Композиция в форме микросфер для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества и способ ее получения

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ КОМПОЗИЦИЯ В ФОРМЕ МИКРОСФЕР ДЛЯ ПРОЛОНГИРОВАННОГО И КОНТРОЛИРУЕМОГО ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ПЕПТИДНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ВЕЩЕСТВА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявитель АСТА МЕДИКА АКТИЕНГЕЗЕЛЬШАФТ(72) Авторы Фредерик Хеймгартнер , Пиеро Орзолини (СН)(73) Патентообладатель АСТА МЕДИКА АКТИЕНГЕЗЕЛЬШАФТ(57) 1. Композиция в форме микросфер для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества, содержащая нерастворимую в воде соль пептида в виде памоата, танната,стеарата или пальмитата и биоразлагающийся полимер - сополимер молочной и гликолевой кислоты, при содержании соли пептида, равном по меньшей мере 5 от массы биоразлагающегося полимера, отличающаяся тем, что в качестве пептида она содержит соединение формулы 3 2,где 3 - - или -,а в качестве биоразлагающегося полимера полилактид, полигликолид или сополимер молочной и гликолевой кислоты. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что сополимер молочной и гликолевой кислоты представляет собой сополимер - или ,- молочной кислоты, содержащей 45-90 мол. звеньев молочной кислоты и 1055 мол. звеньев гликолевой кислоты. 3. Композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что она содержит в качестве соли памоат пептида, а качестве полимера сополимер молочной и гликолевой кислоты при молярном соотношении их звеньев соответственно 7525. 4. Способ получения композиции в форме микросфер для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества, заключающийся в смешении нерастворимой в воде соли пептида в виде памоата, танната, стеарата или пальмитата и биоразлагающегося полимера - сополимера молочной и гликолевой кислот, отличающийся тем, что в качестве пептида используют соединение формулы, смешение осуществляют добавлением соли пептида в раствор биоразлагающегося полимера, в качестве которого используют полилактид, полигликолид или сополимер молочной и гликолевой кислот, в органическом растворителе с образованием суспензии соли пептида, полученную суспензию диспергируют в водной среде с образованием эмульсии типа масло в воде, вводят эмульсию в избыток водной среды и отделяют микросферы от жидкой фазы. 5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что перед введением эмульсии в избыток водной среды частично выпаривают органический растворитель, входящий в состав масляной фазы. 6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве сополимера молочной и гликолевой кислот используют сополимер - или ,- молочной кислоты, содержащий 45-90 мол. звеньев молочной кислоты и 10-55 мол. звеньев гликолевой кислоты. 2870 1 Изобретение относится к композиции для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества и способу ее получения. Известна композиция в форме микросфер для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества, содержащая нерастворимую в воде соль пептида в виде памоата, танната, стеарата или пальмитата и биоразлагающийся полимер-сополимер молочной и гликолевой кислот, при содержании соли пептида в композиции по меньшей мере 5 от массы полимера 1. Известную композицию получают путем измельчения нерастворимой в воде соли пептида в виде памоата, танната или пальмитата и биоразлагающегося полимера-сополимера молочной и гликолевой кислот,смешения их частиц размером менее 200 мк, последующей компрессии смеси и ее экструзии. После этого проводят распыление образовавшегося продукта при низкой температуре (криогенным распылением). Предложенный способ получения композиции требует сложного и дорогостоящего оборудования. При этом он не обеспечивает возможность получения композиции в виде микрочастиц сферической формы с заранее определенными их размерами. Кроме того, получаемая композиция не обеспечивает достаточно длительного и равномерного выделения активного ингредиента - соли пептида. Задачей изобретения является разработка композиции для высвобождения пептидного лекарственного вещества и способа ее получения, лишенных указанных выше недостатков. Решение задачи согласно изобретения достигается композицией в форме микросфер для пролонгированного и контролируемого высвобождения пептидного лекарственного вещества, содержащей нерастворимую соль пептида в виде памоата, танната, стеарата или пальмитата и биоразлагающийся полимер-полилактид,полигликолид или сополимер молочной и гликолевой кислоты, причем количество соли пептида составляет по меньшей мере 5 от массы биоразлагающегося полимера, а в качестве пептида композиция содержит соединение формулы 32,где 3 или -. Такие пептиды являются аналогами лютеинизирующего гормона, высвобождающего гормон (ЛГВГ), и предпочтительно могут применяться для терапевтического лечения гармонально зависимых нарушений. В приведенной выше формуле, по крайней мере, если нет других указаний, аминокислоты обозначены условно и имеют конфигурацию , - означает -3-(2-нафтил)-аланин и - означает -3(3-пиридил)аланин. В качестве биоразлагающегося полимера композиция может содержать полилактид, полигликолид или сополимер молочной и гликолевой кислот, предпочтительно сополимер -или , -молочной кислоты и гликолевой кислот, содержащей 45-90 моль.