Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА(71) Заявители Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии(72) Авторы Белоенко Евгений Дмитриевич Козлова Наталья Михайловна Слобожанина Екатерина Ивановна Кутько Анна Григорьевна Эйсмонт Олег Леонидович Скакун Павел Григорьевич Малюк Богдан Валентинович(73) Патентообладатели Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии(57) Способ дифференциальной диагностики ревматоидного артрита, отличающийся тем,что пунктат синовиальной жидкости больного с синовитом путем центрифугирования освобождают от нерастворимого материала, разводят в соотношении 19 раствором, содержащим 10 мМ -фосфатный буфер 7,4 и 0,155 М , и осуществляют спектрофлуориметрию полученного раствора, причем используют возбуждающий свет с длиной волны 350 нм или 430 нм, и при наличии люминесценции соответственно при 400-500 нм или 480-640 нм диагностируют ревматоидный артрит. 11151 1 2008.10.30 Изобретение относится к медицине, а именно - к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в дифференциальной диагностике повреждений и заболеваний суставов. Синовиальная среда суставов представляет собой чрезвычайно сложную динамически сбалансированную систему, изменение ее количественного и качественного состава отражает нарушение функции сустава, что используется как тест дифференциальной диагностики суставных заболеваний. Наиболее точной в настоящее время является дифференциальная диагностика, основанная на микроскопическом исследовании гистологических препаратов, изготовленных из биоптатов суставных тканей и синовии 1. Однако проведение гистологических исследований требует значительного времени и высокой квалификации врача-морфолога, кроме того, многократное повторение их при необходимости проследить за динамикой развития процесса затруднительно из-за травматичности способа или невозможности воспроизведения. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому, является способ диагностики артритов с помощью инфракрасной спектроскопии путем определения различий между свойствами синовиальной жидкости в больных и здоровых суставах, когда инфракрасный луч направляется на образец синовиальной жидкости (нативный или в виде пленки), определяются изменения физических и химических свойств жидкости при различных длинах волн, по которым делается заключение о наличии артрита 2. Изменения в абсорбционном спектре могут быть следствием различий в межмолекулярных взаимодействиях между молекулами воды. Эти различия могут проявляться в присутствии больших количеств макромолекул в синовиальной жидкости, которые разрывают межмолекулярные водородные связи молекул воды. Изменения в спектре могут быть обусловлены также наличием продуктов деградации гиалуроновой кислоты при некоторых патологических состояниях (ревматоидный артрит,остеоартрит, анкилозирующий спондилез, реактивный артрит, спондилоартропатия, болезнь Крона, системная красная волчанка, болезнь Стилла, подагра, псевдоподагра). Однако интерпретация инфракрасных спектров препарата синовиальной жидкости или ее пленок может содержать элементы субъективности, которые могут быть нивелированы применением мультивариантного статистического анализа, что длительно и неприемлемо для практической лабораторной диагностики. Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, - разработка способа дифференциальной диагностики ревматоидного артрита. Поставленная задача решается предлагаемым способом дифференциальной диагностики ревматоидного артрита, отличающимся тем, что пунктат синовиальной жидкости больного с синовитом путем центрифугирования освобождают от нерастворимого материала, разводят в соотношении 19 раствором, содержащим 10 мМ -фосфатный буфер 7,4 и 0,155 М , и осуществляют спектрофлуориметрию полученного раствора,причем используют возбуждающий свет с длиной волны 350 нм или 430 нм, и при наличии люминесценции соответственно при 400-500 нм или 480-640 нм диагностируют ревматоидный артрит. Данные исследования представлены на фиг. 1-6 (А - при длине волны возбуждающего света 350 нм, В - при длине волны возбуждающего света 430 нм), где на фиг. 1 - представлен спектр люминесценции синовиальной жидкости при ревматоидном артрите (кривая 1) и отсутствие спектра люминесценции синовиальной жидкости при травматическом синовите (кривая 2) на