Способ определения степени тяжести гестоза

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ГЕСТОЗА(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Мажуль Владимир Михайлович Черновец Татьяна Сергеевна Сидоренко Валентина Николаевна Пискунова Инна Павловна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси(57) Способ определения степени тяжести гестоза, включающий получение обогащенной тромбоцитами плазмы из венозной крови беременной, внесение индуктора агрегации тромбоцитов и оценку агрегационной способности тромбоцитов в исследуемом образце,отличающийся тем, что в качестве индуктора агрегации тромбоцитов используют протеазу в не повреждающей тромбоциты концентрации, а оценку агрегационной способности тромбоцитов осуществляют по величине светопропускания исследуемого образца,причем при значении светопропускания в пределах 50-69 степень гестоза определяют как легкую, в пределах 35-49 как среднюю и в пределах 0-34 как тяжелую. 10282 1 2008.02.28 Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано в женских консультациях и отделениях патологии беременных. Гестоз занимает ведущее место в структуре материнской и перинатальной заболеваемости и смертности. Частота гестоза колеблется от 2,5 до 16,5 и не имеет тенденции к снижению, несмотря на существенные достижения в изучении его этиологии, патогенеза и разработку новых методов профилактики и лечения. Известен способ диагностики позднего токсикоза беременных (гестоза) 1, заключающийся в том, что методом фазово-контрастного микроскопирования подсчитывают количество тромбоцитов в крови, взятой из локтевой вены. Затем методом тетраполярной дифференциальной реографии определяют показатели центрального и периферического кровообращения. С помощью регистратора записывают реографический сигнал выброса,определяют величину ударного выброса и вычисляют общее периферическое сопротивление крови по математической формуле. После этого накладывают на различные участки тела женщины электроды реоплетизмографа и измеряют импеданс тканей между электродами. На основании полученных показателей вычисляют диагностический индекс. При его значениидиагностируют поздний токсикоз беременных. Однако данный способаналог является сложным, трудоемким и длительным. Его реализация требует наличия достаточно большого количества различного лабораторного оборудования. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ диагностики степени тяжести гестоза 2, заключающийся в следующем. У пациентки производят забор венозной крови, стабилизируют ее цитратом натрия и путем центрифугирования получают обогащенную тромбоцитами плазму. Осажденные при центрифугировании крови эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором. Физиологический раствор удаляют, эритроциты гемолизируют путем суспендирования в дистиллированной воде и в пробирках готовят последовательные разведения гемолизата. Пробирки с обогащенной тромбоцитами плазмой и различными разведениями гемолизата инкубируют при 37 С. Затем в одну из пробирок с плазмой вносят гемолизат в разведении 10-2 и с помощью секундомера определяют в проходящем свете при постоянном покачивании время появления первых видимых глазом агрегатов тромбоцитов. Повторяют исследование во второй пробирке с обогащенной тромбоцитами плазмой и разведением гемолизата 10-6. Показания теста выражают в секундах времени агрегации (ВА). С использованием полученных результатов по математической формуле определяют индекс активации тромбоцитов(ИАТ). С помощью другой математической формулы определяют агрегационную активность тромбоцитов (ААТ). На основании анализа данных определения ВА, ИАТ, ААТ при наличии повышения чувствительности тромбоцитов к гемолизату диагностируют различную степень тяжести гестоза. Однако способ-прототип является трудоемким, достаточно длительным, его осуществление требует выполнения большого числа подготовительных операций и вычислений. Кроме того, применяемый при реализации способа гемолизат повреждает тромбоциты, что снижает достоверность диагностики гестоза. Задачей предлагаемого изобретения является упрощение определения степени тяжести гестоза, ускорение и повышение точности постановки диагноза. Поставленная задача решается следующим образом. Способ определения степени тяжести гестоза, включающий получение обогащенной