Ингибитор вируса гепатита А

61 35/78 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ИНГИБИТОР ВИРУСА ГЕПАТИТА А(73) Патентообладатель Белорусский научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Минздрава РБ(57) Применение бесалола в качестве ингибитора вируса гепатита А.(56) 1 Жданов В.М, Ананьев В.Э., Стаханова В.М. Вирусные гепатиты. - М. Медицина, 1986.С. 256 2. Иванова А.Н. Эффективность высоко- и низкомолекулярных индукторов интерферона при экспериментальных вирусных инфекциях Автореф. дис. канд. мед. наукМ., 1994.С. 26. 3. Мишаева Н.П., Вотяков В.И., Згировская А.А., Тарасенко А.Б. Поиск ингибиторов ВГА среди готовых лекарственных формВсесоюзный симпозиум по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Изобретение относится к области вирусологии, а именно к ингибированию вируса гепатита А (ВГА) и может быть использовано для лечения и профилактики этой инфекции. Вирусный гепатит А представляет собой серьезную социальную проблему, широко распространен на всех континентах, в том числе в Беларуси, имеет высокий уровень заболеваемости, чем наносит большой экономический ущерб. Несмотря на интенсивные меры, предпринимаемые органами здравоохранения по профилактике гепатита А, заболеваемость продолжает расти 1. Отсутствие коммерческих вакцин и этиотропных средств лечения делает эту инфекцию практически неконтролируемой 4. В последние годы в развитых странах мира проводится интенсивный поиск ингибиторов вируса гепатита А среди химических соединений оригинального синтеза и готовых лекарственных форм, широко применяемых в медицинской практике для лечения инфекционных болезней. Известно, что ингибирующим действием на вирус гепатита А обладает дибазол 2. Обработка клеток почки эмбриона обезьян за 24 или 4 часа до заражения вирусом ГА дибазолом в концентрации 50-100 мкг/мл обеспечивало подавление репродукции возбудителя на 18-66 по сравнению с контролем. Недостатком дибазола является то, что антивирусная активность в культуре клеток проявляется при применении его только по профилактической схеме (до инфицирования клеток). Известно, что ингибирующим действием на вирус гепатита А обладает зоверакс 3. В опытах на культуре клеток, зараженных вирусом гепатита А, под влиянием зоверакса происходило подавление репликации вируса и накопление вирусного антигена в 2,2 раза по сравнению с контролем (инкубация вирусом ГА без препарата). Недостатком зоверакса является его невысокая эффективность. Цель изобретения - повышение эффективности ингибирования вируса гепатита А. Цель достигается путем использования для ингибирования ВГА бесалола. 2809 1 Бесалол - известное лекарственное средство, обладающее спазмолитическим, холинолитическим и антисептическим свойствами. Применяется при заболеваниях желудочно-кишечного тракта. Антивирусное действие бесалола ранее не было известно. Применение бесалола для ингибирования вируса гепатита А отличается новизной, поскольку ранее никем не описана возможность подавления репродукции вируса с помощью указанного препарата. Предложенное решение отличается неочевидностью, так как из известных свойств бесалола с очевидностью не вытекает, что его можно использовать для подавления репродукции вируса и накопления вирусного антигена в чувствительных клетках животных. Наличие ингибирующего действия бесалола в отношении ВГА выявлялось в культуре клеток почек обезьян -4, культивируемых на питательной среде МЕМ-2, зараженных вирусом гепатита А (штамм-15), выделенном от человека. В опытах использовали различные концентрации бесалола (от 50 до 1000 мкг/мл на физиологическом растворе). В зараженную культуру клеток добавляли 0,1 мл исследуемой концентрации препарата по 2 схемам. Схема 1 - препарат вносили за 2 часа до инфицирования клеток, схема 2 бесалол наносили на клеточный монослой через 1 час после инфицирования клеток. Контролем служили флаконы с культурой клеток, незараженных (отрицательный) или зараженных (положительный контроль) вирусом. Антивирусное действие препарата оценивали по подавлению накопления антигена вируса гепатита А с помощью прямого иммуноферментного метода. Содержание антигена в исследуемых пробах определяли фотометрически с использованием спектрофотометра Мультискан при длине волны 492 нм. Положительными считали пробы, при которых оптическая плотность в лунках с положительными образцами превышала в 2,1 раза среднюю величину оптической плотности отрицательных проб (контроля). Ингибирующее действие бесалола в отношении ВГА подтверждается следующими примерами. Пример 1. Культуру клеток -4 инфицировали вирусом гепатита А. Через один час после инфицирования (период адсорбции вируса) культуральную среду слили, на монослой нанесли 500 мкг бесалола в объеме 0,1 мл. После 30 мин экспозиции ткань отмыли питательной средой и нанесли на монослой поддерживающую среду (Игла МЕМ-2) с 300 мг глютамина и 1 эмбриональной телячьей сывороткой). Контролем служила зараженная культура клеток без бесалола. Через 3 недели инкубации клеток при 37 С определяли накопление вирусного антигена гепатита А иммуноферментным методом. Установлено, что оптическая плотность лунок в контроле превышала таковую в опыте в 3,4 раза (применение по схеме 2). Пример 2. Применение бесалола по профилактической схеме (схема 1) до инфицирования клеток было более эффективным, при этом положительный эффект наблюдали при использовании более низких доз препарата. Так, в опыте по инфицированию культуры клеток, которые за 2 часа до заражения были обработаны бесалолом, положительный эффект наблюдали при внесении дозы препарата 100 мкг/мл. Показано, что в присутствии бесалола накопление антигена ВГА было в 3,9 раза ниже, чем в контроле. Пример 3. Бесалол обладает выраженным вирулицидным действием на ВГА. При обработке вируссодержащего лизата клеток бесалолом в дозе 500 мкг/мл в течение 24 час. при 4 С содержание вируса снижалось по сравнению с необработанным контролем в 3,5-4,4 раза. Из приведенных данных видно, что под влиянием бесалола в культуре клеток -4 подавлялась репродукция гепатита А и накопление вирусного антигена. Причем действие препарата отмечено при применении его как по профилактической (схема 1), так и по лечебной (схема 2) схемам. Бесалол проявил также вирулицидное действие на возбудитель гепатита А. Известно, что в состав таблеток бесалола входят экстракт красавки (0,01 г) и фенилсалицилат (0,03 г). Исследования показали, что антивирусным свойством обладает второй компонент - фенилсалицилат. Внесение его в пробирки с зараженными ВГА клетками -4 в дозе 500 или 1000 мкг/мл подавляло накопление вирусного антигена в среднем в 3 раза по сравнению с контрольными пробирками, куда фенилсалицилат не вносили. Таким образом, поставленная цель - повышение эффективности ингибирования вируса гепатита А - достигнута. В связи с установлением антивирусного действия у бесалола, являющегося фармакопейным препаратом, открываются перспективы использования его для лечения людей и обезьян, а также для профилактики гепатита А у обезьян при содержании их в вольерах и питомниках. Бесалол является отечественным препаратом. Выпускается серийно. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.