Способ получения биомассы рожистых бактерий

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ РОЖИСТЫХ БАКТЕРИЙ(71) Заявители Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(73) Патентообладатели Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(57) Способ получения биомассы рожистых бактерий, включающий посев бактерий в питательную среду, содержащую пептон, сыворотку крови, твин-80, глюкозу, гидрофосфат натрия, дигидрофосфат калия, хлорид натрия, инкубирование бактерий и сбор полученной биомассы, отличающийся тем, что используют питательную среду, дополнительно содержащую глицерин, витамин В 1 и гидролизат белков крови, мясокостной муки или говяжьего мяса, содержащий 180-200 мгаминного азота, при следующем соотношении компонентов, мас.пептон сыворотка крови твин-80 глюкоза гидрофосфат натрия дигидрофосфат калия хлорид натрия глицерин витамин В 1 гидролизат белков Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано при производстве противорожистых биологических препаратов. Известны способы получения биомассы рожистых бактерий для производства биологических препаратов 1, 2, 3. Наиболее близким техническим решением является способ выращивания рожистых бактерий в питательной среде на основе гидролизата Хоттингера, включающий следующие компоненты (мас. ) основа (гидролизат Хоттингера) - 25,0-30,0, пептон - 0,5, дву 10030 1 2007.12.30 замещенный фосфорнокислый натрий - 1,8, дрожжевой экстракт - 0,5, печеночный экстракт - 5,0, натрий хлористый - 0,2, однозамещенный фосфорнокислый калий - 0,3, глюкоза - 0,4, твин-80 - 0,05, вода дистиллированная - до 100,0 4. Однако известный способ не обеспечивает высокий выход жизнеспособной биомассы отдельных штаммов рожистых бактерий под действием используемых стимуляторов роста. Задача изобретения - повышение выхода и биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что биомассу рожистых бактерий выращивают на гидролизате белков крови или гидролизате белков мясокостной муки, или гидролизате белков говяжьего мяса, содержащем источники азота, углерода, минеральные соли и стимуляторы роста. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что посев бактерий осуществляют в питательную среду, содержащую пептон, сыворотку крови, твин-80, глюкозу,гидрофосфат натрия, дигидрофосфат калия, хлорид натрия, инкубирование бактерий и сбор полученной биомассы, отличающийся тем, что используют питательную среду, дополнительно содержащую глицерин, витамин 1 и гидролизат белков крови, мясокостной муки или говяжьего мяса, содержащий 180-200 мгаминного азота, при следующем соотношении компонентов, мас.пептон сыворотка крови твин-80 глюкоза гидрофосфат натрия дигидрофосфат калия хлорид натрия глицерин витамин В 1 гидролизат белков В приготовленные питательные среды засевали рожистые бактерии различных штаммов матрикс Конева, ВР-2 и ВГНКИ-6. Выращивание бактерий осуществляли в течение 8-24 часов при температуре 37 С. Общую концентрацию бактерий определяли по оптической плотности на приборе ФЭК-М в сравнении со стандартом. Жизнеспособность бактерий определяли по общепринятой методике по количеству колоний, выросших на МПА в чашках Петри. Для этого готовили разведения культур от 10-1 до 10-8 в физиологическом растворе и высевали приготовленные баксуспензии по 0,1 см 3 в отдельную чашку Петри. Посевы инкубировали 48 часов при температуре 37 С. Полученные бактериальные культуры использовали для изготовления биологических препаратов для профилактики рожи свиней. Пример 1 (прототип) На основе гидролизата Хоттингера была приготовлена питательная среда, включающая следующие компоненты (мас. ) основа (гидролизат Хоттингера) - 25,0-30,0, пептон - 0,5, двузамещенный фосфорнокислый натрий - 1,8, дрожжевой экстракт - 0,5,печеночный экстракт - 5,0, натрий хлористый - 0,2, однозамещенный фосфорнокислый калий - 0,3, глюкоза - 0,1-0,4, твин-80 - 0,05, вода дистиллированная - до 100,0. рН составила 7,4-7,6. Среда содержит 175-180 мгаминного азота. Выращивание производили в течение 24 часов. Через 24 часа накопление составило 3,2 млрд. микробных клеток, а жизнеспособность составила 2,1 млрд. микробных клеток. 2 10030 1 2007.12.30 Пример 2 Готовили питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные соли и стимуляторы роста, на основе гидролизата говяжьего мяса, включающую следующие компоненты (мас. ) пептон - 1,0, сыворотка крови - 2,0, твин-80 - 0,05, глюкоза 0,2, гидрофосфат натрия - 1,8, дегидрофосфат калия - 0,3, натрия хлорид - 0,3, глицерин 0,002, витамин 1 - 0,005, гидролизат белков говяжьего мяса - остальное. Среду засевали рожистыми бактериями. Выращивание осуществляли 24 часа при температуре 37 С. Через 12 часов накопление рожистых бактерий составило 9,4 млрд. микробных клеток, жизнеспособными были 8,2 млрд. микробных клеток. Пример 3 То же, что в примере 2, но среду готовили наоснове гидролизатов белков мясокостной муки. Общая концентрация рожистых бактерий составила 9,2 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 8,0 млрд. микробных клеток. Пример 4 То же, что в примере 2, но среду готовили на основе гидролизатов белков крови. Общая концентрация рожистых бактерий составила 10,6 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 8,6 млрд. микробных клеток. Пример 5 То же, что в примере 2, но в среду добавляли 1 сыворотки крови, 0,2 натрия хлорида и 0,1 глюкозы. Общая концентрация рожистых бактерий составила 3,0 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 1,8 млрд. микробных клеток. Пример 6 То же, что в примере 2, но в среду добавляли 3 сыворотки крови, 0,4 натрия хлорида и 0,3 глюкозы. Общая концентрация рожистых бактерий составила 7,8 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 5,1 млрд. микробных клеток. Пример 7 То же, что в примере 2, но в среду добавляли 0,001 глицерина и 0,004 витамина А. Общая концентрация рожистых бактерий составила 7,2 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 4,4 млрд. микробных клеток. Пример 8 То же, что в примере 2, но в среду добавляли 0,003 глицерина и 0,006 витамина А. Общая концентрация рожистых бактерий составила 8,8 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 6,2 млрд. микробных клеток. Из приведенных данных видно, что предлагаемый способ обеспечивает интенсивный рост рожистых бактерий, и в зависимости от основы питательной среды накопление бактериальных клеток составило 9,2-10,6 млрд. микробных клеток, а жизнеспособных - 8,08,2 млрд. микробных клеток. Использование предлагаемого способа в производстве вакцин против рожи свиней позволит в сопоставлении с известным (пример 1) увеличить выход целевого продукта в 3,8 раза и в 4 раза снизить энергетические, трудовые и материальные ресурсы. Источники информации 1. Ветеринарные препараты Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе. - М. Колос, 1981. С. 266-272. 10030 1 2007.12.30 2. Зайцев В.В., Максимович В.В., Дремач Г.Э. Способ получения биомассы рожистых бактерий // Афцыйны бюлетэнь. - 2000. -4. - С. 43. 3. Инструкция по изготовлению и контролю сухой вакцины против рожи свиней. - М.,1991. - С. 11. 4. Ярцев М.Я. Разработка технологии производства живых сухих вакцин против пастереллеза птиц, рожи свиней и бруцеллеза животных (экспериментальные исследования и внедрение) Дис.докт. биол. наук. - М., 1990. - С. 224, 406. 5...-. - 1976. - . 301. - . 49-57. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4