Ингибитор вируса герпеса и способ подавления размножения вируса герпеса

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ИНГИБИТОР ВИРУСА ГЕРПЕСА И СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА ГЕРПЕСА(73) Патентообладатель Белорусский научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии(57) 1.Применение тинидазола в качестве ингибитора вируса герпеса. 2.Способ подавления размножения вируса герпеса, включающий введение животным ацикловира, отличающийся тем, то в состав среды поддержки клеточной культуры или животным дополнительно вводят 1225 мкг/мл или 2,5-0,25 мг/кг тинидазола соответственно.(56) 1. Лекарственные средства Пособие для врачей., ч., 12-е изд-е, М. Медицина, 1993.-С.391-392. Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для подавления размножения вирусов и редукции вызываемых ими заболеваний. Наиболее эффективным и чаще использующимся является противогерпетический препарат ацикловир(ациклогуанозин) 1. В связи с опосредованностью антивирусного действия ацикловира вирусоспецифической тимидинкиназой случаи неэффективности препарата обусловлены природным или приобретенным дефицитом этого фермента в структуре возбудителя. Таким образом, недостатком ацикловира является сниженная эффективность в отношении тимидинкиназодефицитных штаммов вируса как существующих в природе, так и возникающих в ходе лечения. Целью настоящего изобретения является преодоление устойчивости вируса герпеса к действию ацикловира и увеличение эффективности ацикловира. Поставленная цель достигается использованием тинидазола и его комбинированным применением с ацикловиром. Тинидазол является официальным лекарственным препаратом и предназначен для лечения протозойных инфекций (трихомониаза, лямблиоза. амебной дизентерии). Новизна изобретения заключается в использовании тинидазола по новому назначению. Не было известно о противовирусных свойствах тинидазола, и обнаружение такого эффекта явилось неожиданным. Из данных патентной и научно-технической литературы, сведений о механизме действия тинидазола по основному назначению нельзя было предполагать наличие у него антивирусной активности. Следовательно, изобретение имеет изобретательский вень. Изобретение является промышленно применимым, поскольку возможно применение в здравоохранении. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Токсическое для культуры клеток действие тинидазола. Токсические свойства определяют по способности вызывать цитодеструктивные изменения клеток спустя 48 - 96 час инкубации. Монослойные культуры клетокотмывают от ростовой среды и наносят растворы тинидазола на среде 199 с концентрацией 800 - 12,5 мкг/мл. По истечении указанного срока инкубации неокрашенные культуры просматривают при увеличении х 80. Максимальной переносимой концентрацией (МПК) принимают наивысшую дозу вещества, не вызывающую указанных изменений. Устанавливают, что в диапазоне исследованных концентраций тинидазола не обладает способностью вызывать цитодеструкцию клеток. 2085 1 Пример 2. Противовирусное действие тинидазола. Монослойные культуры клетокотмывают от ростовой среды, инфицируют 0,1 ТЦИД 50/мл вируса герпеса простого (штамм 1 С, ВПГ-1) или его штаммами, устойчивыми к действию ацикловира (АЦГр) и фосфоноуксусной кислоты (ФУКр), путем 1 час контакта с вирусосодержащей жидкостью в объеме 0,1 мл и наносят среду поддержки с содержанием 200 - 12,5 мкг/мл тинидазола. После инкубации в термостате в течение 48 - 72 час оценивают цитопатическое действие (ЦПД) вируса и определяют титр вируса в среде поддержки методом бляшек. Критерием антивирусного действия принимают подавление развития ЦПД и снижение титра вируса под влиянием препарата. Минимальной активной концентрацией (МАК) считают наименьшую концентрацию, в присутствии которой регистрируют подавление ЦПД на 75 и (или) снижение титра вируса на 1,25 1 БОЕ/мл. Химиотерапевтический индекс (ХТИ) рассчитывают как отношение МПК/МАК. Полученные результаты сводят в таблицу 1. Как видно, тинидазол обладает способностью эффективно тормозить размножение вируса герпеса простого, а также его вариантов, устойчивых к действию ацикловира и фосфоноуксусной кислоты. В то же время ацикловир и фосфоноуксусная кислота практически неактивны в отношении штаммов, устойчивых к каждому из этих препаратов соответственно. Пример 3. Сочетанное применение тинидазола и ацикловира. Монослойные культуры клетокотмывают от ростовой среды, инфицируют 0,001 ТЦИД 50/мл ВПГ-1 путем 1 час контакта с вирусосодержащей жидкостью в объеме 0,1 мл и наносят среду поддержки с содержанием тинидазола и ацикловира. При этом используют концентрации препаратов, равные или не достигающие их среднеэффективной концентрации (концентрации, подавляющей размножение