5-карбоксипентиламмониевая соль 6-карбоксилцеллюлозы, обладающая кровоостанавливающим действием

61 15/28 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(71) Заявители НИИ физико-химических проблем Белгосуниверситета Борисовский завод медицинских препаратов Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт Изобретение относится к области биологически активных соединений, касается 5-карбоксипентиламмониевой соли 6-карбоксицеллюлозы и может быть использовано в медицине в качестве препаратов, обладающих кровоостанавливающим действием и рассасывающихся в организме при имплантации, в частности в хирургии, травматологии, стоматологии, гинекологии для остановки кровотечений любой этиологии. Известен препарат Кровоостанавливающая марля 1, представляющий собой 6-карбоксилцеллюлозу и имеющий формулу С 5 Н 52(ОН)2(СН 2 ОН)1-(СООН),где -степень полимеризации,300,-степень замещения по карбоксильным группам,0,451,0. Марлю кровоостанавливающую используют для интраоперационной остановки кровотечений при вмешательствах на паренхиматозных органах, сердце, легких и др. Однако марля кровоостанавливающая недостаточно эффективно останавливает обычные кровотечения, что требует ее применения в несколько слоев. Еще ниже эффективность марли кровоостанавливающей для остановки кровотечений при нарушении свертывающей системы крови (гемофилия, тромбоцитопения и др.) Кроме этого, время рассасывания марли кровоостанавливающей в организме составляет 30 - 40 дней, что обуславливает отрицательную реакцию организма на длительно присутствующее инородное тело. В связи с этим марлю кровоостанавливающую рекомендуется после достижения гемостаза извлекать из организма, что не позволяет надежно предотвращать повторные кровотечения. Задача изобретения - повышение эффективности кровоостанавливающего действия, в том числе и при нарушениях свертывающей системы крови, а также сокращение сроков рассасывания в организме. 3047 1 Поставленная задача решается тем, что, согласно изобретению, в качестве кровоостанавливающего средства предложена 5-карбоксипентиламмониевая соль 6-карбоксилцеллюлозы общей формулы С 5 Н 52(ОН)2(СН 2 ОН)1-(СООН)-(3510) ,где -степень полимеризации,50,-степень замещения по карбоксильным группам,0,451,0,у-степень замещения по катионам 5-карбоксипентиламмония,у 0,31,0. Получение 5-карбоксипентиламмониевой соли 6-карбоксилцеллюлозы указанной общей формулы осуществляли путем окисления целлюлозы двуокисью азота и последующим проведением процесса взаимодействия окисленной целлюлозы с 6-аминогексановой кислотой. В качестве исходных материалов для получения заявляемого средства использовали хлопковую целлюлозу в виде трикотажного полотна, марли, бязи и др. 5-карбоксипентиламмониевую соль 6-карбоксилцеллюлозы получали следующим образом 100 г целлюлозы помещали в автоклав, который герметизировали и вакуумировали до остаточного давления 0,3 - 0,5 атм, после чего в автоклав подавали 250 мл жидкой двуокиси азота и нагревали до температуры 36 - 45 . После достижения в автоклаве температуры 36 - 45 проводили процесс окисления в течение 0,5 - 1,5 часа. По окончании окисления полученную окисленную целлюлозу отмывали дистиллированной водой до исчезновения в промывных водах реакции на 2-, О 3- - ионы и определяли в ней содержание карбоксильных групп кальций-ацетатным методом. Степень замещения окисленной целлюлозы по карбоксильным группамрассчитывали по формуле 162,450014 где Ссоон содержание карбоксильных групп в окисленной целлюлозе, . В 4 - 10 л 0,5 - 3,0 -ного раствора 6-аминогексановой кислоты добавляли 0,005 - 0,25 л 1 н раствора хлористоводородной кислоты до рН 4 - 7,5 и в полученный раствор вносили 100 г окисленной целлюлозы. Процесс взаимодействия проводили в течение 2 - 4-х часов при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Полученную 5-карбоксипентиламмониевую соль 6-карбоксилцеллюлозы извлекали из раствора и сушили на воздухе. В полученном препарате методом Кьельдаля определяли содержание азота. Степень замещения по катионам 5-карбоксипентиламмония (у) рассчитывали по формуле 16214 где- содержание азота, . Молекулярную массу полученных препаратов определяли методом гельхроматографии, исходя из которой рассчитывали степень полимеризации . Полученные препараты проанализированы также методом ИК-спектроскопии с применением спектрометра -75. В спектрах проявляются интенсивные полосы поглощения 1430 и 1610 см-1 симметричных и асимметричных валентных колебаний карбоксилат-ионов, что однозначно свидетельствует об образовании аммониевой соли. Условия получения и состав полученных соединений приведены в табл. 1. Таблица 1 Условия получения и состав заявляемого соединения Условия получения Температура Время К-ция Состав получаемого соединения Время взаимод.,час 2 2 2 2 4 2 4 2 3047 1 Кровоостанавливающее