Способ определения степени антимикробной активности стоматологического материала

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Соколов Сергей Михайлович Дудчик Наталья Владимировна Мельникова Людмила Александровна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56)2140190 1, 1999. Дудчик Н.В. и др. Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии. Материалы международной конференции. Мн., 2004. - С.199-201.2003000224 , 2003.(57) Способ определения степени антимикробной активности стоматологического материала, отличающийся тем, что осуществляют детекцию времени роста тест-штамма микроорганизма при 37 С в питательной среде, не содержащей стоматологический материал, и в питательной среде, содержащей 0,081 г/мл стоматологического материала,после чего рассчитывают показатель степени ингибированияпо формуле 2, 1 где 1 - значение времени роста тест-штамма микроорганизма в среде, не содержащей стоматологический материал,2 - значение времени роста тест-штамма микроорганизма в среде, содержащей стоматологический материал,и при значении , равном 1, судят об отсутствии антимикробной активности у стоматологического материала, при значении , равном 1,1-1,3, - о незначительной степени антимикробной активности стоматологического материала, а при значенииболее 1,4 - о значительной степени антимикробной активности стоматологического материала. Изобретение относится к разделу санитарной микробиологии. Известен способ определения антимикробных свойств стоматологических материалов, заключающийся в том, что на поверхность засеянного тест-штаммами микроорганизмов агара наносят испытуемые стоматологические материалы, посевы инкубируют в термостате при 37 С в течение 48 ч и оценивают антимикробную активность путем измерения диаметра зоны подавления роста тест-штаммов 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Однако способ-прототип обладает следующими недостатками низкой чувствительностью, в связи с чем требуется длительное (до 48 ч) время проведения испытаний, а также отсутствием количественных характеристик степени ингибирования. 10224 1 2008.02.28 Задачей заявленного изобретения является повышение чувствительности способа. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения антимикробной активности стоматологического материала, когда осуществляют детекцию времени роста тест-штамма микроорганизма при 37 С в питательной среде, не содержащей стоматологический материал, и в питательной среде, содержащей 0,081 г/мл стоматологического материала, после чего рассчитывают показатель степени ингибированияпо формуле 2, 1 где 1 - значение времени роста тест-штамма микроорганизма в среде, не содержащей стоматологический материал,2 - значение времени роста тест-штамма микроорганизма в среде, содержащей стоматологический материал,и при значении , равном 1, судят об отсутствии антимикробной активности у стоматологического материала, при значении , равном 1,1-1,3, - о незначительной степени антимикробной активности стоматологического материала, а при значенииболее 1,4 - о значительной степени антимикробной активности стоматологического материала. Такой прием позволяет повысить чувствительность способа за счет того, что осуществляется импедиметрическая регистрация активной проводимости питательной среды, а это позволяет провести детекцию роста тест-штамма в течение 1,3-5,3 ч и определить показатель времени детекции роста тест-штамма в питательной среде, содержащей (опыт) и не содержащей (контроль) испытуемый стоматологический материал. Пример выполнения. Требуется определить степень антимикробной активности трех стоматологических материалов. В качестве питательной среды используют готовые среды для микробиологических исследований мясопептонный бульон и мясопептонный агар производства Диалек(г. Минск). В качестве тест-штамма используют 20627 (АТСС 35037). Используемый штамм является типичным представителем микрофлоры ротовой полости и проявляет типовые культурально-морфологические и биохимические свойства бактерий рода . Для приготовления рабочих культур .20627 (АТСС 35037) тест-штамм отсеивают на мясопептонный бульон и инкубируют в термостате при (352) С в течение 18-24 ч. Содержание клеток тест-штамма в инокуляте доводят до 103 КОЕ/мл, что является наиболее оптимальным для проведения исследования. Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на питательные агаризованные среды. Стоматологические материалы готовят согласно рекомендациям производителя и вносят в питательные среды. Рабочая концентрация стоматологических материалов составляет 0,081 г/мл. Приготовленные среды инокулируют тест-штаммом .20627 (АТСС 35037), разливают в ячейки модуля бактометра по 1,5 мл и инкубируют в термоинкубаторе бактометра при 35 С в течение 6 ч. Получены следующие результаты. Время детекции роста тест-культуры составляет для контроля (питательная среда, содержащая тест-штамм .20627 (АТСС 35037 - 1,3 ч для опыта 1 (питательная среда, содержащая тест-штамм .20627 (АТСС 35037) и исследуемый стоматологический материал 1) - 5,3 ч 10224 1 2008.02.28 5,34,1 - антимикробная активность значительная. 1,3 Для опыта 2 (питательная среда, содержащая тест-штамм .20627 (АТСС 35037) и исследуемый стоматологический материал 2) - 1,3 ч 1,3 11,0 - антимикробная активность отсутствует. 1,3 Для опыта 3 (питательная среда, содержащая тест-штамм .20627 (АТСС 35037) и исследуемый стоматологический материал 3) - 1,6 ч. 1,6 11,2 - антимикробная активность незначительная. 1,3 Параллельно было проведено определение антимикробных свойств стоматологических материалов по способу-прототипу. Получены следующие результаты. Для определения антимикробных свойств потребовалось 48 ч. Кроме этого штамма, в заявленном способе могут быть использованы в качестве тестштаммов микроорганизмы, типичные для микрофлоры полости рта, в частности,,,,,,и другие бактерии, дрожжи и актиномицеты. Таким образом, результатом заявленного способа является возможность определения количественной характеристики антимикробной активности стоматологического материала. Кроме этого, способ позволяет сократить время определения антимикробной активности с 48 ч до 1,3-5,3 ч. 1 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3