вируса на 50) при индивидуальном применении. Полученные результаты сводят в таблицу 2. Таблица 1 Подавление размножения вирусов герпеса простого в культуре клетокпод влиянием тинидазола (Т), ацикловира (АЦГ) и фосфоноуксусной кислоты (ФУК) Препарат Вирусы герпеса и конценВПГ-1 АЦГр ФУКр разность с ХТИ разность с титр,разность с титр,трация,титр,контро-лем контролем ХТИ 1 контролем ХТИ 1 мкг/мл 1 БОЕ/мл 1 1 БОЕ/мл 1 БОЕ/мл БОЕ/мл БОЕ/мл БОЕ/мл Т 200 8 3,9 1,1 4 3,0 1,4 4 2,0 2,3 100 3,0 1,3 4,0 1,0 3,8 0,6 50 4,0 0,3 5,0 0 4,4 0 25 4,9-0,4 2,0 2,3 2 2,0 3,0 2 2 0 0 4,3 5,0 4,4 Таблица 2 Подавление размножения вируса герпеса простого в культуре клетокпод влиянием тинидазола (Т) и ацикловира (АЦГ) при одновременном применении Препарат Концентрация, мкг/мл Титр вируса,Разность с контролем, 1 1 БОЕ/мл БОЕ/мл Т 25 5,7 0 12 5,7 0 АЦГ 0,25 5,5 0,2 0,12 5,5 0,2 ТАЦГ 25/0,25 4,8 0,8 12/0,12 4,1 1,1 0 0 5,7 Как видно, сочетание тинидазола с ацикловиром приводит к потенцированию противовирусного эффекта препаратов. 2085 1 Пример 4. Эффективность тинидазола и его сочетания с ацикловиром при экспериментальной нейроинфекции. Белых мышей массой 6 - 7 г инфицируют ВПГ-1, предварительно адаптированным при последовательном внутримозговом инфицировании, внутрибрюшинно в дозе 100 ЛД 50/0,1 мл. Растворы тинидазола вводят мышам внутрижелудочно за 1 час перед инфицированием и 2 раза с промежутком 14 час после него. Наблюдение за животными ведут до момента массовой гибели в контроле (5-6 дней от момента инфицирования). Полученные результаты сводят в таблицу 3. Таблица 3 Эффективность тинидазола (Т) и его сочетания с ацикловиром при экспериментальной нейроинфекции Количество животных погибли 1 5 4 0 0 11 Как видно, тинидазол снижает летальность животных при нейроинфекции, вызванной вирусом герпеса,на 80,6 - 29,2. При сочетанном применении тинидазола и ацикловира ни одно животное не погибло. Таким образом, заявляемое решение позволяет достигнуть поставленную цель. При использовании тинидазола удается получить подавление размножения вируса герпеса простого и его штамма, устойчивого к действию ацикловира в культуре клеток. Тинидазол в значительной мере снижает летальность животных при экспериментальной нейроинфекции. Препарат особенно эффективен при сочетанном применении с ацикловиром. В этом случае гибель животных в течение всего периода наблюдения не имеет места. Заявляемое решение может быть использовано в исследовательской лабораторной практике непосредственно для подавления размножения вирусов и редукции вызываемых ими заболеваний. Существенным моментом заявляемого решения является высокая множественность инфицирования животных (100 летальных доз вируса) и введение препаратов в желудок. Для средств, использующихся в лечении энцефалитов, важна не только специфическая эффективность, но и способность проникать через гематоэнцефалический барьер. Известно, что до 88 тинидазола, попадающего в организм человека, обнаруживается в спинномозговой жидкости. Среди многих других лекарственных препаратов разной направленности фармакологического действия это наиболее высокий показатель проницаемости через гематоэнцефалический барьер. В связи с этим заявляемое решение имеет большое практическое значение. Одной из наиболее тяжелых форм течения герпетической инфекции является энцефалит. Герпетическую природу имеют около 10 всех энцефалитов, 0,6 асептических менингитов и 20 менингоэнцефалитов. В США ежегодно диагностируется около 5000 случаев заболевания герпетическим энцефалитом. При этом у 1/3 больных заболевание заканчивается летально,еще у 1/3 имеют место нервно-психические осложнения. Аналогичная частота заболевания имеет место в Республике Беларусь. Учитывая, что тинидазол является разрешенным к применению лекарственным препаратом, на основе заявляемого решения возможно его использование в лечении герпетических поражений людей. Ожидается высокий эффект комбинированного применения тинидазола и ацикловира в предупреждении развития герпетических энцефалитов и их лечении. Для выработки окончательных рекомендаций по применению тинидазола с такой целью необходимы клинические испытания и отработка оптимальных схем применения. Предполагается, что аналогичный эффект может проявлять родственный тинидазолу по строению субстанции и фармакологическому действию препарат метронидазол. Его проницаемость через гематоэнцефалический барьер здорового человека ниже, чем у тинидазола и достигает 43, однако препарат может оказаться более удобным в использовании благодаря наличию инъекционной лекарственной формы. оставитель А.И. Сорокин Редактор В.Н. Позняк Корректор Т.В. Бабанина Заказ 0050 Тираж 20 экз. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 3