Способ определения чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛЕТОК НЕЙРОБЛАСТОМЫ ЧЕЛОВЕКА К ХИМИОПРЕПАРАТУ ИЛИ КОМБИНАЦИИ ХИМИОПРЕПАРАТОВ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Чернов Александр Николаевич Талабаев Михаил Владимирович Калюнов Владимир Николаевич Григорьев Дмитрий Григорьевич Кульчицкий Владимир Адамович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(57) Способ определения чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов, при котором осуществляют забор биоптата, затем выделяют из биоптата клетки нейробластомы, выращивают их в питательной среде в течение 2 суток при температуре 37 С, влажности воздуха 95 и концентрации 2 5 ,снимают клетки 0,25 -ным раствором трипсина в версене, переносят в чашку Петри и выращивают 1 сутки в среде ДМЕМ с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки до 10 и сульфата гентамицина до 10-4 г/л, после чего в чашку Петри с образцом клеток добавляют тестируемый химиопрепарат или комбинацию химиопрепаратов в концентрации,используемой для лечения в клинике, через 1 сутки удаляют среду, снимают клетки 0,25 -ным раствором трипсина в версене, окрашивают 0,02 -ным раствором трипанового синего и определяют в процентах количество погибших клеток, по которому судят о чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов. Изобретение относится к медицине, к разделу клинической и экспериментальной онкологии. Для лечения многих опухолей, в том числе и нейробластомы, используют метод химиотерапии 1, 2, 3. В основе хемотерапевтического подхода к лечению нейробластомы лежит ряд стандартных протоколов, в которых пациентам циклично вводятся различные комбинации цитостатических препаратов циклофосфамид 1-3, винкристин 2, топотекан 2, 3, доксорубицин 1 и др. Эффективность лечения пациентов с использованием таких режимов химиотерапии зависит от многих факторов, в первую очередь от возраста 17752 1 2013.12.30 больного, стадии заболевания и индивидуальной чувствительности организма к указанным медикаментам. Однако если первых два признака онкологи учитывают при выборе режимов и тактики лечения больного, то специфическая восприимчивость клеток нейробластомы конкретного пациента к воздействию цитостатических средств не может быть решена в клинике в силу отсутствия технологии и соответствующей организационной структуры. Заявителю неизвестен способ определения чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов, в силу чего не может быть указан ближайший аналог заявляемого изобретения. Задачей заявляемого изобретения является создание способа определения чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов. Поставленная задача решается следующим образом. Предложен способ определения чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов, при котором осуществляют забор биоптата, затем выделяют из биоптата клетки нейробластомы, выращивают их в питательной среде в течение 2 суток при температуре 37 С, влажности воздуха 95 и концентрации 2 5 , снимают клетки 0,25 ным раствором трипсина в версене, переносят в чашку Петри и выращивают 1 сутки в среде ДМЕМ с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки до 10 и сульфата гентамицина до 10-4 г/л, после чего в чашку Петри с образцами клеток добавляют тестируемый химиопрепарат или комбинацию химиопрепаратов в концентрации, используемой для лечения в клинике, через 1 сутки удаляют среду, снимают клетки 0,25 -ным раствором трипсина в версене, окрашивают 0,02 -ным раствором трипанового синего и определяют в процентах количество погибших клеток, по которому судят о чувствительности клеток нейробластомы человека к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов. Данные проведенных заявителем экспериментов показывают, что при таком способе предварительной оценки на культуре клеток действия указанных химиопрепаратов определяются наибольшая чувствительность и специфика действия цитостатиков в сравнении друг с другом и контролем, что может быть использовано в клинике. Заявителем были применены известные, зарегистрированные МЗ РБ химиотерапевтические препараты. На фигуре представлено А. Контроль. Клетки нейробластомы, полученные из биоптата пациента на 2 сутки культивирования в среде без химиопрепаратов. Увеличение 312,5. Б. Опыт. Клетки нейробластомы, полученные из биоптата пациента на 2 сутки культивирования в среде при действии карбоплатина (4 мкг/мл). Увеличение 312,5. В. Опыт. Клетки нейробластомы, полученные из биоптата пациента на 2 сутки культивирования в среде при действии комбинации карбоплатина (4 мкг/мл) и этопозида(1 мкг/мл). Пример. Выделяют из биоптатов по стандартной методике клетки нейробластомы 4, выращивают их в питательной среде в течение 2 суток при температуре 37 С, влажности воздуха 95 и концентрации СО 2 5 , снимают клетки 0,25 -ным раствором трипсина в версене, переносят в чашку Петри и выращивают 1 сутки в среде ДМЕМ с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки до 10 и сульфата гентамицина до 10-4 г/л, после чего в чашку Петри с образцами клеток добавляют тестируемый химиопрепарат или комбинацию химиопрепаратов в концентрации, используемой для лечения в клинике, через 1 сутки удаляют среду, снимают клетки 0,25 -ным раствором трипсина в версене,окрашивают 0,02 -ным раствором трипанового синего и определяют в процентах количество погибших клеток (для сравнения на фигуре А - контрольная культура без действия химиопрепарата, Б - культуранейробластомы при действии одного из препаратов - карбоплатина, В - культура нейробластомы при действии комбинации препаратов - карбоплатина и этопозида), по которому судят о чувствительности клеток нейробластомы человека 2 17752 1 2013.12.30 к химиопрепарату или комбинации химиопрепаратов. Полученные в процессе проведенного исследования данные являются основой для разработки метода индивидуального подбора терапевтических средств в лечении нейробластомы человека, коррекции режимов, дозировок и в целом тактики терапии этого вида новообразований. Таким образом, достигнутый технический результат заявляемого способа заключается в следующем. Способ позволяет определить индивидуальную чувствительность клеток к цитостатикам, установить специфику их действия, выявить самый эффективный препарат или их комбинацию и его концентрацию для данной опухоли. Источники информации 1.,,,.,.,,, .,.,,.//.. - 2010. - . 55. - о. 4. - . 629- 638. 2.,.,.,.,,// . - 2010. - . 16. - о. 12. - . 3054-3060. 3.,,.,.,,,,,.//. . . - 2010. - . 28. - о. 24. - . 3808-3815. 4. Пинаев Г.П. и др. Методы культивирования клеток Сб. научных трудов / Под ред. Г.П. Пинаева, Богдановой. - СПб Наука, 2008. - 313 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3