Ингибитор размножения пикорнавирусов

низме. Недостатком коргликона является отсутствие пероральных лекарственных форм(препарат нестоек И малоэффективен при приеме внутрь) 3, с. 348, что ограничивает его возможное использование при вирусных инфекциях.Наиболее высокой противовирусной активностью обладают препараты строфанта, в частности строфантин 1, 6. Недостатком строфантина является обязательное внутривенное применение (препарат нестоек и малоэффективен при приеме внутрь), а также наличие противопоказаний при острых миокардитах и эндокардитах 3, с. 346. Последние же входят в спектр заболеваний, вызываемых чувствительными к действию строфантина пикорнавирусами.Техническая задача изобретения заключается в поиске среди сердечных гликозидов препаратов, обладающих противовирусными свойствами, удобных для применения по новому назначению и не обладающих нежелательным побочным действием.Технический результат достигается применением препаратов горицвета.Препараты горицвета как сердечно-сосудистые средства близки к препаратам наперстянки, однако обладают более мягким действием, без опасности проявления токсической фазы фармакологического эффекта и кумуляции в организме 3, с. 344.Новизна изобретения заключается в использовании препаратов горицвета по новому назначению.О противовирусных свойствах препаратов горицвета не было известно, и обнаружение такого эффекта явилось неожиданным. Из данных патентной литературы (проведен поиск по базам данных Роспатент, ПЗРТО, 1 ВМ (Ве 1 р 111 оп) 1 ше 11 есша 1 Ргореггу Ыегшотк, Еигореап рагеш оШсе, глубина до 1972 г.) и научно-технической (проведен поиск по базе данных МебПпе, глубина до 1966 г., РЖБ, глубина до 1960 г.) видно, что экстракты растений могут быть использованы в качестве противовирусных средств 7, 8, однако сведений о противовирусных свойствах препаратов горицвета не обнаружено. Следовательно, заявляемое решение имеет изобретательский уровень.Изобретение является промышленно применимым, поскольку возможно использование в здравоохранении.Сущность изобретения иллюстрируется примерами.Водный настой травы горицвета готовят по стандартной прописи (1 пГ. 11 егЬае А 1 оп 1115 уегпа 115 ех 6,0180,0). 6,0 г травы помещают в керамическую или эмалированную посуду,заливают 180,0 мл дистиллированной воды, доведенной до кипения, закрывают крыщкой и настаивают в течение 20 мин. Готовый настой процеживают через многослойную стерильную марлевую салфетку.При проведении испытаний противовирусной активности используют культуру пассируемь 1 х кожно-мыщечных клеток эмбриона человека (ПКМЭЧ) или перевиваемую культуру клеток рабдомиосаркомы человека (КВ). Монослойную культуру клеток, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют 0,01-0,001 ТЦИД 5 о/клетка вируса ЕСНО 6 путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 час при 37 С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают средой поддержки (среда 199), содержащей различные разведения настоя. После 48 ч инкубации при 37 С регистрируют морфологические изменения монослоя клеток (цитопатическое действие (ЦПД) вируса, увеличение 80). Находят минимальное разведение настоя, в присутствии которого развитие ЦПД вируса подавляется на 50 (ТЦД 5 о). Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса.Водный настой травы горицвета обладает выраженной способностью подавлять размножение вируса ЕСНО 6 в культуре клеток (табл. 1). Снижение урожая вируса в сравнении с контролем превыщает 4,11 13 ТЦД 5 о/мл, диапазон нетоксичных разведений настоя с антивирусным действием - более 16,7 (от 150 до 12800 и более).Противовирусные свойства водного настоя травы горицвета в отношении вируса Е С Н О 6Разведение или Урожай вируса150 2,00 5,30 ВО НЫЙ На 12100 стй травы 12200 254 О 1 О 16 7 12400 2,840, 14 горицвета 12800 3,190,07 Контроль 7,300,07Противовирусное действие водного настоя травы горицвета более выражено, чем действие строфантина. Результаты, получаемые при испытании противовирусных свойств строфантина, нестабильны в повторных экспериментах концентрации препарата, в которых удалось зарегистрировать противовирусное действие, часто оказываются токсичнь 1 ми.Настойку травы горицвета (Т-гае 11 егЬае Абоптбтз уеша 115) готовят по стандартной прописи на 70 этиловом спирте. 1 часть травы заливают 4 или 9 частями спирта И настаивают в течение 7 дней при комнатной температуре и затем - при 6 С в течение такого же времени. Полученную настойку отфильтровывают.Испытания противовирусной активности проводят согласно описанию, приведенному в примере 1.Настойка травы горицвета обладает выраженной способностью подавлять размножение вируса ЕСНО 6 в культуре клеток (табл. 2). Снижение урожая вируса в сравнении с контролем превышает 1,30 15 ТЦД 50/мл, диапазон нетоксичных разведений настоя с антивирусным действием - более 16,7 (от 12400 до 126400 и более). Степень противовирусного действия несколько менее выражена в сравнении с водным настоем.