звеньев молочной кислоты и 10-55 моль.гликолевой кислоты. Предпочтительно, чтобы в сополимере молочной и гликолевой кислот молярное соотношение их звеньев составляло соответственно 7525. В качестве соли пептида композиция может содержать по меньшей мере 5 от массы биоразлагающегося полимера памоат, таннат, стеарат или пальмитат, предпочтительно памоат пептида формулы . Композицию в виде микросфер применяют для приготовления суспензии, предназначенной для перентерального введения, например, путем внутримышечных или подкожных инъекций. Повышенное содержание в композиции соли пептида обеспечивает длительное контролируемое и равномерное выделение пептида, например в течение нескольких суток после ее перентерального введения человеку или животному. Композицию получают следующим образом. Приготавливают суспензию нерастворимой в воде соли пептида формулыв растворе биоразлагающегося полимера в органическом растворителе, полученную суспензию диспергируют в водной среде с образованием эмульсии типа масло в воде, вводят эмульсию в избыток водной фазы и отделяют микросферы от жидкой фазы. Получение эмульсии типа масло в воде и введение ее в избыток водной среды по способу согласно изобретения позволяет избежать недостатков известных способов. Для получения композиции можно использовать водорастворимую соль пептида формулы , которую превращают в соль пептида, нерастворимую в воде. Это дает возможность использовать разницу растворимостей применяемых ингредиентов, в частности, разницу между растворителями и не растворителями,используемых в способе согласно изобретения. При использовании водорастворимой соли пептида формулы , ее превращают в соль пептида, нерастворимую в воде на первой стадии осуществления способа. Под водорастворимой понимают соль пептида,имеющей растворимость в воде при 25 С более 0,1 мг/мл, предпочтительно 1,0 мг/мл и более. Под нерастворимой понимают соль пептида, имеющей растворимость в воде при 25 С 0,1 мг/мл и менее. Такими солями являются памоат, таннат, стеарат или пальмитат пептида. 2870 1 В качестве биоразлагающихся полимеров используют такие полимеры, как полилактид, полигликолид,сополимер молочной и гликолевой кислот, предпочтительно сополимер -или , -молочной кислоты, содержащий 45-90 моль.звеньев молочной кислоты и 10-55 моль.гликолевой кислоты. В качестве растворителя биоразлагающегося полимера применяют такой растворитель, как например,метиленхлорид, но, в любом случае, этот растворитель не должен быть растворителем по отношению к выбранному пептиду или его соли. Полученную выше нерастворимую соль пептида суспендируют в органическом растворе полимера, вводят полученную суспензию в заранее определенное количество водной среды, в большинстве случаев, представляющей собой воду с добавкой подходящего поверхностно-активного вещества. Это делается с целью быстрого образования гомогенной эмульсии типа масло в воде, при этом водная среда обеспечивает непрерывную фазу. При приготовлении такой эмульсии следует учитывать различные факторы, которые оказывают влияние на размер или структуру микросфер, получаемых в результате этого процесса. Одним из факторов, который следует учитывать, является скорость введения органического раствора в водную среду. Другим таким фактором может быть температура или скорость перемешивания или энергия диспергирования (с помощью ультразвука), последний фактор, в частности, влияет на окончательный размер микросфер. Выбор методов и условий эмульгирования, пригодных для достижения поставленной цели, находится в пределах возможностей специалистов в данной области. При приготовлении эмульсии может оказаться выгодным изменение объемного соотношения составляющих ее фаз, в частности, уменьшение начального объема органической фазы по отношению к начальному объему водной фазы. В некоторых случаях, вследствие летучести используемых растворителей, например, метиленхлорида, испарения, протекающего спонтанно в ходе перемешивания, уже может оказаться достаточным, в других случаях это желательное явление может быть ускорено путем осуществления частичного испарения растворителя при пониженном давлении. После образования стойкой эмульсии, ее переносят в избыточное количество водной среды, в большинстве случаев в воду. Целью этой операции является интенсификация отверждения зародышевых микросфер,образовавшихся в эмульсии, путем экстрагирования растворителя еще остающегося внутри микросфер. Эта операция имеет