действие изучали на моделях поверхностного наружного, глубокого наружного и поверхностного кровотечений. Поверхностное наружное кровотечение моделировали путем скарификационных борозд на кожу спины морских свинок. Глубина борозд - вся собственно кожа, длина - 2 см. Скарификацию производили под внутрибрюшинным гексеналовым наркозом в дозе 120 мг/кг. Оценку степени остановки кровотечения проводили визуально, а скорость регистрировали по секундомеру. Глубокое наружное кровотечение моделировали посредством ампутации части хвоста белых крыс (строго 0,5 см от конца хвоста). При этом вскрывались хвостовые вены и артерии, но не затрагивался хвостовой отдел позвоночника. Ампутацию проводили под гексеналовым наркозом (гексенал внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг). Паренхиматозное кровотечение моделировали на белых крысах, кроликах и собаках. Животных наркотизировали внутрибрюшинным введением гексенала, широким разрезом вскрывали брюшную полость и осторожно выделяли печень. Из края печени иссекали участок паренхимы 10 - 15 мм длиной, 3 - 5 мм шириной. На поверхность раны накладывали кусочки препарата, на 1 - 2 мм превышающие размеры раневой поверхности. Экспериментальное нарушение гемокоагуляции моделировали в опытах на кроликах с помощью антикоагулянтов непрямого действия. Животным вводили внутрь фенилин в дозе 3 мг/кг один раз в сутки в течение 2-х дней до операции и 1 раз через 5 часов после нанесения резаной раны печени. На всех моделях кровотечений сравнивали кровоостанавливающее действие заявляемого соединения и кровоостанавливающей марли. Установлено, что заявляемое соединение и кровоостанавливающая марля практически мгновенно останавливают поверхностное наружное и глубокое нерезко выраженное наружное травматическое кровотечения. При более сильных глубоких наружных кровотечениях с повреждением вен и артерий, вызванных ампутацией части хвоста, более эффективно заявляемое соединение, т.к. оно останавливает кровотечение при использовании его в 1 слой. Для остановки кровотечения кровоостанавливающей марлей требовалось применение 2-х слоев или же 1 слоя, но подкрепленного бинтованием. Паренхиматозное печеночное кровотечение заявляемое соединение останавливало при применении его в 1 слой. Кровоостанавливающая марля обеспечивала достижение аналогичного эффекта только в 2 - 3 слоя. Паренхиматозное кровотечение с нарушением гемокоагуляции кровоостанавливающая марля останавливала за 40,5 мин, при этом 60 животных погибали на 2 - 3 день после операции от повторных внутренних кровотечений. Заявляемое соединение останавливало паренхиматозное кровотечение с нарушением гемокоагуляции за 2,750,25 мин, причем все животные выживали, повторных внутренних кровотечений не наблюдалось (см. табл.2). Таблица 2 Гемостатические свойства заявляемого соединения и кровоостанавливающей марли при паренхиматозных кровотечениях с нарушением гемокоагуляции Препарат Кровоостанавливающая марля Заявляемый препарат Примечание 60 животных погибли от повторных внутренних кровотечений повторные кровотечения не наблюдались-//-//-//-// Таким образом, заявляемое соединение значительно более эффективно, чем кровоостанавливающая марля, останавливает глубокие наружные, паренхиматозные и паренхиматозные с нарушением гемокоагуляции кровотечения. Рассасываемость заявляемого препарата изучали на кроликах и собаках при экспериментальной травме печени. После достижения гемостаза брюшную полость зашивали наглухо. Снятие животных с опыта проводили электрошоком через разные интервалы времени после оперативного вмешательства. У животных, снятых на 7-е сутки, отмечается плотная фиксация заявляемого препарата к ране печени и рассасывание свободных участков. Аналогичная картина на 7-е сутки наблюдается и при применении марли кровоостанавливающей. К 21 суткам заявляемый препарат в зависимости от химического состава либо во 3047 1 обще не обнаруживается в области раны, либо определяется в виде остатков волокна лишь при соскобе. Деструкция марли кровоостанавливающей к этому сроку значительно меньше выражена, обнаруживаются целые фрагменты. К 28 суткам волокна заявляемого препарата не обнаруживаются ни макро-, ни микроскопически. В то же время полное рассасывание марли кровоостанавливающей происходит к 37 - 40 суткам. При 0,45 препарат не рассасывается при имплантации в организм. Значение у 0,3 не обеспечивает эффективного достижения гемостаза при глубоких наружных, паренхиматозных и паренхиматозных с нарушением гемокоагуляции кровотечениях. Значенияи у, равные 1, являются предельно достигаемыми. При значениях 50 получаемые препараты теряют физическую форму и не обладают достаточной эффективностью. При 300 время рассасывания в организме составляет 35 - 40 суток. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.