Вакцина против пневмонии животных бактериальной этиологии

61 39/102, 61 39/112 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ ЖИВОТНЫХ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ(73) Патентообладатель Скибо Вадим Никодимович, Шимко Владимир Владимирович(57) Вакцина против пневмонии животных бактериальной этиологии, содержащая антиген в виде формалинизированной суспензии микроорганизмов родовии адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигена она содержит свежевыделенные из неблагоприятных по пневмоэнтеритам хозяйств инактивированные патогенные культуры микроорганизмов видови/илиии/или, а в качестве адъюванта - алюминия гидрат окиси коллоидный при следующем соотношении компонентов, мл/л формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенных культур микроорганизмов видови/или, 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл 626-628 и/или, 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл 322-324 алюминия гидрат окиси коллоидный, 6-ый 48-52. Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики и лечения респираторных заболеваний животных, преимущественно против пастереллеза и сальмонеллеза молодняка крупного рогатого скота и свиней. Известна поливалентная вакцина против пастереллеза животных, включающая в качестве антигена пастереллы, сальмонеллы, колибактерии и псевдомонады 1. Однако эта вакцина недостаточно эффективна против этих болезней, так как производственные штаммы бактерий в процессе пассажей теряют антигенные и иммуногенные свойства. Задачей настоящего изобретения является повышение антигенных и иммуногенных свойств вакцины. Поставленная задача достигается тем, что вакцина против пневмоний животных бактериальной этиологии в качестве антигена содержит свежевыделенные из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств инактивированные патогенные культуры микроорганизмов видови/илиии/или, а в качестве адъювантаалюминия гидрат окиси коллоидный при следующем соотношении компонентов, мл/л 2785 1 формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенных культур микроорганизмов видов 626-628 и/или, 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мли/или, 3,6 х 109 - 4,0 х 109 кл/мл 322-324 алюминия гидрат окиси коллоидный, 6 -ный 48-52. Предложенная вакцина основана на том, что, по нашим данным, при исследовании патматериала из хозяйств, где имело место заболевание телят и поросят с поражением органов дыхания и желудочнокишечного тракта, в 67,4 случаев выделяли патогенные для белых мышей культуры пастерелл и сальмонелл в виде ассоциаций. Пастереллы и сальмонеллы при моноинфекциях выделяли соответственно в 25,4 и 3,6 случаев. Предложенную вакцину производят следующим образом. В качестве патматериала для выделения микроорганизмов используют легкие, бронхиальные лимфоузлы,сердце, почки, печень, селезенку и костный мозг от павших или вынужденно убитых животных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств. Бактериологические исследования по выделению пастерелл проводят по общепринятым методикам. Первичные бактериологические посевы и дифференциацию пастерелл проводят согласно Краткого определителя бактерий Берги, под ред. Хоулта. М. 1980, Методических рекомендаций по диагностике пастереллезов сельскохозяйственных животных, 1987. Патогенность выделенных пастерелл определяют на мышах массой 18 - 20 гр. Мышей заражают бульонной культурой подкожно (0,2 мл) и в брюшную полость (0,2 мл). За зараженными животными наблюдают в течение 10 дней. Иммуногенные свойства выделенных пастерелл изучают на белых мышах в лабораторных условиях. Для накопления микробной массы свежевыделенные и идентифицированные патогенные для белых мышей культуры микроорганизмов видов,и,пересевают на мясопептонный бульон (МПБ) на переваре Хоттингера, который готовят следующим образом. Один килограмм мяса, очищенного от жира и сухожилий, нарезают кусками и небольшими порциями опускают в кастрюлю с двойным количеством (по отношению к мясу) кипящей воды. Кипятят в течение 15-20 минут, затем вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку. Устанавливают рН бульона 8,0. Затем опускают фарш в бульон, охлажденный до 40 С. Добавляют поджелудочную железу, пропущенную через мясорубку, в количестве 10 к взятой жидкости (на 1 л жидкости 100 гр железы) или сухой панкреатин в количестве 0,5 , размешивают, доводят рН до 7,8-8,0. Такое подщелачивание повторяют через 30 мин. Добавляют 2-3 хлороформа, бутыль несколько раз встряхивают и оставляют на 10-14 дней при комнатной температуре. Первые 3-4 дня ежедневно проверяют реакцию среды. По окончании переваривания раствор фильтруют и стерилизуют. Указанные выше культуры микроорганизмов (каждую культуру в отдельности) пересевают на МПБ на переваре Хоттингера в пробирках по количеству матр и инкубируют в термостате при температуре 36,5-37,5 С в течение 18 часов. После инкубации бульонную культуру засевают на МПА на переваре Хоттингера в матры емкостью 1,5 л из расчета 1 пробирка бульонной культуры на матру. Мясопептонный