Тест-система для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОБЛИГАТНО-АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Косинец Александр Николаевич Окулич Виталий Константинович Косинец Владимир Александрович Погоцкий Алексей Константинович Плотников Филипп Викторович Шилин Владимир Евгеньевич Федянин Сергей Дмитриевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Тест-система для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам, содержащая лунки с высушенными антибиотиками, питательной средой для выращивания облигатно-анаэробных микроорганизмов, отличающаяся тем, что выполнена в виде комплекта, включающего плоскодонный планшет на 96 лунок, 4 флакона питательной среды АБ, 4 ампулы стерильного физиологического раствора, 4 наконечника стерильных для автоматической пипетки вместимостью 200 мкл.(56) 1..,.,.,( 96)//. - 1999. 37(6). - . 1824-1828. 2. Свидетельство РБ о регистрации компьютерной программы 106, 2009. 75962011.10.30 Полезная модель относится к медицине, а именно к бактериологии, и может быть использована для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам в полужидкой среде. Прототипом предложенной полезной модели является тест-системафирмы(Франция) 1. Она предназначена для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам. Стрипсостоит из 16 пар лунок. Первая пара лунок не содержит антибиотиков и используется для постановки положительного контроля. Следующие 14 пар лунок содержат антибиотики в одной или нескольких концентрациях (пенициллин- 0,5 мг/л, пенициллин- 2 мг/л,амоксициллин/клавуланат - 4 и 2 мг/л, амоксициллин/клавуланат - 8 и 4 мг/л, пиперациллин - 32 мг/л, пиперациллин - 64 мг/л, пиперациллин/тазобактам - 32 и 4 мг/л, пиперациллин/тазобактам 64 и 4 мг/л, тикарциллин/клавуланат - 32 и 2 мг/л, тикарциллин/клавуланат - 64 и 2 мг/л, цефокситин - 16 мг/л, цефокситин - 32 мг/л, цефотетан 16 мг/л, цефотетан - 32 мг/л, имипенем - 4 мг/л, имипенем - 8 мг/л, клиндамицин - 2 мг/л,клиндамицин - 4 мг/л, хлорамфеникол - 8 мг/л, хлорамфеникол - 16 мг/л, метронидазол 8 мг/л, метронидазол - 16 мг/л, амоксициллин - 2 мг/л, амоксициллин - 4 мг/л, амоксициллин - 16 мг/л, амоксициллин/клавуланат - 16 и 2 мг/л, тикарциллин - 64 мг/л, метронидазол - 4 мг/л). Последняя пара лунок не содержит субстратов. В состав набора входят стрип, 10 ампул со средойдля культивирования анаэробных бактерий. Постановка определения чувствительности проводится следующим образом. Приготавливают суспензию исследуемой культуры плотностью 3 единицы Мак-Фарланда. Для этого делают посев в жидкую среду и культивируют до достижения необходимой оптической плотности или вскрывают ампулу со средой для приготовления суспензии 20 А или физиологическим растворомхлорида натрия 0,85 и переносят в нее одну или несколько колоний. Оптическую плотность определяют используя стандарты Мак-Фарланда или денситометрили. Пипеткой переносят 200 мкл полученной суспензии в ампулу со средой. Гомогенизируют суспензию на основе средыэлектронной пипеткой . Той же пипеткой вносят по 135 мкл суспензии в каждую лунку стрипа. Накрывают стрип крышкой и как можно быстрее переносят его в анаэробные условия. Инкубируют в течение 24-48 часов при температуре 362 С в анаэробных условиях. После инкубации производят визуальный учет или инструментальный учет на прибореили. Визуальный учет для антибиотиков, представленных в двух концентрациях. Визуальный учет 1 конц. 2-ая конц. Визуальный учет для антибиотиков, представленных в одной концентрации амоксициллин/клавуланат - 16 и 2 мг/л, тикарциллин - 64 мг/л, метронидазол 4 мг/л. Визуальный учетпрозрачнаямутная Недостатком прототипа является то, что не все антибиотики, имеющиеся в тестсистеме, к которым определяется чувствительность облигатно-анаэробных микроорганиз 2 75962011.10.30 мов, доступны в лечебно-профилактических учреждениях Республики Беларусь (пиперациллин, пиперациллин/тазобактам) и в то же время отсутствуют антибиотики критически важные в современной антибиотикотерапии тяжелых инфекций, вызванных облигатноанаэробными микроорганизмами (моксифлоксацин, меропенем). Кроме того, стоимость тест-системы прототипа для определения чувствительности к антибиотикам только одного штамма обходится более 20000 белорусских рублей. Задача полезной модели создать тест-систему для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам, позволяющую одномоментно определять чувствительность к 12 антимикробным препаратам. Реализация данной задачи осуществляется за счет того, что после посева исследуемого материала на питательную среду производят