Способ криоконсервации аллографта клапана сердца

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ АЛЛОГРАФТА КЛАПАНА СЕРДЦА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр Кардиология Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Дроздовский Константин Викентьевич Дедович Виталий Владимирович Островский Юрий Петрович(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр Кардиология Министерства здравоохранения Республики Беларусь(57) Способ криоконсервации аллографта клапана сердца, заключающийся в том, что выделенный аллографт промывают в питательной среде 1640, помещают в стерильный контейнер, содержащий питательную среду 1640, 1 г/л цефазолина, 200 мг/л метронидазола и 40 мг/л гентамицина, выдерживают при 4 С в течение 24 ч, повторно промывают аллографт в стерильной питательной среде 1640, после чего его помещают в контейнер со стерильным, охлажденным до 5 С 10 -ным раствором диметилсульфоксида в питательной среде 1640 и замораживают по следующей схеме от 5 до -50 С температуру снижают со скоростью 0,7 С/мин, от -50 до -80 С - со скоростью 1,4 С/мин. Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии сердца и сосудов, и может быть использовано при приготовлении биопротезов, в частности аллографтов, для протезирования клапанов сердца. Взаимосвязанные проблемы тромбоэмболии и антикоагуляционных осложнений являются основополагающим фактором в развитии поздних осложнений при лечении клапанной патологии как у взрослых, так и у детей. После сердечной недостаточности тромбоэмболия - ведущая причина смерти при аортальном протезировании. Частота антикоагуляционных осложнений составляет около 5 в год. Клапанное протезирование представляет значительные сложности. Механические клапаны сердца ассоциируются с антикоагуляционными осложнениями и гемодинамическими дисфункциями. Попытки применения ксенографтов остаются ограниченными из-за большой частоты ранней послеоперационной недостаточности и последующей кальцификации. Помимо этого, применение биопротезов сопряжено с необходимостью их консервации для хранения. Известны различные методы подготовки и консервации биоклапанов 1. 14577 1 2011.06.30 Однако существующие технологии обработки биопротезов клапанов сердца, не решают проблем ингибирования кальцификации и тромбообразования, а также отличаются крайней сложностью и многостадийностью. Аллографты имеют некоторые преимущества для решения проблемы заболеваний имплантированных клапанов лучшие гидравлические характеристики снижение тромбоэмболических осложнений резистентность к эндокардиту приемлемый срок службы. Применение аллографтов в кардиохирургии во многом обязано разработке методов криоконсервации 2. Известные методы криоконсервации на данном этапе уже являются рутинными, при этом не лишены недостатков. Универсальность методики, без спецификации по типу консервируемых биотканей, не дает возможности повысить эффективность использования криоконсервантов с учетом их функциональных и гистохимических особенностей. Разработанная нами методика направлена на усовершенствование способа криоконсервации аллографта клапана сердца с учетом улучшения приживаемости клапана и его функционирования, а именно физических и гистохимических характеристик аллографта после его имплантации. Указанный способ осуществляется следующим образом. Аллографт клапана сердца промывают в питательной среде 1640 и помещают в стерильный контейнер, содержащий среду 1640, цефазолин в концентрации 1 г/л,метронидазол - 200 мг/л, гентамицин - 40 мг/л. Контейнер хранится в течение 24 ч при температуре 4 С, после чего аллографт повторно промывают в стерильной среде 1640. Аллографт помещают в контейнер со стерильным, охлажденным до 5 С 10 -м раствором диметилсульфоксида в среде 1640. Контейнер с аллографтом подвергают криоконсервации по следующей программе 1) от 5 до -50 С температуру снижают со скоростью 0,7 С в минуту 2) при температуре -50 С аллографт выдерживают 5 мин 3) от -50 до -80 С температуру снижают со скоростью 1,4 С в минуту. После чего аллографт помещают на хранение в банк аллографтов на расстояние 2-7 см выше уровня жидкого азота. Пример осуществления способа. Забор аллографтов клапанов сердца проводится у трупного донора. При заборе аллографтов клапанов сердца время ишемии (время от момента смерти донора до момента забора аллографтов клапанов сердца) не допускается более 24-48 ч в зависимости от условий хранения трупного донора. Забор аллографтов клапанов сердца, который проводят в стерильных условиях, включает забор сердца с аортой до перешейка, легочной артерией до корней легких, нижней и верхней полой венами, легочными венами. Легочную артерию забирают с клапаном, участком миокарда правого желудочка и межжелудочковой перегородки шириной до 20 мм, ветвями легочной артерии до корней легких. Аорту забирают до перешейка с устьями брахиоцефальных сосудов, устьями коронарных артерий, с клапаном, с передней створкой митрального клапана (если не производится забор цельного митрального клапана), участком миокарда левого желудочка и межжелудочковой перегородки шириной до 20 мм. Выделенный аллографт клапана сердца промывают в питательной среде 1640,помещают в стерильный контейнер, содержащий среду 1640, 1 г/л цефазолина,200 мг/л метронидазола и 40 мг/л гентамицина, выдерживают при 4 С в течение 24 ч,повторно промывают аллографт в стерильной среде 1640, после чего аллографт помещают в контейнер со стерильным, охлажденным до 5 С 10 -м раствором диметилсульфоксида в среде 1640 и замораживают по следующей схеме от 5 до -50 С 2 14577 1 2011.06.30 температуру снижают со скоростью 0,7 С/мин выдерживают 5 мин от -50 до -80 С температуру снижают со скоростью 1,4 С/мин. После чего аллографт помещают на хранение в банк аллографтов на расстояние 2-7 см выше уровня жидкого азота. Перед использованием аллографт размораживают следующим образом контейнер с аллографтом помещают на водяную баню при температуре 35-40 С на 710 мин, затем в стерильных условиях извлекают аллографт из контейнера и поочередно помещают в следующие сосуды 1 сосуд - 100 мл 5 раствора диметилсульфоксида в среде 1640, температура 28 С, экспозиция 5 мин 2 сосуд - 100 мл 2,5 раствора диметилсульфоксида в среде 1640, температура 2-8 С, экспозиция 5 мин 3 сосуд - 100 мл среды 1640, температура 2-8 С, экспозиция 5 мин 4 сосуд - 100 мл среды 1640, содержащей антибиотики 1 г/л цефазолина,200 мг/л метронидазола и 40 мг/л гентамицина, в которой аллографт хранится при температуре 2-8 С до момента его имплантации. Указанным образом приготовленные аллографты были имплантированы пациентам на базе РНПЦ Кардиология в период 2007-2010 гг. Изучение криосохраненных аллографтов показало сохранность ультраструктуры аллографтов после различных сроков криохранения. При анализе отдаленных результатов имплантациинаблюдались процессы новообразования капилляров и мелких сосудов в средней оболочке аллографта. Компенсаторные изменения миоцитов средней оболочки и субэндотелиального слоя поддерживают мышечно-эластический каркас стенки аллографта, что обусловливает хорошую функцию стенки аллографта и препятствует аневризмообразованию. При имплантации криосохраненных аллографтов при коррекции врожденных пороков сердца наблюдались хорошая их функция, удобство имплантации, отсутствовала необходимость в длительной антикоагулянтной терапии. Источники информации 1.2008767 С 1, 1994. 2.382745 В 1, 1994. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3