Ингибитор вирусов

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(73) Патентообладатель Римша Владимир хайлович(57) Применение чайного напитка из дикорастущих и культивируемых трав ФитоГоР в качестве ингибитора вирусов.(56) 1. Лекарственные средства Пособие для врачей, часть . - М. Медицина, 1993. - С. 390-393. 2. ТУ РБ 13400303, 001-97. Чайный напиток из дикорастущих и культивируемых трав ФитоГоР, внесен в ГОСТ Республики Беларусь,006072 от 11.11.97. Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для подавления размножения вирусов и редукции вызываемых ими заболеваний. Известен противогриппозный препарат ремантадин, использующийся в медицинской практике для профилактики и лечения гриппозной инфекции. Недостатком препарата является возможность быстрого развития лекарственной устойчивости при применении препарата и распространение в очагах вируса, устойчивого к действию ремантадина. Наиболее эффективным и чаще использующимся при лечении герпетической инфекции является препарат ацикловир (ациклогуанозин). В связи с опосредованностью антивирусного действия ацикловира вирусспецифической тимидинкиназой имеют место случаи неэффективности препарата, обусловленные природным или приобретенным дефицитом этого фермента в структуре возбудителя. Таким образом, недостатком ацикловира является сниженная эффективность в отношении тимидинкиназодефицитных штаммов вируса,как существующих в природе, так и возникающих в ходе лечения 1. Целью настоящего изобретения является преодоление устойчивости вируса гриппа к действию ремантадина и вируса герпеса к действию ацикловира и расширение арсенала препаратов, обладающих противовирусными, в том числе вирулицидными свойствами. Поставленная цель достигается применением настоя сбора лекарственых трав ФитоГоР. ФитоГоР является общеукрепляющим и тонизирующим средством, повышает иммунитет и сопротивляемость организма к возникновению злокачественных опухолей, инфекционных заболеваний, нормализует кроветворную функцию во время химиотерапии и облучении онкологических больных, оказывает позитивное влияние на обмен веществ, способствует выведению тяжелых металлов и радионуклидов. Разрешен к медицинскому применению. Зарегистрирован в Минздраве РБП-006140-9610 18.10.96 г. 2. Новизна изобретения заключается в использовании сбора лекарственных трав ФитоГоР по новому назначению. По данным патентной и научно-технической литературы не было известно о вирулицидных свойствах и противовирусной активности сбора лекарственных трав ФитоГоР. Следовательно, заявляемое решение имеет изобретательский уровень. Изобретение является промышленно применимым, поскольку возможно использование в здравоохранении. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. 2942 1 Пример 1. Противовирусное действие настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР в отношении вируса гриппа. Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР подавлять размножение вирусов исследуют на культуре клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с вирусами гриппа типа А, штамм ВЧП/Росток/34 (71) (ВЧП) и вирусом простого герпеса 1 типа, штамм 1 С (ВПГ) методом редукции количества бляшек. Настой готовят согласно инструкции к применению сбора содержимое пакета засыпают в прогретую колбу и заливают 250 мл кипящей воды, водный экстракт исследуют после 30 мин периода инкубации. Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют 0,02-0,00002 БОЕ/клетка вируса путем внесения на клетки 0,1 мл вируссодержащей суспензии на 1 час при 37 С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательной среды на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 агара и 0,005 нейтрального красного. В состав питательной среды вводят настой сбора лекарственных трав ФитоГоР в различных разведениях. После застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 36 часов и затем подсчитывают количество бляшек, на основе которого вычисляют титр вируса. Полученные результаты отражены в таблице 1. Таблица 1 Подавление размножения вируса гриппа и вируса простого герпеса в культуре клеток ФЭК под влиянием настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР Разведение Вирусы настоя ВЧП ВПГ титр,БОЕ/мл разность с контролем,титр,разность с контролем,БОЕ/мл БОЕ/мл БОЕ/мл 110 2 5,95 2 5,04 120 7,17 0,68 6,04 1,04 140 7,57 0,38 7,16 180 8,20 7,12 Контроль вируса 7,95 7,04 Как видно, настой сбора лекарственных трав ФитоГоР обладает выраженным противовирусным действием в отношении вирусов гриппа и герпеса. Пример 2. Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР подавлять размножение вируса гриппа, устойчивого к действию ремантадина. Исследования выполняют на культуре клеток ФЭК согласно описанию, приведенному в примере 1. Используют ВЧП, устойчивый к действию ремантадина (ВЧПр), и в качестве контроля - исходный ВЧП, чувствительный к действию ремантадина. Результаты исследования приведены в таблице 2. Как видно, максимальное снижение титра ВЧПр под действием ремантадина составило 0,1 БОЕ/мл,что свидетельствует о его неэффективности в данном случае, в то время как для исходного ВЧП эта величина достигает 3,07 БОЕ/мл. Что же касается настоя лекарственных трав ФитоГоР, то он проявляет высокую противовирусную активность как в отношении исходного ВЧП, так и ВЧПр (снижение титра вирусов более 5 БОЕ/мл). Таблица 2 Подавление размножения вируса гриппа, устойчивого к действию ремантадина,под влиянием настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР Препарат КонценВирусы трация,ВЧПр ВЧП мкг/мл или разведетитр,разность с контролем,титр,разность с контролем,ние БОЕ/млБОЕ/мл БОЕ/млБОЕ/мл ФитоГоР 110 1,0 5,59 2,0 5,5 120 5,73 0,86 6,71 0,79 140 6,12 0,47 7,10 0,40 180 6,35 0,24 7,35 0,15 Ремантадин 12,0 6,66 7,40 0,1 6,5 6,58 0,01 7,22 0,28 3,0 6,55 0,04 7,25 0,25 1,5 6,52 0,07 6,72 0,78 0,7 6,49 0,1 5,71 1,79 0,1 6,50 0,09 4,43 3,07 Контроль вируса 6,59 7,50 2 2942 1 Пример 3. Эффективность настоя лекарственных трав ФитоГоР в отношении вируса простого герпеса,устойчивого к действию ацикловира. Противовирусную активность настоя исследовали в культуре клеток ФЭК с вирусом простого герпеса,штамм 1 С, устойчивым к действию ацикловира (ВПГр) согласно описанию, приведенному в примере 1. Результаты исследования приведены в таблице 3. Как видно, максимальное снижение титра ВПГр под действием ацикловира не превышает 0,1 БОЕ/мл,что свидетельствует о его неэффективности в данном случае, в то время как для исходного ВПГ эта величина превышает 6 БОЕ/мл. Что же касается настоя лекарственных трав ФитоГоР, то он проявляет высокую противовирусную активность как в отношении исходного ВПГ, так и ВПГр (снижение титра вирусов более 5 БОЕ/мл). Таблица 3 Подавление размножения вируса герпеса, устойчивого к ацикловиру, под действием настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР Препарат КонценВирусы трация,ВПГр ВПГ мкг/мл или разведетитр,разность с контролем,титр,разность с контролем,ние БОЕ/млБОЕ/мл БОЕ/млБОЕ/мл ФитоГоР 110 2 5 2 5,04 120 5,99 1,01 6,04 1,0 140 7,02-0,05 5,43 1,61 0,12 6,44 0,60 0,06 6,93 0,11 Контроль вируса 7,0 7,04 Пример 4. Вирулицидная активность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР в отношении вируса гриппа. Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР нейтрализовать инфекционность вируса при непосредственном контакте исследуют суспензионным методом. Равные объемы настоя и неразведенной вируссодержащей суспензии объединяют и выдерживают при комнатной температуре, задавая различное время экспозиции. Затем готовят 10-кратные разведения этой смеси, наносят их на клеточный монослой и после 1 час контакта вируса с клеткой покрывают питательной средой, состоящей из 2-кратного концентрата среды 199, 1 расплава агара на бидистиллированной воде,0,005 нейтрального красного, 200 ЕД/мл бензилпенициллина. После 36 час инкубации при 37 С подсчитывают количество вирусных бляшек и определяют инфекционный титр вируса. Полученные результаты представлены в таблице 4. Таблица 4 Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР нейтрализовать инфекционность вируса гриппа при непосредственном контакте Группа Время Титр вируса,БОЕ/мл экспозиции, мин в группах разность с контролем Настойвирус 0 2,4 5,62 5 1,7 6,32 15 1,7 6,32 30 2,0 6,02 Контроль вируса 8,02 Как видно, исследуемый настой обладает выраженными вирулицидными свойствами. Его способность нейтрализовать инфекционность вируса гриппа проявляется практически мгновенно. Как видно, даже в группе без экспозиции снижение титра вируса составило 5,62 БОЕ/мл. Пример 5. Вирулицидная активность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР в отношении вируса герпеса. Исследования проводят суспензионным методом, согласно описанию, приведенному в примере 4, с вирусом простого герпеса, штамм 1 С, в культуре клеток ФЭК. Полученные результаты приведены в таблице 5. Как видно, настой сбора лекарственных трав ФитоГоР высоко эффективен как вирулицидное средство. При непосредственном контакте вируса с настоем последний практически полностью нейтрализует инфек 3 2942 1 ционные свойства вируса герпеса уже после 5 мин экспозиции и практически мгновенно снижает ее более чем в 105 раз. Таблица 5 Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР нейтрализовать инфекционность вируса герпеса при непосредственном контакте Группа Время Титр вируса,БОЕ/мл экспозиции, мин в группах разность с контролем Настойвирус 0 1,7 5,34 5 1 6,04 15 1 6,04 30 1 6,04 Контроль вируса 7,04 Пример 6. Вирулицидная активность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР в отношении энтеровируса. Исследования проводят суспензионным методом с вирусом 6 в культуре пассируемых кожномышечных клеток эмбриона человека (ПКМЧ). Полученные