оценку чувствительности сразу 4 облигатноанаэробных бактерий к антибиотикам, используя комплект, включающий плоскодонный планшет на 96 лунок, который содержит высушенные в специальных условиях вакуумной камеры антибиотики, наиболее часто использующиеся для лечения инфекций, вызванных облигатно-анаэробными бактериями, в стационарах Республики Беларусь, 4 флакона питательной среды АБ, 4 ампулы стерильного физиологического раствора, 4 наконечника стерильных для автоматической пипетки вместимостью 200 мкл. Предложенная полезная модель поясняется следующими материалами на фигуре изображен внешний вид комплекта тест-системы для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерий к антибиотикам. Предложенная тест-система для определения чувствительности облигатно-анаэробных бактерийк антибиотикам представляет собой комплект, включающий плоскодонный планшет (1), питательную среду АБ для культивирования облигатно-анаэробных бактерий 4 флакона (2), стерильный физиологический раствор в ампулах по 5 мл - 4 шт. (3), наконечники стерильные для автоматических дозаторов вместимостью 200 мкл - 4 шт. (4). Планшет с антибиотиками содержит 96 лунок (12 колонок и 8 рядов, из них по 2 ряда (24 лунки) для определения чувствительности одного штамма микроорганизма). Всего планшет позволяет определять чувствительность к 12 антибиотикам четырех штаммов микроорганизмов. Последняя лунка каждого четного ряда не содержит антибиотика и служит для определения положительного контрольного роста. Остальные 23 лунки содержат антибиотик в 2 пороговых концентрациях, исключая тикарциллин, пенициллин - 0,5 мкг/мл,пенициллин - 2 мкг/мл, амоксициллинклавуланат - 4 мкг/мл, амоксициллинклавуланат - 8 мкг/мл, тикарциллинклавуланат - 32 мкг/мл, тикарциллинклавуланат 64 мкг/мл, цефокситин - 16 мкг/мл, цефокситин - 32 мкг/мл, имипенем - 4 мкг/мл, имипенем - 8 мкг/мл, меропенем - 4 мкг/мл, меропенем - 8 мкг/мл, клиндамицин - 2 мкг/мл,клиндамицин - 4 мкг/мл, хлорамфеникол - 8 мкг/мл, хлорамфеникол - 16 мкг/мл, метронидазол - 8 мкг/мл, метронидазол - 16 мкг/мл, моксифлоксацин - 2 мкг/мл, моксифлоксацин 8 мкг/мл, амоксициллин - 2 мкг/мл, амоксициллин - 4 мкг/мл, тикарциллин - 32 мкг/мл). Работает тест-система следующим образом. Готовят взвесь микроорганизмов. Для этого бактериологической петлей вносят одну или более колоний анаэробных бактерий, выращенных в течение 18-48 часов при 37 С на селективной среде для анаэробов, в ампулу с 2 мл стерильного раствора хлорида натрия с массовой долей 0,9 . Оптическая плотность взвеси в ампуле после внесения микроорганизма должна соответствовать 4 оптическим единицам Мак-Фарланда. Этого достигают путем измерения оптической плотности взвеси на денситометре или на спектрофотометре при длине волны 550 нм - 1,0 . Концентрация микроорганизмов в данном случае составляет 1,2109 КОЕ/мл. Переносят в ампулу с питательной средой АБ для культивирования облигатноанаэробных бактерий 200 мкл приготовленной взвеси микроорганизмов, тщательно перемешивают. Вносят в каждую лунку планшета, содержащего высушенные антибиотики, по 135 мкл питательной среды с микроорганизмами. Конечная концентрация бактерий со 3 75962011.10.30 ставляет 5107 КОЕ/мл. Планшет накрывают крышкой и инкубируют 18-48 ч при 35-37 С в термостате. Учет результатов проводят визуальным и инструментальным методами. Для антибиотиков, представленных в двух концентрациях. Визуальный учет 1 конц. 2-ая конц.прозрачнаяпрозрачная Для антибиотиков, представленных в одной концентрации тикарциллин - 32 мкг/мл. Визуальный учетпрозрачнаямутная При отсутствии роста в лунках с 1-й и 2-й концентрацией антибиотика штамм чувствителен При наличии роста в лунке с 1-й концентрацией, но отсутствии роста в лунке со 2-й П концентрацией штамм обладает промежуточной чувствительностью При наличии роста в лунках с 1-й и 2-й концентрацией штамм считать устойчивым Ч Инструментальный учет производят на иммуноферментном анализаторе АИФ М/340 или Ф 300 с помощью программного обеспечения 2. При отсутствии роста в контрольной лунке тест считают недействительным, и его необходимо повторить. Применение полезной модели позволяет сократить время постановки опыта оценки чувствительности облигатно-анаэробных микроорганизмов к антибиотикам с 3-4 часов до 15 минут. Стоимость определения чувствительности одного облигатно-анаэробного микроорганизма при использовании предложенной тест-системы составляет менее 3000 белорусских рублей, а при использовании зарубежного аналога - 20000 белорусских рублей. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4