Гипериммунная сыворотка против пневмонии свиней

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ГИПЕРИММУННАЯ СЫВОРОТКА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Вербицкий Анатолий Анатольевич Даровских Светлана Викторовна Корочкин Рудольф Борисович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(57) Сыворотка гипериммунная против пневмонии свиней, отличающаяся тем, что содержит антитела ксеротипов ,ии антитела к, причем указанная сыворотка получена путем иммунизации вола-продуцента антигенамисеротипов ,ии антигеном,взятыми в равных количествах. Изобретение относится к ветеринарной биологической промышленности, в частности к гипериммунным сывороткам, и может быть использовано для лечения инфекционных пневмоний свиней, вызываемых пастереллами и бордетеллами. Возникновение болезней органов дыхания обусловлено воздействием комплекса факторов, главные из которых представляют собой инфекционные агенты бактерии, вирусы и их ассоциации. Одним из таких факторов является ассоциация микроорганизмовсеротипов , ,и, которые наиболее часто вызывают развитие пневмоний у свиней с последующей атрофией носовых раковин. Для лечения свиней, больных этой формой пневмонии, используют многочисленные антибактериальные препараты. Однако применение антибиотиков имеет большое количество негативных и побочных действий, связанных с их токсическим, иммунодепрессивным и дисбактериальным действием как для организма животных, так и людей, употребляющих в пищу мясо от этих животных, что обусловливает необходимость использования гипериммунной сыворотки для лечения этих инфекции. Известна гипериммунная сыворотка против пастереллеза сельскохозяйственных животных, однако она не обеспечивает 100 -ной иммунологической защиты от бактериальных пневмоний свиней, так как включает в себя антитела только против одного вариантаи не содержит антител против 1. 17417 1 2013.08.30 Техническим результатом заявляемого изобретения является создание высокоэффективного биологического препарата для лечения инфекционных пневмоний свиней, вызываемых ассоциацией пастерелл и бордетелл, обеспечивающего 100 -ный лечебнопрофилактический эффект. Технический результат достигнут путем включения в состав полиантигена для получения гипериммунной сыворотки микроорганизмов .серотипов , ,и. . Гипериммунная сыворотка против пневмонии свиней, отличающаяся тем, что содержит антитела ксеротипов ,ии антитела,причем указанная сыворотка получена путем иммунизации вола-продуцента антигенамисеротипов ,ии антигеном, взятых в равных количествах. Введение предлагаемой сыворотки инициирует развитие пассивного иммунитета в организме животных. В ответ на введение антигенов происходит образование не только специфических антител, но и других стимулирующих веществ. Поэтому данный лечебнопрофилактический биопрепарат, кроме специфического лечебного влияния, оказывает и неспецифическое стимулирующее действие, повышая защитные функции и тонус организма. Изготовление гипериммунной сыворотки против пневмонии свиней, содержащей антитела ксеротипов , ,иосуществляется по общепринятой схеме. Пример 1. На начальном этапе изготавливают поливалентный антиген путем выращивания бактериальных культур, проверки их биологических свойств, составления антигена, его инактивации и концентрирования. Для изготовления антигена штаммы .серотипов , ,и .первоначально культивируют при температуре 37,50,5 С в течение 18-20 ч во флаконах объемом 100 см 3, содержащих 30-50 см 3 модифицированной питательной среды. Проверку выросшей культуры первой генерации на чистоту роста проводят путем микроскопии окрашенных по Граму мазков, определения ее культуральных свойств на МПА в чашки Петри и определения ферментативных свойств на коротком цветном ряде. Проверенные таким образом культуры из флакона засевают каждую в отдельности в 20-литровые баллоны, наполненные не более чем на одну треть объема модифицированной питательной средой. Культивирование культуры второй генерации проводят при температуре 37,50,5 С в течение 20-24 ч. Полученную матровую расплодку проверяют на чистоту роста макроскопически и путем микроскопии окрашенных по Граму мазков, после чего определяют концентрацию микробных клеток. Инактивацию полученных культур проводят после смешивания в одной емкости в равных соотношениях по 25.