщин (0,03). Контактныйтать, что концентрат, являют/тиса эффективным с топки зреня лечения растрескивания ножи, оказывает профилактический эффект, препятствуяПроба на лечебный эффект в отноШЕНИИ КОНТЗКТННХ ДЕРМДТИТОВ.Выбрана женщин, 21 год, страдающая сыпью и жженом на веках обоих глаз, возникаащими на следующий день после смены теней для век Фирма А на тени для век фирмы Б,диагноз контактный дерматит. Дерматологом на пораженные участки на несена марля, ПРПЗНТЗННЗЯ НОНЦЭНТРЗ том (степень конввнтрирования 2) бесклеточной надосаддчной жидкости. Не использовалось никаких стероид