результаты приведены в таблице 6. Равные объемы настоя и вируссодержащей суспензии объединяют и выдерживают при комнатной температуре заданное время. Затем готовят 10-кратные разведения смеси и наносят их на клеточный монослой в объеме 0,1 мл. Через 1 час жидкость из флаконов удаляют и вносят 1 мл среды Игла. Эффективность настоя оценивают по задержке развития цитопатического действия вируса через 36-48 час инкубации при температуре 37 С. Полученные результаты отражены в таблице 6. Как видно, настой сбора лекарственных трав ФитоГоР эффективно воздействует на вирус 6 типа, и уже после 15-минутной экспозиции настоя с вируссодержащей суспензией не удается зарегистрировать наличие вируса в смеси. Таблица 6 Способность настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР нейтрализовать инфекционность вируса 6 при непосредственном контакте Группа Время Титр вируса,ТЦД 50/мл экспозиции, мин в группах разность с контролем Настойвирус 0 7,1 5 7,1 15 1 6,08 30 1 6,08 Контроль вируса 7,08 Таким образом, заявляемое решение позволяет достигнуть поставленную цель. Как показали исследования, проведенные на культуре клеток, настой сбора лекарственных трав ФитоГоР обладает высокой противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа и простого герпеса. Особое значение заявляемое решение имеет в связи с тем, что ФитоГоР подавляет также размножение вирусов, устойчивых к широко применяющимся в настоящее время противовирусным средствам вируса гриппа, устойчивого к действию ремантадина, и вируса герпеса, устойчивого к действию ацикловира. Известно, что в процессе лечения гриппа ремантадином и герпеса - ацикловиром, легко образуются штаммы вирусов, устойчивые к действию этих препаратов 1-2. Это негативное обстоятельство особенно нежелательно в случае гриппа вследствие высокой контагиозности заболевания. При использовании ремантадина с целью лечения гриппа от больного, принимающего препарат, через некоторое времяпосле начала лечения начинают выделяться устойчивые штаммы вируса. Лица, контактирующие в этот период с таким больным, могут быть инфицированы ремантадинустойчивым вирусом, что приводит впоследствии к неэффективности лечения ремантадином. Особую проблему в связи с этим лечение гриппа ремантадином представляет в закрытых коллективах, в частности в семьях, а также в домах престарелых, интернатах и т. п. При лечении ацикловиром заболеваний, вызванных вирусом герпеса, возникает сходная ситуация. Курс лечения в данном случае более длителен, чем в случае лечения гриппа ремантадином, а инфекция не столь контагиозна. Поэтому появление штамма вируса, устойчивого к действию ацикловира, негативно сказывается на результате лечения самого больного. Эффективность лечения в таких случаях существенно снижается. Настой сбора лекарственных трав ФитоГоР способен не только подавлять репродукцию вирусов, но и нейтрализует их инфекционные свойства при непосредственном контакте с вируссодержащей суспензией. Последнее определяет высокий уровень его вирулицидной активности. Так, уже в ходе приготовления смеси вируса с настоем инфекционный титр ВЧП и ВПГ снижается более чем на 5,0 БОЕ/мл. В отношении вируса 6, представителя одной из наиболее устойчивых к воздействию различных факторов групп вирусов(энтеровирусы - группа вирусов полиомиелита, семейство пикорнавирусов), вирулицидная активность проявляется после 15 мин экспозиции смеси при комнатной температуре. 4 2942 1 Существенным моментом является то, что сбор лекарственных трав ФитоГоР является коммерческим препаратом, не обладающим побочными действиями и разрешенным Минздравом РБ к применению как общеукрепляющее, тонизирующее, повышающее иммунитет и сопротивляемость организма к негативным воздействиям средство. В связи с этим, а также учитывая выявленную противовирусную и вирулицидную активность сбора, заявляемое решение имеет большое практическое значение. Предполагается благоприятное воздействие сбора ФитоГоР при профилактике и лечении гриппозной инфекции. Особую роль препарат может иметь в период эпидемий гриппа в связи с возможностью распространения в очагах ремантадинустойчивого вируса. Широкое применение настоя сбора лекарственных трав ФитоГоР может быть обусловлено и его способностью активно воздействовать на вирус герпеса. Ожидается положительный эффект не только при лечении заболеваний, вызванных вирусом герпеса простого, но и его вариантом, устойчивым к действию наиболее эффективного в настоящее время препарата ацикловира. Заявляемое решение может быть использовано для подавления размножения вирусов и облегчения и снятия симптомов вызываемых ими заболеваний. Для выработки окончательных рекомендаций по применению сбора лекарственных трав ФитоГоР при вирусных инфекциях необходимы клинические испытания и отработка оптимальных схем применения. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 5