Способ получения антибиотика бревисин

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА БРЕВИСИН(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт механики металлополимерных систем имени В.А.Белого Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Орехов Дмитрий Арсентьевич Пинчук Леонид Семенович Цветкова Елена Александровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт механики металлополимерных систем имени В.А.Белого Национальной академии наук Беларуси(57) Способ получения антибиотика бревисин из среды культивирования,отличающийся тем, что в качестве среды для культивированияиспользуют водный экстракт смеси фосфогипса и помета домашней птицы с добавлением 4 мас.мелассы, при этом для приготовления водного экстракта используют на 1 л воды 300 г смеси при массовом соотношении в ней фосфогипса и помета домашней птицы от 14 до 12. Изобретение относится к области выделения биологически активного вещества из бактериальной массы. Клетки бактерии-антагониста- штамма, описанного в 1, обладают пестицидной, фунгицидной и антибиотической активностью. Их используют в виде нативной культуры или водной суспензии бактериальных клеток. Недостаток таких препаратов состоит в том, что они нестабильны при хранении и в течение 1,5-2,0 месяцев теряют свою активность. Практика показала, что рациональнее использовать полипептидный продукт, продуцируемый этой культурой 2. Однако изготовление химически чистого антибиотика связано со значительными расходами энергии и растворителей. Альтернативой являются антибиотические препараты в виде сухого порошка, состоящего из подсушенной биомассыв смеси с фосфогипсом 3, или в виде стабилизированной поливиниловым спиртом жидкой культуры, содержащей антибиотик и живые клетки его продуцента 4. Технико-экономическая эффективность таких препаратов зависит от производительности процессов выращивания биомассы. Скорость получения биомассы в значительной мере определяется свойствами питательной среды. В качестве последней 10870 1 2008.08.30 применяют жидкие системы, содержащие большое количество органических веществ. Известны две среды для выращивания 5 первая состоит из автолизата дрожжей и гидролизата казеина с содержанием аминного азота в количестве 120 мг/л вторая содержит 4 - 0,2 г/л,- 5 г/л, К 2 НРО 4 - 9,9 г/л, глицерин - 20 г/л, аммоний щавелекислый - 8,12 г/л, молочную кислоту - 8 мл/л, остальное - вода водопроводная(рН 7,5). Недостатки этих сред нецелесообразность использования в качестве компонентов сырья, применяемого в пищевой промышленности многокомпонентность состава, обусловливающая технологические трудности приготовления сред невысокая эффективность последних. Прототипом изобретения является способ получения бактериального препарата 2. Его первая и главная операция - выращивание биомассына сульфатномелассной среде, содержащей (4)24 - 0,5 , мелассу - 4,0 и- 0,3 мас. . Затем биомассу культивируют в течение 3-7 сут до максимального накопления в ней кристаллического антибиотика и подвергают дальнейшей переработке, содержание которой зависит от вида обрабатываемого объекта и методики обработки его препаратом. Переработку биомассы можно осуществить, например, методами, описанными в 3,4. Недостатки прототипа ограниченность насыщения питательной среды минеральными веществами и микроэлементами отсутствие в питательной среде органического азота низкая скорость выращивания биомассы. Задачи, на решение которых направлено изобретение 1) увеличить выход биомассы после проведения первой операции 2) повысить содержание в препарате кристаллического антибиотика 3) упростить технологию получения препарата. Поставленные задачи решаются тем, что известный способ получения бактериального препарата бревисин, состоящий из операций выращивания биомассына сульфатно-мелассной водной среде, культивирования в ней бактерий в течение 3-7 сут и последующей обработки препарата, отличается содержанием первой операции. В качестве среды культивирования используют водный экстракт смеси фосфогипса и помета домашней птицы с добавлением 4 мас.мелассы, при этом для приготовления водного экстракта используют на 1 л воды 300 г смеси при массовом соотношении в ней фосфогипса и помета домашней птицы от 14 до 12. Сущность изобретения состоит в том, что новая культуральная среда содержит азотистые соединения, минеральные вещества и микроэлементы в оптимальных количествах и их соотношениях, обеспечивающих интенсивную ферментацию клеток. Приведем примеры осуществления способа. В качестве основных компонентов смеси для приготовления среды культивирования использовали бесподстилочный куриный помет (КП) и фосфогипс (ФГ) - отвал производства фосфорной кислоты экстракционным способом. Химический состав этих компонентов приведен в табл. 1. Таблица 1 Компоненты КП ФГ 10870 1 2008.08.30 Анализ данных табл. 1 свидетельствует о том, что основные компоненты смеси содержат значительное количество органического азота, микроэлементов и минеральных соединений, необходимых для структурно-функционального развития клеток микроорганизмов. Среду культивирования готовили по следующей технологии. 1. Приготовление купажа (смеси компонентов) путем тщательного перемешивания. 2. Экстракция из купажа водорастворимых компонентов путем заливки его водой (1 л воды на 300 г купажа), периодического перемешивания и последующего слива раствора. 3. Фильтрование раствора. 4. Добавка в фильтрат мелассы (4 мас. ) В табл. 2 приведены данные о продуктивностипри культивировании на средах разного состава. Таблица 2 Состав среды Меласса (4 мас. ), водный экстракт ФГКП, взятых в массовом соотношении 1,01,5 12 13 14 1,04,5 Меласса (4 мас. )(4)24 (0,5 )(0,3 )вода (остальное) прототип Анализ данных табл. 2 приводит к следующим заключениям. 1. При культивированиипредложенным способом выход биомассы и кристаллического антибиотика выше по сравнению со способом-прототипом. 2. При использовании купажа ФГКП оптимальные концентрации основных компонентов находятся в пределах от 14 до 12 по массе. 3. Предложенный способ даже при неоптимальных концентрациях ФГКП обусловливает значительно больший выход кристаллического антибиотика, чем способ-прототип. Благодаря последнему обстоятельству технология получения как собственно антибиотика, так и его композиций в виде водных суспензий, содержащих живые клетки, существенно упрощается. Таким образом, задачи, поставленные при создании изобретения, выполнены. Предложенный способ найдет применение в биотехнологии при выпуске препаратов, обладающих пестицидной, фунгицидной и антибиотической активностью. 10870 1 2008.08.30 Источники информации 1. Орехов Д.А. Выделение и изучение почвенной споровой палочки, обладающей антагонистическими свойствами // Бюлл. ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии. 1968. -14. - С. 71-75. 2. Орехов Д.А., Шкляр М.С., Промышлянский , Боровков А.В. Бревисин - новый полипептидный антибиотик, продуцируемый Вас. . 1. Выделение, хроматографическое излучение и антибиотическая активность бревисина // Бюл. ВНИИ сельскохозяйственной биологии. - 1970. -14. - Вып. 3. - С. 58-63 (прототип). 3. Патент РФ 2127520, МПК А 01 63/00, С 12 Р 1/04, 21/00 // (С 12 Р 1/04, С 12 108),1999. 4. Патент РФ 2127976, МПК А 01 63/00, 1999. 5. Жарикова Г.Г., Зарубина А.П., Херат Д.М. и др. Образование антибиотиковполипептидов спонтанными и индуцированными мутантами. . - В. // Антибиотики и их продуценты. - М. Наука. - 1975. - С. 163-186. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4