Ингибиторы размножения вируса герпеса в культуре клеток

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНГИБИТОРЫ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА ГЕРПЕСА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК(71) Заявители Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии(72) Авторы Бореко Евгений Иванович Бринкевич Святослав Дмитриевич Павлова Наталья Ильинична Савинова Ольга Владимировна Сосновская Анна Алексеевна Едимечева Ирина Петровна Шадыро Олег Иосифович(73) Патентообладатели Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии 1531 , в качестве соединений, проявляющих активность при подавлении размножения вируса герпеса простоготипа в культуре клеток. 15567 1 2012.02.28 Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть использовано при подавлении размножения вируса герпеса. Известны противогерпетические свойства препаратов 4,6-ди-трет-бутил-2 фениламинофенола 133. Известно использование -аскорбиновой кислоты в качестве вспомогательного компонента композиций для лечения вирусных заболеваний 3, 4. Продукты ее 2 гликозилирования применяются в качестве нетоксичных антиоксидантов, витаминизирующих добавок и стабилизаторов пищевых, фармацевтических и косметических субстанций, а также в качестве фотозащитных компонентов средств по уходу за кожей 5, 6. Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием в отношении вируса герпеса простоготипа. Поставленная задача достигается применением ранее известных соединений - 2 гликозилированных производных -аскорбиновой кислоты общей формулы для подавления вируса герпеса простоготипа в культуре клеток. Производное, содержащее в качествеатом водорода, называется 2 глюкопиранозиласкорбиновая кислота , а содержащее остаток пальмитиновой кислоты - 6 пальмитоил-2 глюкопиранозиласкорбиновая кислота . Авторами обнаружены неочевидные свойства веществ, позволяющие применить их для подавления вируса герпеса простого в культуре клеток. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. 15567 1 2012.02.28 Пример 1. Определение вирусингибирующих свойств 2 глюкопиранозиласкорбиновой кислоты. При проведении исследований используют вирус герпеса простоготипа (ВГП-1,штамм 1 С) и линию клеток рабдомиосаркомы человека . Монослойную культуру клеток , выращенную во флаконах, отмывают от ростовой среды, инфицируют 0,010,001 ТЦД 50/клетка вирусов путем нанесения на клетки разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37 . Затем жидкость удаляют и клетки покрывают средой поддержки (среда 199), содержащей различные концентрации 2 глюкопиранозиласкорбиновой кислоты. После 48 ч инкубации при 37 регистрируют морфологические изменения монослоя клеток (цитопатическое действие (ЦПД) вируса,увеличение 80). Находят минимальную концентрацию соединения, подавляющую развитие ЦПД вируса на 50(50). Критерием противовирусного действия считают наличие различий в сравнении с контролем вируса. Максимальную переносимую концентрацию(МПК) изучаемого вещества определяют как его максимальную концентрацию с отсутствием морфологических изменений неинфицированных клетокпосле 48 ч инкубации. Отношение МПК/ЕС 50 показывает диапазон нетоксических концентраций с антивирусным действием (таблица). Как видно, 2 глюкопиранозиласкорбиновая кислота обладает выраженными вирусингибирующими свойствами в отношении вируса герпеса простоготипа в широком диапазоне концентраций, не токсичных для культуры клеток. Максимально достигаемое снижение титра вируса в сравнении с контролем при этом превышает 2 ТЦД 50/мл(99 ). В то же время, исходное соединение, аскорбиновая кислота, не проявило вирусингибирующих свойств в отношении вируса герпеса простоготипа. Пример 2. Определение вирусингибирующих свойств 6 пальмитоил-2 глюкопиранозиласкорбиновой кислоты. При проведении исследований согласно методике, описанной в примере 1, используют 6 пальмитоил-2 глюкопиранозил-аскорбиновую кислоту. Результат приводят в таблице. Как видно, 6 пальмитоил-2 глюкопиранозиласкорбиновая кислота обладает выраженными вирусингибирующими свойствами в отношении вируса герпеса простого в широком диапазоне концентраций, не токсичных для культуры клеток. Максимально достигаемое снижение титра вируса в сравнении с контролем при этом превышает 2 ТЦД 50/мл (99 ). Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. При использовании 2 гликозилированных производных -аскорбиновой кислоты удается получить выраженное подавление размножения вируса герпеса простоготипа в культуре клеток. Исходное соединение, аскорбиновая кислота, не проявило вирусингибирующих свойств в отношении вируса герпеса простоготипа. Заявляемое химическое соединение может быть использовано в исследовательской лабораторной практике непосредственно в настоящий момент для подавления размножения вируса герпеса. Для использования 2 гликозилированных производных-аскорбиновой кислоты в качестве субстанции нового противовирусного лекарственного средства требуется разработка лекарственной формы, проведение лабораторных и клинических испытаний эффективности и безвредности. и аскорбиновой кислоты Разность с конТитр вирусах,МПК/ Вещество Концентрация, мкг/мл тролем,50 ТЦД 50/мл 50 ТЦД 50/мл 50 4,0 2,0 25 4,0 2,0 12,5 4,700,43 1,3 5,5 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4