Средство для подавления вируса герпеса в культуре клеток

(51)61 35/78 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕРПЕСА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Бореко Евгений Иванович Садовникова Нина Николаевна Павлова Наталья Ильинична(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(57) Применение водного извлечения из листьев земляники. или плодов рябины черноплодной, ., или плодов рябины обыкновенной., или травы сушеницы топяной., или травы череды трехраздельной., или травы горца птичьего., или мха исландского , или корня окопника лекарственного., или шишек хмеля., или семян моркови посевной. ., или плодов тмина обыкновенного., или корневища аира обыкновенного. в качестве средства для подавления вируса герпеса в культуре клеток. Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, и может быть использовано для нейтрализации инфекционности вируса герпеса и редукции вызываемых им заболеваний. Известны вирулицидные свойства антрахинонов, получаемых из алоэ 1, гиперицина и псевдогиперицина из зверобоя продырявленного (.) 2-4, аллицина и свежего экстракта из чеснока 5. Известны также вирулицидные свойства полифенолов из растений родов , , , , , , , , , , , , , , , , , ,у, , , , , , , , , , , , , , , , ,8567 1 2006.10.30, , , , , , ,и противовирусные свойства необработанных экстрактов различных растений 6, 7. Задачей изобретения является расширение ассортимента средств, обладающих противовирусным действием (вирулицидными свойствами). Поставленная задача достигается применением водного извлечения из листьев земляники. или плодов рябины черноплодной, .,или плодов рябины обыкновенной., или травы сушеницы топяной., или травы череды трехраздельной., или травы горца птичьего., или мха исландскогоили корня окопника лекарственного., или шишек хмеля., или семян моркови посевной. ., или плодов тмина обыкновенного., или корневища аира обыкновенного. в качестве средства для подавления вируса герпеса в культуре клеток. Настои (отвары) перечисленных растений разрешены к применению в медицинской практике для лечения различных заболеваний. В частности, настои (отвары) листьев земляники используется как потогонное, послабляющее и мочегонное средство, а также средство, способствующее выведению солей(подагра, почечные и печеночные камни) 8, с. 195-198 9, с. 519, настой плодов рябины черноплодной - как витаминное и гипотензивное средство 9, с. 523, плодов рябины обыкновенной - как витаминное средство 8, 185-187 9, с. 523, травы сушеницы топяной - как ранозаживляющее и гипотензивное средство 8, с. 389-393 9, с. 524, травы череды трехраздельной - как витаминное, потогонное, мочегонное средство и как горечь для улучшения аппетита 8, с. 403-405 9, с. 525, травы спорыша - как маточное кровоостанавливающее средство 8, с. 136-138 9, с. 518, мха исландского - как гигроскопичный перевязочный материал 8, с. 58-59, корня окопника лекарственного - как обволакивающее и мягчительное средство 8, с. 327-330, шишек хмеля как успокаивающее, противовоспалительное, мочегонное, возбуждающее аппетит, легкое слабительное, снотворное, болеутоляющее и противосудорожное средство 8, с. 120-122, семян моркови - как витаминное и слабительное средство 8, с. 285-288 9, с. 521, плодов тмина обыкновенного - как ветрогонное средство 8, с. 275-277 9, с. 525, корневищ аира - как ароматическая горечь для улучшения пищеварения 8, с. 81-84 9, с. 516. Авторами обнаружено неочевидное свойство, позволяющее применить извлечения из перечисленных растений в качестве средств, обладающих противовирусным действием(вирулицидными свойствами). Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Водное извлечение из листьев земляники (.) готовят по стандартной прописи (ех 10,0200,0). 10,0 г измельченной части растения помещают в керамическую или эмалированную посуду, заливают 200,0 мл дистиллированной воды, доведенной до кипения, закрывают крышкой и настаивают в течение 20 мин на кипящей водяной бане. Готовое извлечение процеживают через многослойную стерильную марлевую салфетку. Объединяют равные объемы вируссодержащей суспензии, содержащей 100 БОЕ/мл вируса герпеса простого (штамм 1 С), и разведения водного извлечения из растения. Смесь оставляют при комнатной температуре и через определенные промежутки времени определяют инфекционность сохранившегося вируса методом бляшек под агаровым покрытием. На монослойную культуру фибробластов эмбрионов кур, выращенную во флаконах наносят инкубационную смесь вируссодержащей суспензии и водного извлечения из растения в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37 . Затем жидкость удаляют и клетки покрывают расплавом питательной среды на основе концентрата среды 199 с добавлением 1 бактагара и 0,005 нейтрального красного (все реактивы - ). После застывания покрытия флаконы помещают в термостат на 48-72 ч и затем подсчитывают количество 2 8567 1 2006.10.30 бляшек, видимых благодаря присутствию в покрытии витального красителя. На основе количества бляшек вычисляют титр вируса. За реальное вирулицидное действие настоев принимают разность между титром вируса в пробе без экспозиции (точка 0 мин) и титром,определенным через 1 и 24 ч после начала контакта настоя с вирусной суспензией. Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из листьев земляники обладает выраженными вирулицидными свойствами, проявляющимися фактически в момент объединения с вируссодержащей суспензией, а также при 1 и 24 ч экспозиции. Пример 2. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с плодами рябины черноплодной. Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из плодов рябины черноплодной обладает выраженными вирулицидными свойствами, проявляющимися фактически в момент объединения с вируссодержащей суспензией, а также при 1 и 24 ч экспозиции. Пример 3. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с плодами рябины обыкновенной. Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из плодов рябины обыкновенной обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Вирулицидные свойства извлечений из лекарственных растений Наличие вирулицидных свойств Название растения 24 ч 1 ч 0 ч Разведения Сем.(розоцветные) Земляника (.) лист мена Тмин обыкновенный (.) 8567 1 2006.10.30 Оценка обозначается наличие вирулицидных свойств (нейтрализация 100 БОЕ/мл вируса) в настое 6,0 на 180,0 и его разведениях 15 , 150 , 1500 .- средние значения изэкспериментов, экспозиция 24 ч. Пример 4. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с травой сушеницы топяной (.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из травы сушеницы топяной обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 5. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с травой череды трехраздельной(.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из травы череды трехраздельной обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 6. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с травой спорыша (.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из травы спорыша обладает выраженными вирулицидными свойствами, проявляющимися фактически в момент объединения с вируссодержащей суспензией, а также при 24 ч экспозиции. Пример 7. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с мхомисландским. Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из мха исландского обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 8. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с корнем окопника лекарственного(.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из окопника лекарственного обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 9. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с шишками хмеля ( р .). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из шишек хмеля обладает вирулицидными свойствами,проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 10. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с семенами моркови ((.) .). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из семян моркови обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 1 и 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Пример 11. Манипуляции, описанные в примере 1, выполняют с плодами тмина обыкновенного(.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из плодов тмина обыкновенного обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией.(.). Полученные результаты приведены в таблице. Как видно, водное извлечение из корневища аира обыкновенного обладает вирулицидными свойствами, проявляющимися через 24 ч экспозиции с вируссодержащей суспензией. Таким образом, заявляемое решение позволяет решить поставленную задачу. Применение извлечений по крайней мере из одного из перечисленных лекарственных растений листьев земляники (.), плодов рябины черноплодной (.), плодов рябины обыкновенной (.), травы сушеницы топяной (.), травы череды трехраздельной (.), травы спорыша (.), мхаисландского, корня окопника лекарственного (.), шишек хмеля (.),семян моркови ((.) .), плодов тмина обыкновенного (.), корневища аира обыкновенного (.) позволяет нейтрализовать инфекционность 100 БОЕ/мл вируса герпеса простого. Предполагается наличие вирулицидных свойств извлечений из перечисленных растений и в отношении других вирусов. Перечисленные растения являются лекарственными и разрешены к медицинскому применению с различными показаниями, а испытанные извлечения из них приготовлены по стандартной прописи. Поэтому заявляемое решение может быть использовано непосредственно в настоящий момент, как в исследовательской, так и в медицинской практике для нейтрализации инфекционности вируса герпеса и редукции вызываемых им заболеваний. В связи с установленными свойствами заявляемое решение имеет практическое значение. На его основе может быть осуществлено лечение и профилактика рецидивов герпетических поражений. Извлечения из лекарственных трав могут применяться как самостоятельно, так и в сочетании с ацикловиром. Известно, что при лечении герпетических поражений ацикловиром достаточно быстро развивается лекарственная устойчивость возбудителя 2, 3. Следовательно, в таких случаях оправдано применение заявляемых извлечений из лекарственных трав для самостоятельной или комбинированной терапии. Заявляемое решение может быть использовано в медицинской практике в настоящий момент, однако для выработки оптимальных рекомендаций по применению с целью лечения и профилактики герпетической инфекции необходимо накопление новых данных и отработка оптимальных схем применения. Источники информации 1. Патент США 4,670,265 МПК А 61 035/78 А 61 К 031/12, 1987. 2. Патент США 5,049,589 МПК 01 031/0801 031/04501 025/02 А 61 К 009/14, 1991. 3. Патент США 5,316,768 МПК А 61 К 035/78, 1994. 4. Патент США 6,001,882 МПК А 61 К 031/12, 1999. 5.,.О.,,В,,В., 1992 ,585, 417-23. 6. Патент США 5,780,060 МПК 61 009/5061 035/78, 1998. 7. Патент США 5,411,733 МПК 61 035/78, 1995. 8. Гесь Д.А., Горбач .В., Кадаев Г и др. Лекарственные растения и их применение. Изд. 5-е. - Мн. Наука и техника, 1974. - С. 592. 9. Муравьева Л.А. Лекарственные растения. БМЭ. Главн. ред. Петровский Б.В. Изд. 3-е,Т. 12, 1980.- С. 512-526. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5