Таблица 2 Противовирусные свойства настойки травы горицвета в отношении вирусаЕ С Н О 6Урожай вируса Разведение титр вируса, разность с контролем, ХТИ 13 ТЦД 5 о/мл 15 ТЦД 50/мл 12400 3,120,14 4,18 12800 3,450,11 3,85 121600 6,000,14 1,30 17 1 123200 5,090, 14 2,21 0126400 4,460,10 2,84 Контроль 7,300,07 В 16920 С 1Готовые лекарственные формы, в состав которых входят экстракты И компоненты горицвета (экстракт горицвета сухой, микстура Бехтерева, препараты Адонис-бром,Адонизид, Кардиовален), растворяют в стерильной бидистиллированной воде для получения необходимых концентраций.Испытания противовирусной активности проводят согласно описанию, приведенному в примере 1.Готовые лекарственные формы, в состав которых входят экстракты и компоненты горицвета, обладают выраженной способностью подавлять размножение вируса ЕСНО 6 в культуре клеток (табл. 3, в таблице приведены данные испытания препарата Адонисбром). Снижение урожая вируса в сравнении с контролем превышает 3,54 1 ТЦД 50/мл, диапазон нетоксичных концентраций с антивирусным действием - 33,3 (от 400 до 12 мкг/мл).Таблица 3 Противовирусные свойства готовых лекарственных форм горицвета в отношении вирусаЕ С Н О 6Урожай вируса Концентрация,Препарат МКГ/МЛ титр вируса, разность с контролем, ХТИ 1 ТЦд 5 о/Мл 1 ТЦд 50/МЛ 400 6,0 3,54 200 6,0 3,54 100 6,0 3,54 Адонис- 50 7,700,44 1,84 33 3 бром 25 8,00 О,44 1,54 12 8,410,46 1,13 6 8,930,47 0,61 Контроль 9,540,49 - по обшей массе таблетки. Пример 4 .Готовят водный настой травы горицвета по стандартной прописи (пример 1).Испытания противовирусной активности проводят согласно описанию, приведенному в примере 1, используя вместо вируса ЕСНО 6 риновирус 13 типа.Водный настой травы горицвета обладает выраженной способностью подавлять размножение риновируса в культуре клеток (табл. 4). Снижение урожая вируса в сравнении с контролем превышает 2,50 15 ТЦД 5 о/мл, диапазон нетоксичных разведений настоя с антивирусным действием - более 33,3 (от 12100 до 123200 и более).Таблица 4 Противовирусные свойства водного настоя травы горицвета в отношении риновирусаУрожай вируса Разведение титр вируса, разность с контролем, ХТИ 1 ТЦд 50/МЛ 1 ТЦдзо/Мл 12100 2,00 2,50 12200 2,00 2,50 12400 2,00 2,50 12800 2,00 2,50 33,3 121 600 2,00 2,50 13 200 2,00 2,50 Контроль 4,50 В 16920 С 1Готовят водный настой травы горицвета по стандартной прописи (пример 1).Испытания противовирусной активности проводят согласно описанию, приведенному в примере 1, используя вместо вируса ЕСНО 6 вирус полиомиелита 1 типа (вакциннь 1 й штамм 5-1).Водный настой травы горицвета обладает выраженной способностью подавлять размножение вируса полиомиелита в культуре клеток (табл. 5). Снижение урожая вируса в сравнении с контролем превышает 2,50 15 ТЦД 5 о/мл, диапазон нетоксичных разведений настоя с антивирусным действием - 32 (от 150 до 121600).Таблица 5 Противовирусные свойства водного настоя травы горицвета в отношении вируса полиомиелита Урожай вируса Разведение титр вируса, 13 разность с контролем, ХТИ ТЦД 50/мл 1 ТЦД 5 о/млКонтроль 5,290,07 Таким образом, заявляемое решение позволяет решить техническую задачу. При использовании препаратов горицвета удается получить подавление размножения пикорнавирусов в культуре клеток. Видно, что выраженность противовирусного действия препаратов горицвета в отношении вируса ЕСНО 6 фактически превосходит активность строфантина, при этом препараты горицвета менее токсичны. Кроме того, для препаратов горицвета, в отличие от строфантина, установлено наличие противовирусных свойств в отношении других вирусов семейства Рйсогпауйгйбае.Заявляемое решение может быть использовано в исследовательской лабораторной практике непосредственно в настояший момент для подавления размножения пикорнавирусов и редукции вызываемых ими заболеваний.В связи с установленными свойствами заявляемое решение имеет и большое практическое значение. Пикорнавирусы (семейство Ртсошауйгйбае) являются возбудителями ряда распространенных инфекционных заболеваний человека. В составе данного семейства наиболее значительную роль в инфекционной патологии человека играют энтеровирусы (род Епгегоуйшз, вирусы полиомиелита 1-3 типа Коксаки групп А и В, 29 серотипов ЕСНО 1-31 типов) и риновирусы (род Шппоуйгиз, более 100 серотипов). Вызываемые заболевания - полиомиелит,сезонные заболевания типа летнего гриппа, серозный менингит, герпангина, бронхольмская лихорадка, эндо-, мио- и перикардиты, риновирусная инфекция 4, 5. Среди этих инфекций лишь полиомиелит является контролируемым заболеванием благодаря налаженной системе вакцинопрофилактики. При остальных заболеваниях, вызываемых не полиомиелитными пикорнавирусами, вакцинопрофилактика неэффективна вследствие наличия значительного количества серотипов вирусов. Основной стратегией борьбы с такими инфекциями является химиотерапия и химипрофилактика. Однако лекарственные средства, эффективно подавляюшие размножение пикорнавирусов в чувствительных клетках и организме, пока лишь разрабатываются.