Способ оценки интегральной токсичности твердого или жидкого объекта окружающей среды

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОЦЕНКИ ИНТЕГРАЛЬНОЙ ТОКСИЧНОСТИ ТВЕРДОГО ИЛИ ЖИДКОГО ОБЪЕКТА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Дудчик Наталья Владимировна Соколов Сергей Михайлович Мельникова Людмила Александровна Котеленец Антонина Ивановна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) ХОЛОДЕНКО В.П. и др. Российский химический журнал. - 2001. - Т. .5-6. - С. 135-141. ДУДЧИК Н.В. и др. Проблемы общественного здоровья и здравоохранения Республики Беларусь. Материалы Республиканской научно-практической конференции. - Минск, 2005 - С. 330-332. БУДКИНА Е.А. и др. Проблемы общественного здоровья и здравоохранения Республики Беларусь. Материалы Республиканской научно-практической конференции. - Минск, 2005. - С. 332-333. Альтернативные методы исследований(экспресс-методы) для токсикологогигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей среды. М., 1999. - С. 7.(57) Способ оценки интегральной токсичности твердого или жидкого объекта окружающей среды, отличающийся тем, что культивируют тест-штаммБИМ В-6 в жидкой питательной среде, содержащей образец исследуемого объекта, и в жидкой питательной среде, не содержащей образец исследуемого объекта, с регистрацией импедиметрически времени детекции роста тест-штамма, рассчитывают показатель интегральной токсичности объектапо формуле 2,1 где 1 - время детекции роста тест-штамма в среде, не содержащей образец исследуемого объекта, час 2 - время детекции роста тест-штамма в среде, содержащей образец исследуемого объекта, час и при значении , равном 1,0, определяют отсутствие интегральной токсичности у объекта,при значении , равном от 1,1 до 1,4, - незначительную степень интегральной токсичности объекта, а при значении , равном 1,5 или более, - значительную степень интегральной токсичности объекта окружающей среды. Изобретение относится к разделу токсикологии и санитарной микробиологии. Известен способ оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды (ростовой тест), заключающийся в том, что измеряют оптическую плотность клеточной сус 13064 1 2010.04.30 пензии тест-штамма микроорганизма через сутки после введения в ростовую среду анализируемого образца (контроль) и клеточной суспензии тест-штамма микроорганизма в ростовой среде без введения анализируемого образца (опыт), сравнивают полученные данные и оценивают токсическое действие анализируемого образца 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Однако оптический принцип детекции роста тест-штаммов микроорганизмов, используемый в способепрототипе, затрудняет анализ непрозрачных, пигментированных, негомогенных образцов,что часто приводит к невозможности провести анализ объектов окружающей среды. Кроме того, способ-прототип обладает низкой чувствительностью, что приводит к необходимости длительного, до 24 ч, времени проведения испытаний. Отсутствуют также количественные характеристики оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды. Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является то, что осуществляют параллельное внесение образцов в питательную среду, содержащую ранее определенную концентрацию тест-культуры, и проводят их совместное культивирование с последующей обработкой полученных данных. Задачей заявленного изобретения является разработка экспресс-способа оценки интегральной токсичности объектов окружающей среды, позволяющего тестировать непрозрачные, пигментированные, негомогенные образцы, увеличение чувствительности способапрототипа. