Способ выявления возбудителей урогенитальной инфекции у женщины

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖЕНЩИНЫ(71) Заявители Кулага Ольга Константиновна Костюк Светлана Андреевна Гришкевич Алина Николаевна(72) Авторы Кулага Ольга Константиновна Костюк Светлана Андреевна Гришкевич Алина Николаевна(73) Патентообладатели Кулага Ольга Константиновна Костюк Светлана Андреевна Гришкевич Алина Николаевна(56) КОЗЛОВА В.И. и др. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. - М. Триада-Х,2003. - С. 359-365.2280864 С 2, 2006.2097764 С 1, 1997. МОЛОЧКОВ В.А. Российский журнал кожных и венерических болезней. 2000. -3. - С.48-56. Урогенитальные инфекции у женщин. Клиника. Диагностика. Лечение. - М. Медицинское информационное агентство, 2005. - С. 25-27, 70. ПОЛЕЩУК Н.Н. и др. Актуальные проблемы гигиены и эпидемиологии. Материалы научно-практической конференции. - Минск, 2006. - С. 466-468.(57) Способ выявления возбудителей урогенитальной инфекции у женщины, заключающийся в том, что исследуют методом полимеразной цепной реакции биологический материал, взятый из цервикального канала, заднего свода влагалища, уретры, а также с внутренней поверхности малых половых губ и преддверия влагалища. Изобретение относится к медицине, к разделу акушерства и гинекологии, а также к разделу лабораторной диагностики. Известен способ обследования женщин на наличие возбудителей урогенитальных инфекций путем взятия биологического материала (соскоб эпителия) стерильным зондом или ложкой Фолькмана из цервикального канала, заднего свода влагалища и уретры с последующим его исследованием при помощи метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является взятие биологического содержимого из цервикального канала, заднего свода и уретры. Однако указанный в качестве прототипа способ, основанный на заборе материала только из вышеуказанных мест, обладает следующими недостатками. Проведенные исследования показали, что среди населения превалируют в основном смешанные формы инфекций гениталий. Так, в настоящее время крайне редко (не более 10 ) воспалительный процесс вызывается только одним возбудителем. Инфекция, в состав кото 12821 1 2010.02.28 рой входят Т.и один или несколько других возбудителей (С. ,., . , .и др.), диагностируется в 89,5 случаев 1. Это может быть обусловлено в том числе и резервирующей ролью влагалищных трихомонад, основанной на способности Т.к фагоцитозу других инфекционных агентов. Кроме того,фагоцитированные микроорганизмы из-за отсутствия у трихомонад протеолитических ферментов могут сохранять внутри клетки свою жизнеспособность и быть даже защищенными от воздействия антибиотиков. Наряду с этим современные исследования свидетельствуют о том, что преобладающей разновидностью трихомонад являются безжгутиковые формы паразита, имеющие свои морфологические особенности, вследствие чего обнаружение этого возбудителя в указанных ранее местах забора биоматериала стало проблематичным. Кроме того, изменение возбудителем морфологических свойств, обусловленное появлением амастиготных, ланцетовидных, безъядерных и других форм, способствовало трудностям при использовании рутинных методов диагностики. Так, согласно проведенным исследованиям, наиболее чувствительным и специфичным является ПЦР-метод 2. Но даже при использовании этого метода способ взятия материала играет ключевое значение. Выявить возбудитель возможно только при количестве не менее 100 копий ДНК в 1 мл биологической пробы. Для этого взятие материала следует производить в местах наибольшей концентрации возбудителя, потому как в ряде случаев в мазках-соскобах выявляется не более 7-10 особей возбудителя 3. Различные многочисленные патогенные агенты в случаях одновременного или последовательного заражения могут репродуцироваться в одних и тех же клеточных системах,вызывая стойкий, слабовыраженный воспалительный процесс, протекающий в хронической форме. Так, наиболее часто встречаемые в акушерско-гинекологической практике вестибулярный папилломатоз и кондиломатоз вульвы как проявление пролиферативной фазы воспаления, специфичной для трихомонадной инфекции и вирусных агентов, являются местами наибольшего скопления возбудителей, так как при этом количество эпителия на единицу площади значительно больше на ворсинистой поверхности, нежели на поверхности с гладкой эпителиальной выстилкой 4. Ввиду того, что ключевым звеном в патогенетическом механизме воздействия трихомонадной инфекции является адгезия возбудителя к эпителиальным клеткам, целесообразно производить взятие материала в местах наибольшей эпителизации, а следовательно, и адгезии, где количество возбудителя на единицу площади будет сравнительно большим, внутренняя поверхность малых половых губ и преддверия влагалища. Кроме того, проникновение возбудителей в более глубокие эпителия, как цервикальный канал и уретра,способствует тому, что обнаружить их уже сложнее. Задачей заявляемого изобретения является повышение точности выявления очагов возбудителей урогенитальных инфекций у женщин. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ выявления возбудителей урогенитальной инфекции у женщины,заключающийся в том, что исследуют методом полимеразной цепной реакции биологический материал, взятый из цервикального канала,заднего свода влагалища, уретры, а также с внутренней поверхности малых половых губ и преддверия влагалища. Предложенный способ обусловлен тем условием, что трудности в диагностике связаны с патоморфологическими особенностями микроорганизмов. Учитывая, что среди урогенитальных инфекций наиболее часто встречаемой и трудноподдающейся лечению является трихомонадная инфекция, а также тот факт, что трихомонада является резервуаром для многих вирусов, бактерий и грибов, становится понятной актуальность диагностического поиска 2. В условиях изменения возбудителем морфологических свойств, достоверность метода ПЦР-диагностики возросла в сравнении с другими методами. Но в случае незначительной концентрации или же отсутствия возбудителей в биологическом материале даже высокоспециализированные методы не всегда оказываются достоверными. 