Полимер-лекарственная форма цис-диамминдихлорплатины (II), обладающая противоопухолевым действием

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявители Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Государственное учреждение Научно-исследовательский институт онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова(72) Авторы Бычковский Павел Михайлович Юркштович Татьяна Лукинична Капуцкий Федор Николаевич Жаврид Эдвард Антонович Шелег Сергей Владимирович Беляев Сергей Александрович(73) Патентообладатели Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Государственное учреждение Научно-исследовательский институт онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова(57) Полимер-лекарственная форма цис-диамминдихлорплатиныв виде салфетки или бинта, обладающая противоопухолевым действием, содержащая в качестве полимера 6 карбоксицеллюлозу со степенью полимеризации 50 и степенью замещения по карбоксильным группам х 0,451,0 при следующем соотношении компонентов, мас.цис-диамминдихлорплатина 3-5 6-карбоксицеллюлоза 95-97.(56)4612009, 1986.98/47496 2.2033998 1, 1995.1474919 , 1994.5633016 , 1997.4278660, 1981. Изобретение относится к области биологически активных соединений, касается противоопухолевого средства на основе цис-диамминдихлорплатиныи может быть использовано в медицине в качестве препарата, обладающего локальным противоопухолевым действием и рассасывающегося в организме при имплантации, в частности в нейрохирургии для предотвращения возникновения рецидивов злокачественных образований головного мозга при хирургическом удалении 1-3. 6420 1 Известен препарат Цисплатин (платамин, цис-диамминдихлорплатина (, представляющий собой соединение из группы цитостатиков цис-диамминдихлорплатину ,эффективное, как показали. в 1969 г., в отношении солидной саркомы-180 и опухоли 1210 при лейкемии у мышей и имеющий формулу цис-РС 2(Н 3)2. Исследованиясвидетельствуют о том, что ДНК является основной мишенью цисплатина 4. Широкий спектр активности препарата был продемонстрирован на разных экспериментальных опухолях меланома В 16, карциносаркома 256, карциносаркома легкихи др. Цисплатин нашел широкое применение в химиотерапии рака яичников,мочевого пузыря и различных злокачественных новообразований головы и шеи. Однако препарат обладает высокой ото- и нефротоксичностью (изменения со стороны слуха и почек, что лимитирует его широкое применение). Клиническое применение цисплатина для локальной химиотерапии злокачественных опухолей головного мозга также выявило существенный недостаток, а именно высокую нейротоксичность 5. Задачей изобретения является создание биорассасывающейся полимер-лекарственной формы цис-диамминдихлорплатиныдля локальной (местной) химиотерапии злокачественных новообразований головного мозга, обладающей уменьшенным нейротоксическим действием и увеличенным цитостатическим эффектом. Поставленная задача решается тем, что, согласно изобретению, в качестве противоопухолевого средства предложена полимер-лекарственная форма на основе цис-диамминдихлорплатины , содержащая в качестве полимера 6-карбоксицеллюлозу со степенью полимеризации 50 и степенью замещения 0,451,0 при следующем соотношении компонентов (мас. ) цис-диамминдихлорплатина 3-5 6-карбоксицеллюлоза 95-97. Получение смеси цис-диамминдихлорплатиныи 6-карбоксицеллюлозы осуществляли путем окисления целлюлозы двуокисью азота и последующим проведением процесса взаимодействия окисленной целлюлозы с цис-диамминдихлорплатиной . В качестве исходных материалов для получения заявленного средства использовали хлопковую целлюлозу в виде трикотажного полотна, марли, бязи и др. Смесь цис-диамминдихлорплатиныс 6-карбоксицеллюлозой получали следующим образом 100 г целлюлозы помещали в автоклав, который герметизировали и вакуумировали до остаточного давления 0,3-0,5 атм, после чего в автоклав подавали 250 мл жидкой двуокиси азота и нагревали до температуры 36-45 С. После достижения в автоклаве температуры 36-45 С проводили процесс окисления в течение 0,5-1,5 часа. По окончании окисления полученную окисленную целлюлозу отмывали дистиллированной водой до исчезновения в промывных водах реакции на 2-, 3 ионы и определяли в ней содержание карбоксильных групп кальций-ацетатным методом. Степень замещения окисленной целлюлозы по карбоксильным группамрассчитывали по формуле 162, 450014 где С - содержание карбоксильных групп в 6-карбоксицеллюлозе, . В 1000 мл 0,2 раствора цис-диамминдихлорплатинывносили 100 см 2 (1,6 г) окисленной целлюлозы (ОЕ 3,5 мгэкв/г). Процесс взаимодействия проводили в течение 20 часов при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Полученные образцы извлекали из раствора и сушили на воздухе. Количество цис-диамминдихлорплатиныв полученном препарате определяли атомно-абсорбционным методом по платине. Содержание цис-диамминдихлорплатинырасчитывалась по формуле. 