тромбоцитами плазмы из венозной крови беременной, внесение индуктора агрегации тромбоцитов и оценку агрегационной способности тромбоцитов в исследуемом образце, отличающийся тем, что в качестве индуктора агрегации тромбоцитов используют протеазу в не повреждающей тромбоциты концентрации, а оценку агрегационной способности тромбоцитов осуществляют по величине светопропускания исследуемого образца, причем при значении светопропускания в пределах 50-69 степень гестоза определяют как легкую, в пределах 35-49 как среднюю и в пределах 0-34 как тяжелую. Сущность предлагаемого изобретения поясняется чертежами, где 2 10282 1 2008.02.28 на фиг. 1 показана кинетика протеазо-индуцированной агрегации тромбоцитов беременной без диагноза гестоз на фиг. 2 показана кинетика протеазо-индуцированной агрегации тромбоцитов беременной с диагнозом гестоз легкой степени на фиг. 3 показана кинетика протеазо-индуцированной агрегации тромбоцитов беременной с диагнозом гестоз средней степени на фиг. 4 показана кинетика протеазо-индуцированной агрегации тромбоцитов беременной с диагнозом гестоз тяжелой степени. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. У беременной утром натощак из локтевой вены берут 3 мл крови, помещают кровь в центрифужную пробирку, смешивают со стабилизатором - 3,8 раствором цитрата натрия в соотношении 91 и путем центрифугирования при 200 в течение 7-10 мин получают обогащенную тромбоцитами плазму. Затем 225 мкл обогащенной тромбоцитами плазмы и 225 мкл фосфатно-солевого буфера, содержащего катионы кальция, переносят в круглую пластиковую кювету автоматизированного агрегометра АР 2110 производства СОЛАР(Беларусь) и добавляют 50 мкл раствора протеазы (индуктор агрегации тромбоцитов) в низких. Протеазо-индуцированная агрегация тромбоцитов быстро развивается и завершается в течение нескольких (3-7) минут. Поскольку при агрегации клеток уменьшается светорассеяние обогащенной тромбоцитами плазмы, то, измеряя величину светопропускания исследуемых образцов, можно оценить способность тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации. Возможность определения степени тяжести гестоза с помощью предлагаемого способа основана на том, что способность тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации снижается в соответствии со степенью его тяжести. При беременности без гестоза способность тромбоцитов к агрегации под действием протеазы максимальна. Близкие к максимальным имеют и конечные значения светопропускания образцов обогащенной тромбоцитами плазмы (регистрируемые после завершения протеазо-индуцированной агрегации клеток). При гестозе легкой степени способность тромбоцитов к агрегации под действием протеаз незначительно снижается. Гестоз средней степени тяжести характеризуется существенно сниженной способностью тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации. При гестозе тяжелой степени агрегационная способность у тромбоцитов слабо выражена или вовсе отсутствует. Соответственно, по мере возрастания степени тяжести гестоза будут снижаться конечные величины светопропускания образцов обогащенной тромбоцитами плазмы. Следовательно, значения светопропускания исследуемых образцов отражают способность тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации и имеют диагностическую ценность. При этом величины светопропускания образцов обогащенной тромбоцитами плазмы при гестозе тяжелой степени будут иметь наиболее низкие или близкие к нулевым значения. Таким образом, регистрируемые агрегометром значения светопропускания исследуемых образцов в пределах 50-69 диагностируют легкую степень гестоза, 35-49- среднюю степень, 0-34- тяжелую степень гестоза. Сущность изобретения поясняется примерами. Пример 1. Больная З., 29 лет. Поступила в отделение патологии беременных с диагнозом беременность , 29 недель, угрожающие преждевременные роды. Нейро-циркуляторная дистония (НЦД) по гипертоническому типу. При поступлении артериальное давление (АД) равно 130/90 мм рт. ст., в анализе мочи выявляются следы белка. Определена способность тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации по интенсивности светопропускания, которая составила 82(фиг. 1). На основании результатов измерения интенсивности светопропускания суспензии тромбоцитов диагноз гестоза исключен. Диагноз клинический беременность , 29 недель. НЦД по гипертоническому типу. В дальнейшем беременность протекала без патологии. 