также целью одновременное удаление следовых количеств поверхностно-активного вещества, которые могут оставаться в полимерной массе в ходе ее окончательного отверждения. Следует отметить,что вода не является растворителем как для биоразлагающегося полимера, как например, сополимера , молочной и гликолевой кислот (СМГК), так и для соли пептида, содержащейся внутри указанных микросфер. Эта ситуация особенно благоприятна для необходимого извлечения остаточного количества растворителя полимера, как например 22. После перенесения эмульсии в избыток водной среды, выделяют отвержденные микросферы с использованием соответствующих методов, например, центрифугированием, фильтрованием или отстаиванием и последующей декантацией. Известные методы применяют и для операций промывки, очистки и сушки. Применение описанного выше способа позволяет получать микросферы, размер которых может точно контролироваться. Этот контроль осуществляют, в основном, в ходе приготовления эмульсии (например,скоростью перемешивания). Другим преимуществом является достижение особенно высокого наполнения пептидами, которое может составлять 5, 10 или 20 мас.или более в зависимости от условий. Кроме того,особенно высоким является выход операции введения пептида или соли пептида. Микросферы, полученные из указанных ингредиентов, в дальнейшем применяют, после соответствующей стерилизации, для приготовления суспензий, предназначенных для перентерального введения, например, путем внутримышечных или подкожных инъекций. Изобретение иллюстрируют следующие примеры. Пример 1. 3 г ацетата аналога ЛГВГ формулы 2 превращают в соответствующий памоат с помощью известных методов и обрабатывают таким образом, чтобы получить частицы со средними размерами примерно 19 микрон. Затем 0,317 г полученного памоата суспендируют в 20 мл 22 и образовавшуюся суспензию добавляют к 20 мл 22, содержащим 1,683 г растворенного сополимера ,-молочной и гликолевой кислот (СМГК) в их соотношении 7525 (моль. ,собственная вязкость 0,82 в гексафторизопропаноле). Смесь готовят перемешиванием при комнатной температуре до образования полностью гомогенной суспензии. После этого полученную суспензию вливают в один прием в 500 мл воды, содержащей 0,075 растворенной метоксицеллюлозы, и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение 90 минут со скоростью перемешивания 900 оборотов в минуту. Изменение состояния эмульсии периодически проверяют,в среднем каждые 30 минут, путем отбора проб и исследования образовавшихся микросфер под микроскопом. После окончания перемешивания (стабилизации уменьшения размеров микросфер), эмульсию переносят в один прием в 2 л воды, поддерживаемой при температуре около 10 С, и полученную смесь перемешивают до ее гомогенизации. 3 2870 1 Микросферы СМГК отделяют от реакционной смеси и очищают путем последовательного центрифугирования, чередующегося с промывкой водой, затем отфильтровывают и сушат при пониженном давлении. Получают таким образом 1,61 г СМГК микросфер (выход 80 ), содержащих более 94 частиц диаметром менее 100 микрон (максимальное количество размером 55-85 микрон). Проведенный анализ (растворение твердого СМГК, извлечение и определение пептида с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии) показал, что содержание памоата в микросфере составляет 9,05 мас.(расчетное содержание 10 мас. ). Полученные таким образом микросферы затем последовательно подвергают стерилизации гаммаизлучением и суспендируют в соответствующем стерильном носителе. Испытания(определение содержания тестостерона в крови крыс самцов) подтвердили равномерное выделение активного вещества. Пример 2. Опыт проводят аналогично примеру 1, но с использованием 0,634 г памоата аналога ЛГВГ и 1,366 г СМГК в соотношении 7525. Количество микросфер СМГК составило 1,70 г (выход 85 ), содержание памоата в микросферах составило 18,3 мас.(расчетное содержание 20 мас. ). Полученные таким образом микросферы подвергают стерилизации гамма-излучением и суспендируют в соответствующем стерильном носителе. Испытания(определение содержания сыворотки крови самцов крыс) подтверждают равномерное выделение биологически значимого количества активного вещества, по меньшей мере, в течение 24-х суток. Результаты выделения активного вещества во времени представлены в таблице. Время, сутки 03 часа 1 2 3 6 8 10 14 16 20 24 Эти результаты были также подтверждены анализами животных, забитых через 30 суток потеря массы тестикулов составила, по меньшей мере, 80 , потеря массы семенных пузырьков, по меньшей мере, 90 . Пример 3. Опыт проводят аналогично примеру 1, но с использованием 3 г ацетата аналога ЛГВГ формулы 2. После превращения этого ацетата в соответствующий памоат и операций обработки, описанных в примере 1, получают микросферы, имеющие такие же характеристики, что и полученные в предшествующих примерах. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.