Способ диагностики дисфункции эндотелия

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИСФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Пырочкин Владимир Михайлович Шейбак Владимир Михайлович Могилевец Ольга Николаевна Пицко Дмитрий Викторович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ диагностики дисфункции эндотелия, отличающийся тем, что определяют в плазме крови концентрации аргинина , орнитинаи цитруллина , рассчитывают коэффициент К по формулеК и диагностируют дисфункцию эндотелия при значении К менее 0,44. Изобретение относится к области медицины, а именно к лечению внутренних болезней и клинической биохимии, и может применяться для оценки эндотелиальной дисфункции. Снижение синтезаявляется главным фактором в развитии дисфункции эндотелия. Основным недостатком изучения состояния эндотелия является отсутствие четких диагностических критериев (биохимических, инструментальных)./ ./ . . - 2005. - . 23 (1). - . 7-17. Известные инструментальные методы исследования функции эндотелия периферических артерий основываются на оценке способности эндотелия продуцироватьв ответ на фармакологические (ацетилхолин, метахолин, брадикинин, гистамин) или физические(изменение кровотока) стимулы, прямом определении уровняи других -зависимых медиаторов, а также на оценке суррогатных показателей эндотелиальной функции. Для этого используются следующие методы веноокклюзионная плетизмография, коронарография, магнитно-резонансная томография, ультразвуковое дуплексное сканирование периферических артерий с проведением проб, оценка микроальбуминурии. 16410 1 2012.10.30 В качестве потенциальных маркеров дисфункции эндотелия рассматривается несколько субстанций, продукция которых может отражать функцию эндотелия тканевый активатор плазминогена и его ингибитор, тромбомодулин, фактор Виллебрандта , / , //. . . - 1995. - . 90. - . 244-248. Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки дисфункции эндотелия на основании непрямого метода оценки продукциив организме. / .. // . . - 1995. - . 41. . 892-896. В биологических системахпредставляет собой очень нестабильное соединение, которое быстро превращается в ион нитрита (2), но в присутствии кровяногои некоторых других переходных металлов 2 превращается в более стабильный ион нитрата (3). В условиях организма в качестве метаболитовпреобладают нитраты,которые в отличие от других метаболитов не подвергаются быстрым изменениям во время забора и хранения крови. Поэтому именно суммарная оценка нитратов (после их восстановления до нитритов) и нитритов является общепринятым методом оценки общего синтезав биологических жидкостях и косвенным методом оценки активности эндотелиальной -синтазы . Недостатком этого метода является то, что до 50 нитратов и нитритов, содержащихся в плазме крови, могут поступать в организм с пищей, а также малая клиническая информативность, невозможность объективизации патологического процесса. Задачей изобретения является разработка более объективного и информативного способа диагностики дисфункции эндотелия. Поставленная задача решается путем определения в плазме крови концентрации аргинина , орнитинаи цитруллинаи расчета коэффициента К по формулеКи диагностируют дисфункцию эндотелия при значении К менее 0,44. Способ осуществляют следующим образом. У пациентов определяют в плазме крови концентрации аргинина , орнитинаи цитруллинаметодом обращеннофазной ВЭЖХ с изократическим элюированием и детектированием по флуоресценции (231/445 нм). Условия определения колонка Диасорб 130 16, 3150 мм подвижная фаза 0,1 М -ацетатный буфер 5,7 / 50 метанол 100/54 (об/об). Скорость потока 0,8 мл/мин, температура колонки 30 С. Дериватизация смешивание пробы с 5 объемами 0,4 раствора о-фталевого альдегида и 0,33-меркаптопропионовой кислоты в 0,4 М -боратном буфере,9,4, затем нейтрализация добавлением равного объема 0,1 М хлорной кислоты. Рассчитывают коэффициент К по формулеКи диагностируют дисфункцию эндотелия при значении К менее 0,44. Приводим доказательства возможности осуществления способа. Под наблюдением находилось 50 пациентов. В крови определялись концентрации свободных аминокислот (аргинина, орнитина, цитруллина). На основании полученных данных рассчитывали коэффициент, который отражает синтез эндогенного . Кроме того, у всех пациентов проводилась функциональная окклюзионная проба с объективным контролем степени вазодилатации реографическим методом. Исследование эндотелийзависимой реакции плечевой артерии в ответ на пробу с реактивной гиперемией осуществляли методом реовазографии с помощью аппаратно-програмного комплекса Импекард. В качестве информативной реографической величины оценивалось изменение максимальной скорости кровотока (/),- показатель вазомоторной функции эндотелия, вы 2 16410 1 2012.10.30 званное реактивной гиперемией (эндотелийзависимая вазодилатация сосудов - ЭЗВД). В настоящее время ЭЗВД 12 принято считать обусловленной дисфункцией эндотелия Полонецкий Л.З. Исследование вазомоторной функции эндотелия плечевой артерии с использованием импедансной технологии у больных атеросклерозом. / Л.З. Полонецкий. // Медицинская панорама. - 2005. -7. - С. 40-43. Инструкция по применению Способ оценки вазомоторной функции эндотелия плечевой артерии реовазографическим методом утв. Мин-вом здравоохранения Респ. Беларусь 14.07.2005. - Минск, 2004. - 8 с Полученные данные были обработаны статистически с использованием пакета программ 6.0. По результатам пробы все пациенты были разделены на 2 группы- с ЭЗВД 12 ,20- с ЭЗВД 12 ,30. Полученные показатели приведены в таблице. Концентрация аминокислот и рассчитанный коэффициент К,( -0,971,95) Примечание- различия статистически значимы с использованием критерия МаннаУитни,0,001. Как видно из таблицы, различия концентрации определяемых аминокислот в группах не наблюдалось. При проведении рангового корреляционного анализа Спирмена не отмечено также наличия взаимосвязи ЭЗВД и наличия дисфункции эндотелия от концентрации исследуемых аминокислот. В то же время различие значения рассчитанного коэффициента в исследуемых группах было высокодостоверно. Кроме того, выявлена сильная положительная корреляция ЭЗВД (0,70,0,05), а также сильная отрицательная корреляция наличия дисфункции эндотелия (-0,75,0,05) от предложенного коэффициента. Для установления значений коэффициента, при котором диагностируется дисфункция эндотелия, проводили построение характеристической кривой, которая отображает взаимосвязь между чувствительностьюи специфичностьютеста по всему диапазону точек разделения. По полученному графику проводили выбор оптимальной точки разделения - значения, отделяющего нормальные показатели от патологических. По выбранной точке определяли чувствительность и специфичность метода, рассчитывали отношение правдоподобия положительногои отрицательногорезультата. Оптимальной точкой разделения в данном случае является коэффициент К менее 0,44(100907,50). На основании приведенных расчетов, о дисфункции эндотелия свидетельствует значение коэффициента К(-)/ менее 0,44. Приводим примеры, подтверждающие возможность осуществления способа. Пример 1. Щ., 47 лет. Практически здоров. ЭЗВД 6375,5634,7418,21 К(-)/1,65. У обследуемого функция эндотелия сохранена. Пример 2. О., 31 год. Диагноз подагра, подагрический артрит первого плюснефалангового сустава правой стопы, межприступная стадия. ЭЗВД-5,9199,36 16410 1 2012.10.3069,6917,02 К(-)/-2,62. У больного имеется дисфункция эндотелия. Из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ действительно позволяет оценить дисфункцию эндотелия. Таким образом, предлагаемый способ является высокоинформативным, объективным и более доступным по сравнению с прототипом и может найти широкое применение в клинической практике. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4