Ингибитор размножения вируса гриппа

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНГИБИТОР РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА ГРИППА(71) Заявители Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики БеларусьИнститут органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук(72) Авторы Бореко Евгений Иванович Флехтер Оксана БорисовнаНигматуллина Лена РамилевнаБалтина Лидия АшрафовнаГалин Фанур ЗуфаровичТолстиков Генрих Александрович(73) Патентообладатели Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики БеларусьИнститут органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук в качестве ингибитора размножения вируса гриппа. Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть использовано для подавления размножения вирусов гриппа. Известны противовирусные свойства тритерпеноида лупанового ряда, бетулиновой кислоты, в отношении вируса герпеса простого 1. 7809 1 2006.02.28 Более высокими противовирусными свойствами в отношении вируса герпеса простого обладают другие тритерпеноиды лупанового ряда, бетулоновая кислота, бетулин, аллобетулин и его производные 2, 3, 6. Бетулин не обладает противовирусными свойствами в отношении вирусов гриппа 4. В патентной и научно-технической литературе информация о противовирусных свойствах лупановых и родственных тритерпеноидов. включая производные аллобетулина в отношении вирусов гриппа, отсутствует. Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием в отношении вируса гриппа. Поставленная задача достигается применением 3-кето-28-оксо-аллобетулина следующего строения 3-Кето-28-оксо-аллобетулин относится к производным аллобетулина, обладающим противогерпетическими свойствами 6. Авторами обнаружено неочевидное свойство, позволяющее применить 3-кето-28 оксо-аллобетулин в качестве ингибитора размножения вируса гриппа. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Получение 3-кето-28-оксо-аллобетулина. К раствору 1 ммоль бетулоновой кислоты (0,46 г) в 10 мл хлороформа добавляют при перемешивании 2 мл трифторуксусной кислоты. Через 8 мин (ТСХ-контроль) реакционную массу нейтрализуют 15 раствором соды, промывают водой, сушат над 4, растворитель упаривают в вакууме водоструйного насоса. Выход 0,43 г (95 ) в виде белых кристаллов. Тпл.270. Найдено.С - 79,17, Н - 10,20. С 30 Н 47 О 3 ( 455,7). Вычислено,С - 79,07, Н - 10,39. ИК-спектр (, см-1, вазелиновое масло) 720, 780, 930, 980, 1020, 1060,1115, 1170, 1200, 1260, 1390, 1460, 1710, 1780. Спектр 1 Н ЯМР (, м.д., 3) 0,86, 0,93,0,94, 1,01, 1,05 (7 с. 7 СН 3), 1,15-2,00 (м, СН 2, СН), 3,90 (с, 1, Н 19). Спектр 13 С ЯМР (,м.д., 3) 13,6. 15,3, 16,4, 19,5, 21,0, 21,4, 24,0, 25,5, 26,5, 26,7, 27,9, 28,7, 31,9, 32,3,33,0, 33,5, 34,0, 36,1, 37,0, 39,8, 40,0, 40,5, 46,1, 46,7, 47,3, 50,6, 55,0, 85,9, 179,8, 217,9. Пример 2. При проведении испытаний с вирусом гриппа //34 (71) используют культуру клеток первичных фибробластов эмбрионов кур (ФЭК). Испытания проводят методом редукции количества бляшек под агаровым покрытием. Монослойную культуру ФЭК, выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют различными разведениями вируса в пределах 0,01-0,00001 БОЕ/клетка путем нанесения на клетки вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37 С. Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательного покрытия на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 бактагара и 0,005 нейтрального красного 7809 1 2006.02.28 10 этаноле. После застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 36 ч и затем подсчитывают количество бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляют титр вируса. Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Вычисляют также концентрацию 50 подавления размножения вируса (среднеэффективная концентрация, 50) и отношение максимальной переносимой концентрации (МПК) к ЕС 50. МПК соединений для неинфицированных культур клеток определяют после 72 ч инкубации. Полученные результаты приведены в таблице. Как видно из данных таблицы, 3-кето-28-оксо-аллобетулин подавляет размножение вируса гриппа в культуре клеток. В то же время у препарата сравнения, бетулина, противовирусные свойства отсутствуют. Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании 3-кето-28-оксо-аллобетулина удается получить подавление размножения вируса гриппа в культуре клеток. Противовирусные свойства 3-кето-28-оксо-аллобетулинаи бетулинав отношении вируса гриппа Соединение Титр вируса Разность с контро,БОЕ/мл лем,БОЕ/мл 2,00 2,00 2,00 2,00 3,550,02 3,450,06 3,660,05 3,780,08 5,500,05 5,680,01 5,620,06 5,530,05 5,570,06 5,690,1 5,900,03 5,870,01 Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вирусов гриппа и редукции вызываемого ими заболевания. В связи с установленными свойствами заявляемое вещество имеет большое практическое значение. На его основе могут быть разработаны лекарственные формы препарата для лечения и профилактики гриппа. Ожидается, что такой препарат будет эффективен также и при инфекции, вызванной вариантом вируса гриппа, устойчивым к действию известного лекарственного средства ремантадина, а также при развитии лекарственной устойчивости в ходе лечения. Следовательно, в таких случаях может быть оправдано применение средств на основе 3-кето-28-оксо-аллобетулина в качестве препарата для самостоятельной или комбинированной терапии. Препарат на основе 3-кето-28-оксоаллобетулина может иметь применение и при профилактике гриппа, особенно в коллективах полузакрытого типа, в частности семейных очагах. При появлении заболевших в таких 3 7809 1 2006.02.28 коллективах для лечения, как правило, используют ремантадин как наиболее эффективный этиотропный препарат. Однако после нескольких дней приема ремантадина больной становится распространителем ремантадинустойчивого вируса гриппа, который может вызвать заболевание у остальных членов коллектива 5. При этом применение ремантадина лицами окружения с профилактической или лечебной целью может быть уже не столь эффективным. В данном случае целесообразно профилактическое применение препаратов на основе 3-кето-28-оксо-аллобетулина самостоятельно или в комбинации с ремантадином. Для выработки окончательных рекомендаций по применению 3-кето-28-оксо-аллобетулина с целью лечения и профилактики вирусных инфекций, в том числе тех из них,которые вызываются вариантами возбудителей, устойчивыми к известным и применяющимся препаратам, необходимы изучение безвредности, разработка лекарственной формы, клинические испытания и отработка оптимальных схем применения. Источники информации 1. Патент США 6,214,350, МПК А 61 К 035/78, 2001. 2..,.,,..,.,.,., . -.1999 289(1) 72-8. 3. Патент США 5,750,578, МПК 01 027/0001 031/0061 039/245, 1998. 4. Платонов В.Г., Зорина А.Д., Гордон М.А., Чижов Н.П., Балыкина Л.В., Михайлов Ю.Д.,Иванен Д.Р., Тран Ким Кви, Шавва А.Г. Исследование противогриппозной активности тритерпеноидов // Хим. фарм. журнал. - 1995. -29(2). - С. 42-46. 5. Бореко Е.И., Павлова Н.И. Амантадин и ремантадин в профилактике и лечении гриппа // Мед. Новости. - 1999. -3. - С. 20-25. 6. Патент США 6,369,101, МПК А 61 К 031/3407 307/7707 307/00, 2002. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.