2 12821 1 2010.02.28 Возникающие на фоне воспалительного процесса гениталий вестибулярный папилломатоз и кондиломатоз вульвы, придающие ворсинистый характер эпителиальной выстилке, являются местом обитания многих возбудителей, а также увеличивают площадь адгезии и безжгутиковых трихомонад. Диагностика по способу-прототипу, в отличие от предлагаемого способа, несмотря на высокую специфичность применяемых методов ДНК-диагностики, не способна в полной мере отображать этиологический характер воспаления репродуктивных органов женщин за счет малого количества возбудителей, попавших в исследуемую пробу. И, как следствие,заболевания в ряде случаев не диагностируются, пациентки не получают должного лечения, в то время как продолжается патологическое воздействие инфекционных агентов. Пример 1. Больная Н., 25 лет. Страдает вестибулярным папилломатозом в течение 2 лет. Диагноз подострое течение правостороннего сальпингоофорита вестибулярный папилломатоз кольпит. Ранее, с целью диагностики, путем использования серологических методов у пациентки выявлена уреаплазменная инфекция. Проведенная терапия, направленная на элиминацию уреаплазменной инфекции, оказалась неэффективной. В связи с этим больную обследуют заявляемым способом. Для этого у больной берут соскоб эпителия с цервикального канала, заднего свода влагалища и уретры, внутренней поверхности малых половых губ и преддверия влагалища После чего проводят генотипическую диагностику методом полимеразной цепной реакции. В результате обследования у больной выявлено наличие ДНК трихомонады, уреаплазмы и папилломавирусной инфекции. Следовательно, идентифицированы возбудители, которые способствовали возникновению воспалительного процесса придатков, вестибулярного папилломатоза и кольпита. Пациентке назначена комплексная, поэтапная терапия, направленная на элиминацию возбудителей с учетом их патоморфологических особенностей 5. Контрольные исследования путем генотипической диагностики проводят спустя 35-45 дней после окончания курсов лечения, направленных на элиминацию патогенной протозойной, бактериальной и вирусной инфекции. Повторный осмотр пациентки, проведенный через 55 дней после окончания курсов терапии, показал излечение воспалительного процесса придатков, отсутствие признаков кольпита и вестибулярного папилломатоза. Пример 2. Больная Ч., 24 года. Диагноз беременность 32 недели хроническая фетоплацентарная недостаточность вторичная, относительная хроническая гипоксия плода вагинит. Согласно данным доплерометрического исследования у пациентки наблюдается нарушение фетоплацентарного кровотока - степени (по Медведеву). На предмет наличия урогенитальных инфекций пациентка была обследована при помощи метода ПЦР-диагностики, а также был взят обзорный мазок. Результаты возбудители урогенитальных инфекций не были верифицированы, в мазке количество лейкоцитов от 20 до 30 (из взятого соскоба уретры и цервикального канала),гонококки и трихомонады не обнаружены. Проведенная пациентке терапия, направленная на улучшение маточно-плацентарного кровотока, согласно существующим стандартам, оказалась неэффективной. Начиная с седьмых суток от начала проведенной терапии, у пациентки ежедневно регистрируются данные КТГ, свидетельствующие о внутриутробном страдании плода. В связи с этим больную обследуют заявляемым способом. 3 12821 1 2010.02.28 Для этого у больной берут соскоб эпителия с цервикального канала, заднего свода влагалища и уретры, внутренней поверхности малых половых губ и преддверия влагалища, после чего проводят генотипическую диагностику методом полимеразной цепной реакции. В результате обследования у больной выявлена ДНК трихомонады. Следовательно, основной этиологический фактор возникновения фетоплацентарной недостаточности, гипоксии плода и вагинита - воздействие трихомонадной инфекции. Пациентке была назначена противотрихомонадная терапия 5. Спустя 4 дня от момента начала терапии, наблюдалась положительная динамика. Контрольное исследование путем генотипической диагностики проводят спустя 35-45 дней после окончания курса лечения. У больной Ч. контрольные исследования показали отсутствие ДНК трихомонад, а значит,этиологическое излечение. Пациентка родила живого здорового ребенка через естественные родовые пути в сроке 40 недель 1 день. Послеродовый период протекал без особенностей. Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в более точном выявлении очагов возбудителей урогенитальных инфекций, оказывающих патологическое воздействие на репродуктивную систему женщин. Источники информации 1. Копылов В.М., Бочкарев Е.Г., Говорун В.М. и др. Урогенитальный трихомониаз. Актуальные вопросы диагностики и лечения Пособие для врачей. - М., 2001. - С. 40. 2.,ТС,.// .. - 1998. - . 36(11). - . 32053210. 3. Полещук Н.Н., Рубаник Л.В., Капитулец Н.Н., Костюк С.А. Устойчивость к замораживанию уретральных безжгутиковых форм Т.и проблемы их идентификации.// Материалы научно-практической конференции, посвященной 80-летию санитарноэпидемиологической службы Республики Беларусь. - Минск, 17 ноября 2006. - С. 466-468. 4. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. - М., 2003. - С. 359-365. 5. Кулага Технология поэтапного лечения воспалительных заболеваний репродуктивных органов // Рецепт. - 2006. -6 (50). - С. 77-82. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4