агар готовят на переваре Хоттингера по общепринятой методике. Разливают расплавленный агар в биологические флаконы (матры) емкостью 1,5 л, из расчета 260 мл на флакон. Культуру на МПА в матрах (биологические флаконы) выращивают в термостате при температуре 36,537,5 С в течение 18 часов. Затем культуру вышеуказанных микроорганизмов смывают с агара 50 мл физиологического раствора на одну матру. Смытую культуру пастерелл и сальмонелл (каждую культуру раздельно) сливают со всех флаконов в одну стерильную емкость, перемешивают и определяют концентрацию бактерий по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л. А. Тарасевича. Контроль чистоты культур проводят микроскопически. Культуры должны быть однородными, не содержать посторонней микрофлоры. После определения оптической плотности концентрацию бактерий доводят физиологическим раствором до 3,6 х 109-4,0 х 109 кл/мл. Приготовленные таким образом культуры микроорганизмов смешивают в указанном в таблице 1 соотношении. В каждый из указанных в таблице 1 вариант смеси добавляют для инактивации формалин в количестве 0,5 к конечному объему. Перед инактивацией формалин разводят в два раза физиологическим раствором. После тщательного взбалтывания взвесь выдерживают в термостате в течение 24 часов, а при комнатной температуре - 3 суток с периодическим помешиванием. Полноту инактивации определяют путем посева на МПБ и МПА в соответствии с ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности. 2785 1 Затем к каждой из полученной формалинизированной суспензии микроорганизмов добавляют в качестве адъюванта алюминия гидрат окиси (гидроксал) (ГОСТ 18287 - 81) в количестве 0,3 в виде 6 -ного суспензии раствора. Рабочий раствор гидроксала перед использованием стерилизуют автоклавированием при давлении 2 атм в течение 30 мин. Получают варианты вакцин с содержанием компонентов, указанных в таблице 2. Полученные варианты вакцин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Вакцина считается активной, если она имеет коэффициент иммунологической эффективности не ниже 80. Полученная вакцина предназначена для профилактики и ликвидации преимущественно пастереллеза и сальмонеллеза молодняка крупного рогатого скота и свиней и представляет собой прозрачную слегка опалесцирующую жидкость с хорошо разбивающимся при встряхивании белым осадком. Ее применяют телятам, стельным коровам, нетелям, супоростным свиноматкам и поросятам. Вакцину применяют внутримышечно с соблюдением правил асептики и антисептики крупному рогатому скоту в дозе 4 мл независимо от возраста, свиньям - 3 мл. Иммунитет наступает через 10 - 12 дней и сохраняется 5-6 мес. Предложенная вакцина была испытана в мае - июне 1995 года в Ждановичском тепличном комбинате на фермах Кунцевщина и Тарасово, где была отмечена вспышка заболеваемости телят в группах доращивания,сопровождающаяся пневмонией и диареей. Заболевание сопровождалось падежом и непроизводительным выбытием молодняка. Вакцина, приготовленная на основе выделенных из этого хозяйства патогенных культур пастерелл, была использована для вакцинации животных. Через 7 - 10 дней после вакцинации заболевание телят прекратилось. Противоэпизоотическую эффективность вакцины оценивали также на свиньях в межколхозном предприятии Боровица Ивановского района Брестской области. Опыты по изучению противоэпизоотической эффективности ставили в двух повторностях. В первом случае в опытной группе было 620 голов поросят (бокс 16), в контрольной группе - 619 (бокс 2). Группы животных были подобраны по принципу аналогов. Поросят опытной группы вакцинировали двукратно с интервалом 30 дней. Схемы плановых специфических профилактических мероприятий в группах не менялись. В ходе опыта за животными велся строгий ветеринарный и зоотехнический учет. После введения вакцины у животных пирогенной, анафилактической, местной и токсической реакции не отмечено. Окончательно учет результатов проводили при передаче животных на откорм. В ходе опыта получены следующие результаты. Установлено, что в опытной группе сохранность составила 77,01 , в контрольной - 63,56 . Во второй серии опытов иммунизировали 619 голов поросят (бокс 15), контрольная группа составляла 642 головы (бокс 6). В данном случае сохранность поросят в опытной группе составила 85,5 , в контрольной - 78,5 . Таким образом, результаты опытов показывают, что вакцина против пневмоний животных бактериальной этиологии обладает выраженным эпизоотическим эффектом и может быть использована для повышения сохранности молодняка крупного рогатого скота и свиней.(Акты прилагаются). Таблица 1 Содержание суспензий культур микроорганизмов в вакцине Вид микроорганизм 2785 1 Таблица 2 Состав вариантов вакцин против пневмонии животных бактериальной этиологии Название Алюминия гидрат окиси колоидный 6 -ый Формалинизированная суспензия свежевыделенных из неблагополучных по пневмоэнтеритам хозяйств патогенные культуры микроорганизмов видов, 3,6-4,0 млрд. микробных тел/мл Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.