3 10282 1 2008.02.28 Родоразрешена в срок. Проведена операция кесарева сечения в связи с тазовым предлежанием плода. Послеоперационный период без особенностей. Выписана домой на 9 сутки в удовлетворительном состоянии. Пример 2. Больная К., 31 года поступила в отделение патологии с диагнозом беременность 33-34 недели. Гестоз средней степени. Угрожающие преждевременные роды. Возрастная первородящая НЦД по кардиальному типу. Пролапс митрального клапана, Н 0. При поступлении АД 140/90 мм рт. ст. Отеки голеней. В анализе мочи белок 0,66 г/л. С учетом результатов измерения светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы после внесения в нее протеазы, которое составило 60(фиг. 2), поставлен диагноз гестоз легкой степени. Беременность 33-34 недели. Угрожающие преждевременные роды. Возрастная первородящая НЦД по кардиальному типу. Пролапс митрального клапана, Н 0. После лечения беременность протекала до 38 недель с периодическим повышением АД до 130/90 мм рт. ст., в моче - следы белка. Родоразрешена в срок путем операции кесарево сечение в связи с преждевременным излитием вод, слабостью родовой деятельности. В родах повышение АД до 130/90 мм рт. ст. Окончательный клинический диагноз Беременность 39 недель, роды , срочные. Гестоз легкой степени. Возрастная первородящая НЦД по кардиальному типу. Пролапс митрального клапана, Н 0. Преждевременное излитие вод, слабость родовой деятельности. Ребенок родился с оценкой по Апгар 7/8 баллов. Послеоперационный период протекал без особенностей. Выписана домой с ребенком на 10-е сутки. Пример 3. Больная Д., 24 года, поступила в отделение патологии с диагнозом беременность 3132 недели. Гестоз средней степени. Угрожающие преждевременные роды. Нарушение жирового обмена. Хронический пиелонефрит вне обострения. При поступлении АД 130/90 мм рт. ст. Отеки голеней. В анализе мочи белок 0,033 г/л. На основании результатов измерения интенсивности светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы после внесения в нее протеазы, которая составила 40(фиг. 3),установлена пониженная способность тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации. Выставлен клинический диагноз беременность 31-32 недели. Гестоз средней степени. Угрожающие преждевременные роды. Нарушение жирового обмена. Хронический пиелонефрит вне обострения. После лечения беременность протекала в течение 38 недель с периодическим повышением АД до 130/90 мм рт. ст., в моче - следы белка. Роды произошли в 38 недель. В родах повышение АД до 140/90 мм рт. ст. Окончательный клинический диагноз Беременность 38 недель, роды , срочные. Гестоз средней степени. Нарушение жирового обменастепени. Хронический пиелонефрит вне стадии обострения. Пример 4. Больная Т., 28 лет. Поступила в отделение патологии беременных в сроке беременности 34 недели. При поступлении АД 140/90 мм рт. ст., отеки голеней, в анализе мочи белок 0,66 г/л. Диагноз при поступлении беременность 34 недели. Гестоз средней степени. НЦД по гипертоническому типу. Пролапс митрального клапанаст. Н 0. С учетом результатов определения способности тромбоцитов к протеазо-индуцированной агрегации по интенсивности светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы,равной 14(фиг. 4), выставлен клинический диагноз беременность 34 недели. Гестоз тяжелой степени. НЦД по гипертоническому типу. Пролапс митрального клапанаст. Н 0. 10282 1 2008.02.28 Эффекта от лечения не было. Окончательный клинический диагноз - беременность 38 недель, НЦД по гипертоническому типу. Пролапс митрального клапанаст. Н 0. Гестоз тяжелой степени. Принято решение о досрочном родоразрешении. Родоразрешение в сроке 36 недель путем кесарева сечения. В послеродовом периоде АД 140/90 мм рт. ст.,130/90 мм рт. ст., белок в анализе мочи 0, 033 г/л. В связи с недоношенным плодом переведена на 2-й этап выхаживания. Выписана из стационара на 21 сутки. Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и достоверно определять степень тяжести гестоза, что способствует своевременному корректированию состояния здоровья матери и плода. Источники информации 1. А.с. СССР 1792533 МПК 501 33/48, 1993. 2. А.с. СССР 1691739, МПК 501 33/48, 1991. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5