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ оценки интегральной токсичности твердого или жидкого объекта окружающей среды, при этом культивируют тест-штаммБИМ В-6 в жидкой питательной среде, содержащей образец исследуемого объекта, и в жидкой питательной среде, не содержащей образец исследуемого объекта, с регистрацией импедиметрически времени детекции роста тест-штамма, рассчитывают показатель интегральной токсичности объектапо формуле 2,1 где 1 - время детекции роста тест-штамма в среде, не содержащей образец исследуемого объекта, час 2 - время детекции роста тест-штамма в среде, содержащей образец исследуемого объекта, час и при значении Т, равном 1,0, определяют отсутствие интегральной токсичности у объекта,при значении Т, равном от 1,1 до 1,4, - незначительную степень интегральной токсичности объекта, а при значении , равном 1,5 и более, - значительную степень интегральной токсичности объекта окружающей среды. Такой прием позволяет повысить чувствительность способа за счет того, что осуществляется импедиметрическая регистрация активной проводимости питательной среды, а это позволяет провести детекцию роста тест-штамма в течение 5-10 ч и определить показатель времени детекции роста тест-штамма в питательной среде, содержащей (опыт), и не содержащей (контроль) испытуемого образца, а также расширить ассортимент исследуемых образцов, включая темноокрашенные, негомогенные, непрозрачные образцы. Пример выполнения. Требуется определить интегральную токсичность трех образцов объектов окружающей среды 1 образец - почва 2 образец - сточные воды 3 образец - активный ил очистных сооружений. В качестве питательной среды при проведении исследования используют среду следующего состава (на 1000,0 мл дистиллированной воды) 1 Пептон 7,5 г 2 Дрожжевой экстракт 5,0 г 2 13064 1 2010.04.30 3 Глюкоза 5,0 г 45,0 г рН 7,2-7,4 Стерилизация 121 С в течение 30 мин. В качестве тест-штамма используютБИМ В-6 (АТСС 7562) из Национальной коллекции непатогенных микроорганизмов (научая коллекция типовых и промышленно-ценных микроорганизмов) Института микробиологии НАН Беларуси. Для приготовления рабочей культурыБИМ В-6 (АТСС 7562) тест-штамм отсеивают на мясопептонный бульон и инкубируют в термостате при (282) С в течение 48 ч. Содержание клеток тест-штамма в инокуляте доводят до 103 КОЕ/мл, что является оптимальным для данного исследования. Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на питательные агаризованные среды. Приготовленные среды инокулируют тест-штаммомБИМ В-6(АТСС 7562), разливают в ячейки анализатора, вносят исследуемые образцы или вытяжки из них и инкубируют в термоинкубаторе при 28 С в течение 10-11 ч. Получены следующие результаты. Время детекции роста тест-культурысоставляет Для контроля (питательная среда, содержащая тест-штаммБИМ В-6 (АТСС 7562) - 5,2 ч Для опыта 1 (питательная среда, содержащая тест-штаммБИМ В-6 (АТСС 7562) и образец 1 (почва) - 10,4 ч 10,42,0 - интегральная токсичность образца 1 значительная. 5,2 Для опыта 2 (питательная среда, содержащая тест-штаммБИМ В-6 (АТСС 7562) и образец 2 (сточные воды) - 5,2 ч 5,21,0 - образец 2 не обладает токсичностью по отношению к данному тест 5,2 штамму. Для опыта 3 (питательная среда, содержащая тест-штаммБИМ В-6 (АТСС 7562) и образец 3 (активный ил) - 6,2 ч. 6,21,2 - интегральная токсичность образца 3 незначительная. 5,2 Параллельно было проведено определение интегральной токсичности трех образцов объектов окружающей среды по способу-прототипу. Получены следующие результаты. Для определения интегральной токсичности образца 2 потребовалось 24 ч. Интегральная токсичность образцов 1 и 3 не могла быть определена с помощью способапрототипа, т.к. образцы представляли собой темноокрашенную негомогенную смесь. Таким образом, достигаемый технический результат заявленного способа заключается в точной количественной оценке интегральной токсичности прозрачных, непрозрачных,пигментированных, непигментированных, гомогенных, негомогенных образцов, что дает возможность определить критерии для их количественной оценки. Способ позволяет сократить время определения с 24 ч до 5,2-10,4 ч, что дает основание рекомендовать его в качестве экспресс-метода. Источники информации 1. Холоденко В.П. и др. Российский химический журнал, 2001. - Т. . -5-6. С. 135-141. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3