Ингибитор вируса лимфоцитарного хориоменингита

61 31/14 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНГИБИТОР ВИРУСА ЛИМФОЦИТАРНОГО ХОРИОМЕНИНГИТА(72) Авторы Петкевич Александр Сергеевич Рустамова Лариса Михайловна Сабынин Вячеслав Михайлович Богданова Наталья Леонидовна Ермакова Татьяна СергеевнаПрисакарь Виорел Иванович Самусь Нина Михайловна Цапков Виктор Иванович(73) Патентообладатель Белорусский научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии(57) Применение изоникотиноилгидразона 5-нитро-2-фуральдегида в качестве ингибитора вируса лимфоцитарного хориоменингита.(56) Богданова Н.Л. и др. Принципы и перспективы диагностики новых и вновь появляющихся инфекционных заболеваний. - Мн. 1997. - С. 89.196 1, 1995... . . . 1989. . 70. -12. - Р. 3317-3325... . . 1989. . 63. -4. - Р. 1827-1832. Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано как эффективный ингибитор вируса лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) в культуре клеток . Разработка эффективных химиопрепаратов для лечения и профилактики вирусных инфекций является актуальной задачей. Арсенал известных противовирусных средств ограничен и отсутствует в отношении указанной инфекции, протекающей с поражением нервной системы и имеющей распространение на территории Республики Беларусь. Наиболее близким по химическому строению и проявляющим противовирусную активность является (5-нитро-2-фурфурилиден)-1-аминогидантоин, представленный в качестве прототипа 1. Недостаток прототипа - невысокая противовирусная активность. Химиотерапевтический индекс равен 5. Задачей изобретения является поиск и расширение арсенала средств, эффективных в отношении вируса ЛХМ. Поставленная задача достигается применением соединения оригинального синтеза изоникотиноил-гидразон 5-нитро-2-фуральдегида общей формулы Данное соединение нерастворимо в воде, слабо растворимо в спирте, ди-метилсульфоксиде, растворяется в щелочах. Предложенное решение является новым и неочевидным, т.к. до сих пор не описано применение указанного соединения в качестве ингибитора вируса ЛХМ. Это свойство выявлено впервые и известна лишь его противомикробная активность 2. Сущность изобретения поясняется примерами Пример 1. Токсичность исследуемого вещества изучали на культуре клеток , выращенных на дне пенициллиновых флаконов. Вещество растворяли в 2,5 среде гемогидролизата и наносили на отмытые от ростовой среды клетки в концентрациях от 400 до 1 мкг/мл. Спустя 96 ч регистрировали цитопатическое действие вещества под микроскопом. Максимально переносимой концентрацией (МПК) считали 1/2 наивысшей концентрации, не вызывающей цитодеструктивных изменений клеток. МПК исследуемого соединения составила 25 мкг/мл. Пример 2. Двухсуточную культуру клетокзаражали вирусом ЛХМ с множественностью инфицирования 0,1-0,01 БОЕ/клетка. После адсорбции вируса на культуре клеток в поддерживающую среду зараженных клеток вносили предлагаемое соединение в концентрациях 2, 5,10, 25 мкг/мл. Инкубация продолжалась в течение 72 ч при температуре 37 С. В отобранных пробах определяли инфекционную активность вируса методом редукции бляшек под агаровым покрытием 3. Контрольными служили культуры клеток, зараженные вирусом ЛХМ в аналогичных условиях, но в отсутствие предлагаемого соединения в культуральной среде. Результат оценивали по значению химиотера-певтического индекса (ХТИ), который равен отношению МПК к минимально активной концентрации (МАК, доза препарата, при которой подавление размножения вируса находится в диапазоне 1,5-1,7 ). Предлагаемое соединение обладает выраженным противовирусным действием в отношении вируса ЛХМ (табл. 1). Таблица 1 Ингибирование размножения вируса ЛХМ в присутствии изоникотиноилгидразон 5-нитро-2-фуральдегида в культуре клетокМПК Соединение мкг/мл Заявляемое Концентрация Титр вируса Ингибиция препаратаБОЕ/млБОЕ/мл мкг/мл 25 10 5 2 0 5 1 0 Показано снижение инфекционного титра вируса ЛХМ по сравнению с контролем на величину, превышающую 1,7 в концентрациях 2, 5, 10, 25 мкг/мл, ХТИ равно 12. В то же время прототип имеет ХТИ 5 и более токсичен. 2 5162 1 Пример 3. В экспериментах на животных использовали дозу вируса - 10 50. Животных инфицировали интрацеребрально, раствор соединения в дозе 150 мг/кг вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл за 24 ч и 1 ч до заражения и затем через 24, 48, 72, 96 и 120 ч после заражения. Об эффективности соединения судили по увеличению выживаемости животных по сравнению с контрольной группой. В результате проведенных опытов установлено, что изученное соединение, защищало 25,0 животных от гибели и значительно удлиняло (4,2 суток) срок жизни. Применение прототипа по той же схеме практически не влияло на выживаемость и срок жизни инфицированных животных (табл. 2). Таблица 2 Влияние изоникотиноил-гидразон 5-нитро-2-фуральдегида на выживаемость мышей, инфицированных вирусом ЛХМ Препарат Заявляемое Контроль Прототип Контроль Средний день Удлинение срогибели (сут.) ка жизни (сут.) Технический результат изобретения заключается в подавлении размножения вируса ЛХМ в культуре клеток . Эффект новый и достаточно высокий, химиотерапевтический индекс равен 12. Он достигается применением соединения в концентрациях 2, 5, 10,25 мкг/мл. Таким образом заявляемое соединение менее токсично, обладает способностью высокоэффективно подавлять размножение вируса ЛХМ культуре клеток , увеличивать продолжительность жизни лабораторных животных и давать 25,0 защиту при лечении экспериментальной инфекции, вызванной вирусом ЛХМ. В этом преимущество перед взятым прототипом. Вышеизложенные биологические свойства предлагаемого соединения позволяют считать его потенциальным противовирусным препаратом в отношении вируса ЛХМ. Источники информации 1. Богданова Н.Л., Сабынин В.М., Рустамова Л.М. и др. Сб. Принципы и перспективы диагностики новых и вновь появляющихся инфекционных заболеваний. - Мн. 1997. - С. 89 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3