Способ получения микрокапсул, содержащих клеточный материал

01 13/10, 61 9/50 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявители Государственное учреждение Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии, Государственное высшее учебное учреждение Белорусская медицинская академия последипломного образования, Витебский ордена Дружбы народов медицинский институт(73) Патентообладатели Государственное учреждение Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии, Государственное высшее учебное учреждение Белорусская медицинская академия последипломного образования,Витебский ордена Дружбы народов медицинский институт(57) Способ получения микрокапсул, содержащих клеточный материал, включающий суспендирование клеточного материала в растворе производного полисахарида, образование микрокапсул на разделе фаз жидкость-газ путем осаждения ионами металлов анионной формы производного полисахарида с последующей фиксацией полученной оболочки и выделение микрокапсул, отличающийся тем, что суспендирование осуществляют в растворе производного полисахарида с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества, и полученную суспензию барботируют через мелкопористый фильтр до получения гомогенной пены. Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения клеточных культур, покрытых оболочкой. Известны способы получения микрокапсул из альгиновой кислоты, например получения микрокапсул с клетками поджелудочной железы, заключающийся в осаждении альгината при помощи ионов кальция, с последующей перешивкой образовавшейся пленки поли(1-лизином) 1. Прототипом заявляемого предложения является технология изготовления микрокапсул с клеточным материалом 1, основанная на образовании оболочек альгината с внутренней полостью, содержащей -клетки поджелудочной кислоты, при осаждении альгината натрия ионами кальция, с последующей фиксацией оболочки при помощи катионного полимера (поли(1-лизин и отмывкой полученных микрокапсул. Однако приведенный способ требует применения дорогостоящих реактивов (поли(1-лизин, а также применения специальных инжекторных устройств для впрыскивания клеточного материала. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является процесс осаждения анионной формы производных полисахаридов при помощи ионо металлов и фиксация оболочки. Задачей заявляемого способа является упрощение процесса инкапсулирования клеточного материала. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ получения микрокапсул, содержащих клеточный материал, включающий суспендирование клеточного материала в растворе производного полисахарида, образование микрокапсул на разделе фаз жидкость-газ путем осаждения ионами металлов анионной формы производного полисахарида с последующей фиксацией полученной оболочки и выделения микрокапсул, при этом суспендирование осуществляют в растворе производного полисахарида с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества и полученную суспензию барботируют через мелкопористый фильтр до получения гомогенной пены. На фиг. 1 изображена схема этапов получения микрокапсул с инкапсулированным клеточным материалом. Пример 1. 0,1 мл 1 раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 ) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала (эритроциты) в изотоническом растворе помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр 4), в котором находится 1 мл 2 раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ-) в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или СО 2 (расход 20-40 см 3/мин) получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,5 раствор протамина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 раствора КМЦ- на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 С). При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100 мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 55-67 инкапсулируемого клеточного материала. Пример 2. 0,1 мл 1 раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 ) и 0,05 л взвеси инкапсулируемого материала (эритроциты) в изотоническом растворе помещают сосуд с мелкопористой пластиной(стеклянный фильтр 4), в котором находится 1 мл 2 раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы(КМЦ-) в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или 2 (расход 20 - 40 см 3/мин) получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 раствора железахлорида в изотоническом растворе и 0,1 раствор танина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 раствора КМЦ- на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 С). При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100 мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 55-67 инкапсулируемого клеточного материала. Пример 3. 0,1 мл 1 раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 ) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала в культуральной среде (культура -клеток поджелудочной железы) помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр 4), в котором находится 1 мл 2 раствора альгината 2 4713 1 натрия в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или СО 2 (расход 20 - 40 см 3/мин) получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,1 раствор протамина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 раствора альгината натрия на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 алюминия хлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 С). При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100 мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 41-52 инкапсулируемого клеточного материала. Пример 4. 0,1 мл 1 раствора твина-80 на изотоническом растворе натрия хлорида (0,9 ) и 0,05 мл взвеси инкапсулируемого материала в изотоническом растворе помещают в сосуд с мелкопористой пластиной (стеклянный фильтр 4), в котором находится 1 мл 2 раствора альгината натрия в изотоническом растворе. С помощью поддува воздуха или СО 2 (расход 20 - 40 см 3/мин) получают пену, которую затем переносят в делительную воронку емкостью 30 мл, в которой находится 15 мл 0,5 раствора алюминия хлорида в изотоническом растворе и 0,1 раствор танина. Смесь энергично встряхивают в течение 3 мин. Всплывшие частицы отделяют и помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 5 мл 0,1 раствора альгината натрия на изотоническом растворе и 5 мл 0,1 железахлорида на изотоническом растворе. Микрокапсулы выдерживают в течение суток на холоду (при 0-4 С). При микроскопическом фазовоконтрастном исследовании видны округлые частицы размером от 5 до 100 мкм. Проведенные эксперименты показывают, что в микрокапсулы включается 38-56 инкапсулируемого клеточного материала. Источники информации 1.,.,,.// . - .55. -2. - . 350-354. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.