фиг. 2 - спектр люминесценции синовиальной жидкости больного Б. с ревматоидным артритом на фиг. 3 - спектр люминесценции синовиальной жидкости больного П. с ревматоидным артритом на фиг. 4 - спектр люминесценции синовиальной жидкости больного М. с ревматоидным артритом 2 11151 1 2008.10.30 на фиг. 5 - люминесценция синовиальной жидкости больного К. с травматическим синовитом на фиг. 6 - люминесценция синовиальной жидкости больного А. с травматическим синовитом. Исследования природы люминесценции синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом показали, что синовиальная жидкость имеет многообразные центры свечения. Выбор условий регистрации люминесценции (длина волны возбуждающего света и т.д.), при которых небольшие различия в количественном и качественном состоянии люминесцирующих веществ будут проявляться в изменении соотношения их интенсивностей, и анализ полученных параметров люминесценции может быть использован для дифференциальной диагностики ревматоидного артрита. Способ осуществляется следующим образом. Образцы синовиальной жидкости предварительно центрифугируют для удаления нерастворимого материала и разводят в соотношении 19 раствором, содержащим 10 мМ фосфатный буфер 7,4 и 0,155 Ми затем на любом спектрофлуориметре определяют спектры люминесценции препарата в области длин волн 400-500 нм или 480-640 нм при длине волны возбуждающего света 350 нм или 430 нм соответственно. Наличие спектров люминесценции позволяло делать заключение о наличии ревматоидного артрита. Примеры выполнения способа. Для оценки эффективности предлагаемого способа были изучены спектры люминесценции приготовленного образца синовиальной жидкости трех групп больных ревматоидным артритом, посттравматическим синовитом и деформирующим остеоартрозом,находившихся на лечении в клиническом отделении ГУ Белорусский НИИ травматологии и ортопедии. Для диагностики использовали 0,5,-1,0 мл пунктата синовиального выпота больных. Образцы синовиальной жидкости предварительно центрифугировали для удаления нерастворимого материала и разводили в соотношении 19 в забуференном растворе(10 мМ -фосфатный буфер 7,40,155 М ) и затем на люминесцентном спектрофотометре (СОЛАР, Беларусь) регистрировали спектры люминесценции препарата в области длин волн от 400 до 500 нм при возбуждении светом с длиной волны 350 нм или в области 480-640 нм при возбуждении светом с длиной волны 430 нм. При наличии спектра в данных областях делали заключение о наличии ревматоидного артрита. В таблице представлен люминесцентный анализ синовиальных жидкостей трех групп обследованных больных. Обследованная группа Травматический синовит (группа ) Деформирующий остеоартроз Спектры люминесцен- Спектры люминесценции отсутствуют ции отсутствуют Спектры люминесцен- Спектры люминесценции отсутствуют ции отсутствуют Спектры люминесцен- Спектры люминесценции присутствуют и ции присутствуют и имеют имеют макс 460-470 нм макс 510-520 нм Как видно из представленных в таблице данных, при указанных длинах волн возбуждающего света спектры люминесценции присутствуют в образцах синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом по сравнению с группами больных с травматическим синовитом и деформирующим остеоартрозом, что свидетельствует об изменении количественного и качественного состава синовиальной жидкости в зависимости от вида синовитов. 3 11151 1 2008.10.30 Анализ образцов спектров синовиальной жидкости обследуемой группы больных показывает, что в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом появляется выраженный максимум в спектре люминесценции при длине волны 400-500 нм. При этом длина волны возбуждающего света составляла 350 нм. При возбуждении люминесценции синовиальной жидкости светом длиной волны 430 нм данная закономерность повторяется при длине волны 480-640 нм. Таким образом, полученные в настоящем исследовании результаты свидетельствуют,что параметры собственной люминесценции синовиальной жидкости в области 400500 нм или 480-640 нм могут быть использованы для дифференциальной диагностики ревматоидного артрита. Источники информации 1. Лабораторные методы исследования в клинике Справочник / Под ред. В.В. Меньшикова. - М. Медицина, 1987. - С. 368. 2.5 473 160,01 21/35, публ. 1995 (прототип). Фиг. 6 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5