Способ получения суммы флавоноидов, обладающих кардиотоническим действием

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ,ОБЛАДАЮЩИХ КАРДИОТОНИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ(71) Заявители Открытое акционерное общество Белмедпрепараты Кооператив Биогель(72) Авторы Захаревский Александр Степанович Кузнецова Зинаида Павловна Царенков Валерий Минович Стельмах Виктор Александрович Прихожий Сергей Степанович Цыганков Василий Георгиевич Бондарук Алла Михайловна Гаврилов Михаил Владимирович Левашкевич Антон Леонидович Петров Петр Тимофеевич Дидоренко Антонина Ивановна Мурашко Алла Дмитриевна(73) Патентообладатели Открытое акционерное общество Белмедпрепараты Кооператив Биогель(57) Способ получения суммы флавоноидов, обладающих кардиотоническим действием,путем многократной экстракции растительного сырья раствором этилового спирта, упаривания экстракта, очистки хлороформом с последующей хроматографией на полиамиде,отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют листья боярышника мягковатого, и экстракцию ведут 80 -ным раствором этилового спирта при 50-60 С.(56) Муравьева Д. А. Фармакогнозия. - М. Медицина, 1991. - С. 464, 472-474.950901 , 1997.457476, 1975. Изобретение относится к фармацевтической промышленности - разработке лекарственных средств, используемых для профилактики и лечения заболеваний сердечнососудистой системы, а именно к получению суммарного комплекса флавоноидов из листьев боярышника мягковатого (.). Известен способ получения флавоноидов, обладающих гипоазотемическим действием 1. Способ заключается в экстрагировании 2,5 кг сухой травы золотарника канадского 96 -ным этиловым спиртом (методом мацерации), упариванием экстракта до полного удаления спирта. Водный остаток обрабатывают хлороформом и упаривают до объема 0,5 л. Затем подчищают полиамидом и элюируют 25 -ным этиловым спиртом. Упаренные элюаты растворяют в 120 мл 96 -ного этанола и осаждают серным эфиром. Выход целевого продукта 7,5 г. 5642 1 Недостатком этого способа является многостадийность процесса и невысокой выход целевого продукта. Прототипом заявляемого способа является способ получения средства, обладающего гипоазотемической активностью 2, из листьев бегонии краснолистной ( ) путем экстрагирования сырья 70 -ным этиловым спиртом при комнатной температуре, упаривании, очистки и экстрагировании целевого продукта 70-96 -ным этанолом. Заявляемый способ отличается от прототипа тем, что в качестве растительного сырья используют листья боярышника мягковатого, а экстрагирование биологически активных веществ ведут при температуре 50-60 С 80 -ным этанолом. Изобретение расширяет сырьевую базу получения лекарственных средств. Пример получения. 1 кг воздушно-сухих листьев боярышника мягковатого многократно экстрагируют 80 -ным этиловым спиртом при 50-60 С. Количество растворителя в первую экстракцию составляет 17 л, а в последующие - по 12 л. Объединенные этанольные экстракты отгоняют в вакууме при температуре 60 С до полного удаления этилового спирта. Этиловый спирт может быть использован многократно с небольшими потерями. Для удаления балластных веществ водный остаток обрабатывают хлороформом с последующей хроматографией на полиамиде (200 г). Элюирование целевого продукта ведут 80 -ным этиловым спиртом. Выход целевого продукта 2-3 от веса сырья. Суммарный комплекс флавоноидов из листьев боярышника мягковатого - аморфный порошок зеленого цвета, хорошо растворим в этаноле любого разбавления и содержит 56 флавонолов, 24 катехинов и 4 фенолкарболовых кислот. Основными компонентами являются гиперин, авикулярин, кверцитрин, витексин, витексин-4-рамнозид, кратенацин и дезацетилкратенацин. Боярышник мягковатый (.) - дерево 6-8 м высоты или высокий многоствольный куст. Листья 4-9 см длины и 3-7 см ширины. Плоды созревают в сентябре. Цветет и плодоносит с 6-8 лет. Боярышник мягковатый может быть использован не только как источник сырья для приготовления лекарственных средств, но и в качестве новой плодовой культуры. Плоды его приятны на вкус и характеризуются высоким содержанием аскорбиновой кислоты, каротина, флавонолов, катехинов, микроэлементов. Могут быть использованы в свежем виде и для приготовления компотов, джемов, соков, которые являются профилактическим средством при сердечно-сосудистых заболеваниях. Боярышник мягковатый отличается быстрым ростом, большой облиственностью, не очень требователен к почвенным и климатическим условиям, устойчив к заболеваниям. Для получения 1 кг препарата необходимо 50 кг воздушно-сухих листьев боярышника мягковатого. С одного дерева, с более доступных ярусов может быть собрано 10 кг воздушно-сухих листьев. Для приготовления препарата листья могут быть использованы как в период плодообразования, так и после сбора плодов. По количественному и качественному составу биологически активных веществ листья боярышника мягковатого существенно отличаются от цветков и плодов. Предлагаемый объект позволяет расширить сырьевую базу для получения препарата кардиотонического действия и заменить цветки (плоды) боярышника листьями. При внутрибрюшинном введении суммарного препарата полифенолов из листьев боярышника мягковатого (СППЛБМ) в дозе 65 мг/кг (10 от 5) наркотизированным уретаном(1 г/кг, в/б) белым крысам у них не отмечено изменений величины амплитуды зубцаэлектрокардиограммы и частоты сердечных сокращений. Предсердно-желудочковая (0,04-0,05 с) и желудочковая (0,06-0,1 с) проводимость электрической систолы также существенно не изменялись. Смещения сегментаот изолинии и изменений его формы не наблюдалось. В опытах на изолированном предсердии морских свинок СППЛБМ в конечной концентрации 106 г/мл увеличивает амплитуду (в среднем на 10 ), существенно не изменяя частоту сокращений. 