серотипов , ,и 25. ,0,3 -ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 ) в течение 14 суток при температуре 36-38 С. Для сорбции антигена к инактивированной культуре добавляют 4 -ный раствор гидроокиси алюминия до конечного содержания 0,4 основного вещества. Сорбцию поливалентного антигена проводят в течение 3-х суток при 20 С. После сорбции и отстоя готовый антиген концентрируют до содержания 8 млрд. микробных клеток в 1 см 3 путем декантации надосадочной прозрачной жидкости. Стерильность, величинуи безвредность сконструированного антигена проверяют согласно общепринятой методике. Показательдолжен находиться в пределах от 7,0 до 7,6. 17417 1 2013.08.30 После установления стерильности и безвредности антиген фасуют во флаконы объемом 500 см 3 и хранят не более восьми месяцев в темном месте при температуре от 2 до 15 С,в течение которых он пригоден для гипериммунизации волов-продуцентов. Гипериммунизацию волов-продуцентов проводят путем четырехкратного внутрибрюшинного введения антигена в количествах 5, 10, 15 и 20 см 3 соответственно с интервал между инъекциями 5 суток. Отбор, переработку крови, а также консервирование сыворотки производят согласно общепринятой методике. Консервированную сыворотку после предварительного выдерживания в седиментаторах при температуре 2 - 15 С в течение 20-60 суток подвергают очистке путем грубой и клалирующей фильтрации. Стерилизующая фильтрация осветленной сыворотки производится с использованием фильтровальных установок, предварительно собранных стерилизующими картриджами и стерилизованных текучим паром при температуре 110 С в течение 1,5 ч. Контроль сыворотки перед фасованием полуфабриката осуществляется путем определения концентрации фенола, кальция, белка, уровня . Расфасовку, укупоривание и этикетировку сыворотки производят в чистые стерильные флаконы объемом 200 см 3, укупоренные резиновыми пробками и закатанные металлическими колпачками. Контроль полученного биопрепарата по внешнему виду, цвету, наличию видимых механических включений, стерильности, безвредности и концентрации водородных ионов проводят согласно общепринятых методик. Для испытания иммунной активности используют белых мышей массой 16-18 г в количестве по 3 головы на каждую разновидность пастерелл и штамм бордетелл. Сыворотку в количестве 0,2 см 3 вводят в разные точки в смеси со стерильным физиологическим раствором в общем объеме 0,5 см 3. В контроле используют по три неиммунизированных животных на каждый штамм пастерелл и бордетелл. Через24 ч каждую группу мышей заражают 3-5 ЛД 50 контрольных штаммов пастерелл и бордетелл. За зараженными животными ведут наблюдение в течение 7 суток с момента гибели контрольных. По результатам проведенного опыта сыворотку считают активной (иммуногенной) в случае гибели контрольных животных с отсутствием гибели опытных животных. Пример 2. По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец. Для получения полиантигена .серотипов , ,берут по 30 на каждый штамм, а содержание .составляет 10 . Инактивируют полиантиген 0,2 -ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 ) в течение 14 суток при температуре 36-38 С. Пример 3. По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец Для получения полиантигена .серотипов , ,берут по 20 на каждый штамм, а содержание .составляет 40 . Инактивируют полиантиген 0,1 -ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 ) в течение 14 суток при температуре 36-38 С. Пример 4. По технологии, указанному порядку изготовления и контроля сыворотку получают аналогично примеру 1 при следующем конструировании антигена и его инактивации, образец. Для получения полиантигена .серотипов , ,берут по 15 на каждый штамм, а содержание .составляет 55 . Инактивируют полиантиген 3 17417 1 2013.08.30 0,4 -ным раствором формалина (содержание формальдегида не менее 36 ) в течение 10 суток при температуре 36-38 С. Сыворотка, приготовленная по примеру 1, обладает 100 -ной иммунной активностью. Тогда как сыворотка, полученная по примерам 2-4, не обладает достаточной иммунной активностью. Использование гипериммунной сыворотки против пневмонии свиней с профилактической целью в дозе 1 см 3 на 1 кг живой массы и в дозе 2 см 3 на 1 кг живой массы с лечебной целью обеспечивает 100 -ную защиту животных, не вызывая осложнений и побочных эффектов. При этом применение с аналогичной целью гипериммунной сыворотки против пастереллеза сельскохозяйственных животных обеспечивает защиту свиней в 78 случаев. Установлено, что гипериммунная сыворотка против пневмонии свиней сохраняет свою эффективность на срок не менее 1 года (период наблюдения), при условии хранения в темном сухом месте при температуре от 2 до 15 С. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4