Лиофилизированный реагент для определения активированного парциального тромбопластинового времени и способ его получения

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫЙ РЕАГЕНТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВИРОВАННОГО ПАРЦИАЛЬНОГО ТРОМБОПЛАСТИНОВОГО ВРЕМЕНИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявитель Яковлева Людмила Федоровна(72) Авторы Яковлева Людмила Федоровна Смирнова Людмила Алексеевна(73) Патентообладатель Яковлева Людмила Федоровна(57) 1. Лиофилизированный реагент для определения активированного парциального тромбопластинового времени, содержащий фосфолипиды, выделенные из ткани человека или животных, отличающийся тем, что он содержит фосфолипиды в виде лиофилизированной эмульсии фосфолипидов в суспензии каолина в веронал-ацетатном буфере при следующем соотношении компонентов, мас.в расчете на сухой остаток фосфолипиды 28,5-28,6 каолин 14,2-14,3 веронал-ацетатный буфер 57,0-58,0. 2. Способ получения реагента по п. 1, включающий выделение фосфолипидов из ткани человека или животных в сухом виде, приготовление эмульсии фосфолипидов в 0,5 суспензии каолина в веронал-ацетатном буфере с рН 7,3-7,4, ультразвуковое диспергирование и лиофильное высушивание эмульсии. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что фосфолипиды выделяют из плаценты женщин или крупного рогатого скота.(56) Тарасова Л.Н. и др. Лабораторное дело. - 1990. -6. - С. 29-32.957908, 1982. Папаян Л.П. и др. Лабораторное дело. - 1980. -11. - С. 666-668.2104551 1, 1998.1570356 1, 1993.5506146 , 1996. Изобретение относится к медицине, а точнее к гематологии и коагулологии, и может найти применение при исследовании состояния системы свертывания крови, основанных на определении активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), у больных коагулопатиями, у больных перед хирургическим вмешательством. Изобретение может быть использовано для определения качества антигемофильных препаратов, при 5943 1 меняемых для лечения больных гемофилией, а также для контроля лечения антикоагулянтами. Известен лиофилизированный реагент, используемый при определении АПТВ - парциальный тромбопластин, - содержащий лиофилизированную эмульсию фосфолипидов в изотоническом физиологическом растворе, полученных из тканей человека или животных- эритроциты крови человека, головной и спинной мозг, нервы, печень, почки, сердце,скелетные мышцы (1, 2, 3, 4). Известен способ получения данного лиофилизированного реагента, включающий получение фосфолипидов из тканей человека или животных в сухом виде, приготовление эмульсии полученных фосфолипидов в изотоническом физиологическом растворе и лиофильное высушивание эмульсии (1, 2, 3, 4). Однако известные технические решения не позволяют получить реагент для определения АПТВ, стандартизованный по контактной и фосфолипидной активации, из - за чего при использовании известного реагента для определения АПТВ требуется применение дополнительных химических реактивов. Задача изобретения состоит в получении реагента, стабилизированного по контактной и фосфолипидной активации и позволяющего осуществлять определение АПТВ без использования дополнительных химических реактивов. Сущность изобретения заключается в том, что для решения поставленной задачи в лиофилизированном реагенте для определения АПТВ, содержащем фосфолипиды, выделенные из ткани человека или животных, отличием является то, что он содержит фосфолипиды в виде лиофилизированной эмульсии фосфолипидов в суспензии каолина в вероналацетатном буфере при следующем соотношении компонентов, мас.в расчете на сухой остаток фосфолипиды- 14,2-14,3 веронал-ацетатный буфер - 57,0-58,0. В способе получения реагента для определения АПТВ, включающем выделение фосфолипидов из ткани человека или животных в сухом виде, приготовление эмульсии фосфолипидов в 0,5 суспензии каолина в веронал-ацетатном буфере с рН 7,3-7,4, ультразвуковое диспергирование и лиофильное высушивание эмульсии, при этом фосфолипиды выделяют из плаценты женщин или крупного рогатого скота. Изобретение используют следующим образом. Исходное сырье (ткань человека или животных) отмывают и гомогенизируют. Гомогенат обрабатывают экстрагентом фосфолипидов (спирт, ацетон) и после окончания экстракции фильтруют. Экстракт высушивают и сухой остаток растворяют эфиром. Эфирный раствор отмывают водой и энергично встряхивают, затем отделяют от воды и высушивают. Сухой остаток обрабатывают ацетоном, ожидают появления хлопьев фосфолипидов и центрифугируют. Сухой осадок фосфолипидов эмульгируют в 0,5 суспензии каолина в веронал-ацетатном буфере с рН 7,3-7,4. Полученную эмульсию подвергают ультразвуковому диспергированию и лиофильно высушивают. Пример конкретного выполнения способа. Плаценту отмывали от сгустков крови изотоническим физиологическим раствором. 100 г очищенной плаценты механически гомогенизировали и залили 500 мл 96 этиловым спиртом. Смесь разливали во флаконы, закрывали пробками и встряхивали на аппарате в течение 4 ч при комнатной температуре для экстракции фосфолипидов. Затем экстракт фильтровали, используя колбу Бунзена, фарфоровую воронку Бюхнера с бумажным фильтром и электровакуумный насос. Полученный спиртовой экстракт упаривали в колбе электровакуумного испарителя при 40 С и вакууме 1 атм. К сухому остатку фосфолипидов прибавляли 50 мл эфира, колбу плотно закрывали пробкой и оставляли при комнатной 2 5943 1 температуре до полного растворения осадка. Эфирный раствор фосфолипидов отмывали 50 мл дистиллированной воды, тщательно встряхивая. Отмытый эфирный раствор снимали грушей и испаряли под вакуумом. К отмытому остатку добавляли 150 мл ацетона, охлажденного до 2 С, и тщательно встряхивали в течение 30 мин до появления белых хлопьев. Смесь центрифугировали при 3000 об/мин. 30 мин, центрифугат удаляли грушей. Осадок - фосфолипиды - помещали в стеклянный стакан и эмульгировали 0,5 суспезией каолина в веронал-ацетатном буфере с рН 7,4 (5 г каолина на 1 л буфера). Полученную смесь подвергали ультразвуковому диспергированию в течение 3 мин Затем смесь разливали во флаконы по 1 мл, которые помещали в сушильный аппарат. Лиофильное высушивание осуществляли при температуре 40 С в течение 24 ч. Источники информации 1.957908, 1982. 2. Папаян Л.П. и др. Лабораторное дело. - 1980. -11. - С. 666-668. 3. Тарасова Л.Н. и др. Лабораторное дело. - 1990. -6. - С. 29-32. 4. Иванов Е.П. Руководство по гемостазиологии. - Мн., 1991. - С. 164. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3