2 5642 1 Введение питуитрина (2 ЕД/кг, в/в) крысам, наркотизированным уретаном, сопровождается статистически достоверным увеличением амплитуды зубца(на 57 ) и снижением частоты сердечных сокращений (на 51 ). Сегменту большинства животных(87,7 ) смещается вверх от изолинии с 0,23 до 0,69 . У части животных регистрируются единичные экстрасистолы (табл. 2). Таблица 2 Влияние СППЛБМ на динамику питуитринового коронароспазма у белых крыс ЭКГ Зубец ,0,440,06 Частота сокра 48228 24533 40224 30230 щений/мин Смещение сег 0,230,03 0,690,05 0,300,06 0,370,06 мента ,Примечание- статистически достоверные различия (Р 0,05). Внутрибрюшинное введение СППЛБМ в дозе 65 мг/кг наркотизированным крысам за 30 мин до питутитрина(2 ЕД/кг, в/в) сопровождалось увеличением амплитуды зубца(на 21,1 ) и уменьшением степени брадикардии, смещения сегментаот изолинии и возникновения экстрасистол. Аконитина гидробромид при внутривенном введении наркотизированным уретаном самкам белых крыс вызывает стойкую аритмию, проявляющуюся бигименией, политопной экстрасистолией, желудочковой тахикардией и фибрилляцией. Аритмогенная доза аконитина гидробромида равна 21,77,1 мкг/кг. СППЛБМ, вводимый внутривенно в дозе 10-20 мг/кг за 5 мин до введения аконитина гидробромида, увеличивает аритмогенную дозу на 38-53 , в дозе 40-60 мг/кг - на 82-118 , а в дозе 90 мг/кг - в 2,7 раза (58,813 мкг/кг). Известные противоаритмические средства, в частности, ксикаин в дозе 2 от 5(2,6 мг/кг, в/в) не активен на этой модели аритмии, а хинидина сульфат в дозе 5,5 мг/кг,внутривенно (3 от 5) повышает аритмическую дозу аконитина лишь на 25 . При введении мышам в дозе 3,2 мг/кг, внутрибрюшинно (0,5 от ) СППЛБМ не нарушал ориентировочную реакцию и эмоциональную реактивность, по сравнению с контролем. Повышение дозы изучаемого препарата до 6,5 13,0 26,0 мг/кг (1-4 от 5) сопровождалось достоверным угнетением ориентировочной реакции исследовательский компонент снижался на 47 (13,52,7), 57 (10,03,5) и 66(7,33,3) соответственно, а количество вставаний животных на задние лапки снизилось с 7,52,1 до 3,01,0 лишь при действии препарата в дозе 26,0 мг/кг. Внутрибрюшинное введение СППЛБМ в дозах 13,0 и 65,0 мг/кг существенно не изменяло длительность латентного периода засыпания (3,50,4 и 4,50,4 мин соответственно) и продолжительность бокового положения мышей (77,51,1 и 82,11,0 мин),вызванных введением гексенала. У животных контрольной группы сон развивался через 3,70,3 мин, а продолжительность его была равна 99,315,2 мин. В отличие от гексенала СППЛБМ потенцирует снотворное действие тиопентал-натрия и хлоралгидрата. Внутрибрюшинное введение мышам СППЛБМ в дозе 500 мкг/кг не вызывало гибели животных, но сопровождалось выраженными признаками интоксикации (нарушение координации движений, общее угнетение, затрудненное дыхание и др.). Состояние животных нормализовалось через 1-1,5 ч. При увеличении дозы препарата до 600-700 мкг/кг картина отравления развивалась быстрее и была более выражена. У части животных развивались общие судороги и наступала гибель от остановки дыхания и прекращения сердечной деятельности. 50 препарата при внутрибрюшинном введении равна 656,0 16 3 5642 1 600,0 и 84 - 699,0 мкг/кг соответственно, что свидетельствует о низкой токсичности изученного препарата боярышника. Суммарный препарат полифенолов из листьев боярышника мягковатого в дозе 10 от 50 для мышей, при внутрибрюшинном введении не влияет на показатели электрокардиограммы здоровых бодрствующих и наркотизированных уретаном белых крыс. У крыс, наркотизированных гексеналом, отмечается депрессия зубца , смещение вверх сегмента , тахикардия. СППЛБМ оказывает выраженное противоаритмическое и противоишемическое действие, предупреждает развитие питуитринового коронароспазма у наркотизированных уретаном белых крыс. На модели изолированного предсердия морской свинки СППЛБМ оказывает положительное инотропное действие в концентрации 10-6-10-5 г/мл. СППЛБМ достоверно угнетает исследовательский и вертикальный компоненты ориентировочной реакции у белых крыс и превосходит в 3-4 раза по этому показателю препарат кратемон, получаемый из листьев боярышника однопестичного. У суммарного препарата из листьев боярышника мягковатого выявлен кардиотонический и коронарорасширяющий эффект. По своей противоаритмической активности исследованный препарат превосходит широко применяемые в клинике ксикаин и хинидина сульфат. Тормозящее влияние на ЦНС у СППЛБМ выражено в большей степени, чем у кратемона. Источники информации 1. А.с. СССР 457476, МПК А 61 К 27/14, 1975. 2. Заявка 950901, МПК 6 А 61 К 35/78 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4