5,1310 6 6420 1 где- концентрация цис-диамминдихлорплатиныв препарате, ммольг-1 а - концентрация цис-диамминдихлорплатиныв фотометрируемом растворе,- объем царской водки, в котором растворяли навеску цис-диамминдихлорплатины 6-карбоксицеллюлоза, мл- масса навески цис-диамминдихлорплатина-6-карбоксицеллюлоза, г. Полученные препараты проанализированы также методом ИК-спектроскопии с применением спектрометра -75. В спектрах не проявляются интенсивные полосы поглощения 1430 и 1610 см-1 симметричных и асимметричных валентных колебаний карбоксилат-ионов, что свидетельствует об отсутствии солеобразования. Измерение рН осуществлялось на ионометре. Изменение рН обусловлено кислотными свойствами МКЦ. Условия и состав полученных смесей приведены в таблице. Медико-биологические испытания проводились для всех указанных смесей. Условия получения и состав заявляемой смеси Условия получения Состав получаемого соединения Конц.расВремя ДДП ч 1 36 0,5 0,14 4,7 24 97,0 3,0 0,45 300 2 45 1,0 0,16 4,5 24 96,7 3,3 0,57 70 3 45 1,0 0,17 4,5 24 96,3 3,7 0,57 75 4 45 1,5 0,19 4,2 24 95,8 4,2 0,67 150 5 42 1,2 0,20 4,1 24 95,4 4,6 1,00 50 6 42 1,2 0,21 4,1 24 95,4 4,6 0,67 150 7 45 1,5 0,22 3,9 24 95,2 4,8 0,67 150 8 42 1,2 0,22 3,7 24 95,0 5,0 1,00 50 Цис-ДДП - цис-диамминдихлорплатинаКЦ - 6-карбоксицеллюлоза. Цитостатическое действие исходной цис-диамминдихлорплатиныи смеси цисдиамминдихлорплатина-6-карбоксицеллюлоза изучали на монослойной культуре опухолевых клеток , выращиваемой в питательной среде 199 с добавлением 10 -ой сыворотки эмбрионов коровы и 10 мкг/мл канамицина. Для эксперимента культуру рассеивали в пенициллиновые флаконы по 100 тыс. клеток в 2 мл среды. Пластинки 6-карбоксицеллюлозы с цис-диамминдихлорплатиной добавляли непосредственно в питательную среду клеток в конечной концентрации препарата 1,5 и 10 мкг-мл-1 среды. В контрольные флаконы добавляли раствор цис-диамминдихлорплатины . После 24-часовой инкубации клеточных культур с препаратом оценивали процент жизнеспособных клеток. Полученные данные свидетельствовали о том, что полимер-лекарственная форма цис-диамминдихлорплатины(ПЛФ-Ц) так же, как и чистая цис-диамминдихлорплатина , обладает цитостатическим эффектом (процент живых клеток при конечной концентрации препаратов 5 мг-мл-1 был соответственно 49,4 для чистой инкубации и 39,6 для ПЛФ-Ц). Аналогичные данные были полученына первичной клеточной культуре мультиформной глиобластомы человека ина интактной нервной ткани головного мозга крысы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют об увеличении цитостатического эффекта на различных моделях опухолей. Исследование нейротоксического эффекта ПЛФ-Ц было выполнено на белых крысах в НИИ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова. 3 6420 1 ПЛФ-Ц (пластинки 0,25 мм 2 с количеством цис-диамминдихлорплатины 0,3 мг) имплантировали в условиях хирургической операции в головной мозг крыс. В контрольной группе крыс имплантировали чистую субстанцию 6-карбоксицеллюлозы. Для морфологического исследования забирали головной мозг крыс спустя 7-ой, 14-ый и 21-ый день с момента имплантации полимеров. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону и тионином по Нисслю. При просмотре гистологических препаратов было установлено, что при имплантации в головной мозг крыс ПЛФ-Ц не выявлялось выраженных нейротоксических изменений интактной нервной ткани. Таким образом, ПЛФ-Ц не обладает выраженным нейротоксическим эффектом на интактную ткань головного мозга, имеет повышенное цитостатическое действие, что очень важно в условиях выполнения нейрохирургических операций на головном мозге человека по поводу злокачественных глиом. На основании полученных данных создана ПЛФ-Ц, удовлетворяющая требованиям применения в клинической практике. Источники информации 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Вильнюс 1994. Т. 2. - С. 398. 2..,,.//. , 1987. . 50. . 223-226. 3. Бертрам Г. Катцунг Базисная и клиническая фармакология. - М. 1998. Т. 2. - С. 429. 4. Преображенская М.Н. Поиск молекулярных мишеней химиотерапии рака // Журнал Всесоюзного хим. об-ва им. Менделеева, 1986. Т. 31. -3. - С. 332. 5. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологии // Сб. науч. работ. Мн. 1997. - С. 275-278. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.