Способ предварительной диагностики рака молочной железы и наличия гематогенных метастазов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И НАЛИЧИЯ ГЕМАТОГЕННЫХ МЕТАСТАЗОВ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Гидранович Антон Викторович Коневалова Наталья Юрьевна Луд Николай Григорьевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Способ предварительной диагностики рака молочной железы и наличия гематогенных метастазов, заключающийся в том, что в сыворотке крови определяют активность аутокринного фактора подвижности эпителиальных клеток и заключают, что вероятность рака молочной железы низкая при значении активности аутокринного фактора подвижности эпителиальных клеток менее 155 нмольс-1 л-1, или вероятность рака молочной железы умеренная и вероятность наличия гематогенных метастазов низкая при значении активности аутокринного фактора подвижности эпителиальных клеток 155-315 нмольс-1 л-1, или вероятность рака молочной железы и наличия гематогенных метастазов высокая при значении активности аутокринного фактора подвижности эпителиальных клеток более 315 нмольс-1 л-1. Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и применяется для проведения уточняющей диагностики распространенности рака молочной железы. Известен способ определения наличия и распространенности рака молочной железы с использованием ракового антигена 15-3 (СА 15-3). Сущность способа заключается в определении данного показателя в сыворотке крови в качестве маркера. Преимуществом способа является минимальная инвазивность, быстрота, возможность одновременного обследования большой когорты женщин. Недостатками способа являются низкая специфичность, которая позволяет использовать его очень ограниченно для диагностики рака молочной железы, и дороговизна определения. Повышение уровня СА 15-3 обнаруживается у 10 пациентов с 1 стадией рака молочной железы, 20- со второй стадией, 40- с третьей стадией и 75 больных четвертой стадией рака молочной железы, кроме того, отмечается недостаточная специфичность данного показателя, так как повышенный уровень СА 15-3 определяется у 5 здоровых женщин, больных доброкачественными заболеваниями (особенно заболеваниями печени) и при метастатических опухолях других локализаций 1-4. 18314 1 2014.06.30 Прототипом является способ диагностики распространенности рака молочной железы на основе определения в сыворотке крови тартратрезистентной кислой фосфатазы 5. Сущность способа заключается в иммуноферментном определении тартратрезистентной кислой фосфатазы в сыворотке крови для определения костного метастазирования рака молочной железы. Недостатком метода является возможность диагностики метастазов только в кости,метастазы в другие органы не определяются, способ не указывает на наличие неметастатических форм рака. Задачей изобретения является разработка способа диагностики рака молочной железы,позволяющего выделить группы пациенток с высокой вероятностью наличия рака молочной железы и группы пациенток с высокой вероятностью гематогенного метастазирования. Реализация данной задачи достигается определением активности аутокринного фактора подвижности эпителиальных клетокв сыворотке крови и последующем выделением групп пациентов с высокой вероятностью наличия рака молочной железы и с высокой вероятностью наличия гематогенного метастатического процесса. Способ осуществляется следующим образом. Производят определение активности аутокринного фактора подвижностив сыворотке крови, вызывающего увеличение миграции раковых клеток, по методуив модификации 6. Для этого 0,2 мл сыворотки инкубируют с субстратом раствора глюкозо-6-фосфат(Г-6-Ф). Полученный в результате реакции фруктозо-6-фосфат определяют спектрофотометрически при помощи спектрофотометра СФ-2000. Приготовление инкубационной смеси. Контрольные образцы. В 3 центрифужные пробирки вносят 2 мл 4 мМ раствора Г-6-Ф,1 мл 20 раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) (прогретого в термостате 5 мин),0,2 мл сыворотки, встряхивают. Исследуемые образцы (на 20 проб). В 20 центрифужных пробирок вносят 2 мл 4 мМ раствора Г-6-Ф (прогретого в термостате 5 мин),0,2 мл исследуемой сыворотки, встряхивают. Инкубируют в термостате 37 С 30 мин, затем в исследуемые пробирки добавляют 1 мл 20 ТХУ, встряхивают. Центрифугируют при 3000 об/мин 15 мин. В пробирки отбирают 1,0 мл центрифугата, добавляют 1,5 мл 0,05 раствора резорцина в этаноле,1,5 мл раствора железо-аммонийных квасцов в концентрированной соляной кислоте. Встряхивают. Помещают в водяную баню 803 С на 40 мин. По истечении времени экспозиции охлаждают пробирки под струей воды. Фотометрируют на СФ-2000 при длине волны 440 нм в кювете 10 мм. Активность рассчитывают по формуле.0,341510001000 Активность 944,444 нмольс 1 л 1 0,21800 где- разность экстинкции опытного и контрольного образцов, - коэффициент экстинкции (равен 0,3415), - объем сыворотки, - время инкубации. 2 18314 1 2014.06.30 При показателе активностиниже 155 нмольс-1 л-1 пациентку относят к группе низкой вероятности наличия рака молочной железы. При активностиот 155 до 315 нмольс-1 л-1 пацентку относят к группе умеренной вероятности наличия рака молочной железы, если у пациентки на момент обследования морфологически подтвержден диагноз рака молочной железы, то при данном уровне активностипациентку относят к группе низкой вероятности наличия гематогенного метастатического процесса. При активностивыше 315 нмольс-1 л-1 высока вероятность наличия у пациентки метастатического рака молочной железы. Положительный эффект способа в том, что он дает возможность выделить группы пациенток с повышенной активностьюв сыворотке крови для проведения дообследования. Степень повышения активностиуказывает как на вероятность наличия рака молочной железы, так и на вероятность наличия гематогенных метастазов. Простота и дешевизна способа позволяет использовать его при массовом обследовании женщин. Эффективность способа подтверждается клиническими примерами. С помощью предложенного способа определена активность аутокринного фактора подвижности эпителиальных клетокв сыворотке крови 96 больных раком молочной железы с различной степенью распространенности процесса 1 стадией рака молочной железы (34), 2 стадией рака молочной железы (30), 3 стадией рака молочной железы(24) и 4 стадией рака молочной железы (8), а также в крови 16 здоровых женщин. Чувствительность способа для диагностики рака молочной железы при помощи определения уровнясоставила 85,37 , специфичность - 93,75 . Источники информации 1. СА 15-3//. - 1999. - . 36. - . 579-586. 2..,,//. - 2000. - . 26. - . 91-102. 3..,.-//. - 2000. - . 21. - . 235-248. 4..17, 1996// . . . 1996. - . 14. - . 2843-2477. 5. Любимова Н.В. и др. Тартратрезистентная кислая фосфатаза - биохимический критерий костного метастазирования // Сибирский онкологический журнал. - 2004. -4 (12). С. 22-25. 6. Клиническая ферментология / Под ред. проф. Э. Щеклика. - Варшава. Польское государственное медицинское издательство, 1966. - 491 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3