Способ получения эллаговой кислоты

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭЛЛАГОВОЙ КИСЛОТЫ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Мушкина Ольга Владимировна Гурина Наталья Сергеевна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Способ получения эллаговой кислоты, включающий ее спиртовую экстракцию из растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют листья ольхи черной, спиртовую экстракцию проводят метанолом 3 раза, метанольные извлечения фильтруют, объединяют и упаривают, полученный сухой остаток растворяют в воде, кипятят, отстаивают и фильтруют, фильтрат последовательно обрабатывают хлороформом и диэтиловым эфиром, эфирную фракцию отстаивают сутки и отделяют выпавший осадок эллаговой кислоты. Изобретение относится к области медицины и фармации и касается нового способа получения субстанции - эллаговой кислоты. Известен способ получения 3,3,4-три-о-метил-эллаговой кислоты, имеющей кровоостанавливающую активность и способствующей развитию красных кровяных телец, японские исследователи предлагали несколько способов. Во-первых, возможна экстракция из корней ряда растений, содержащих эллаговую кислоту (ЭК) и ее производные, водой и метиловым спиртом с дальнейшей очисткой и выделением субстанции методом колоночной хроматографии на силикагеле. Во-вторых, вышеупомянутое соединение получают из 4,4-ди-о-ацил-3,3-ди-о-метилЭК через стадии ацетильных производных с выходом 89 . Также разрабатывались способы выделения ЭК в индивидуальном состоянии. Известен способ получения ЭК путем обработки древесных стружек сульфитным методом 1. Практически все вышеперечисленные методы основаны на химических реакциях, которые требуют наличия специального оборудования. Прототипом предлагаемого изобретения является способ получения эллаговой кислоты путем латентного гидролиза эллаготаннинов в определенных условиях 2. Сущность способа заключается в том, что из лекарственного растительного сырья получают спиртовой экстракт 80 С спиртом, который затем подвергают разделению путем 12564 1 2009.10.30 колоночной хроматографии до получения эллаготанинов, которые затем подвергают латентному гидролизу. Недостатками прототипа являются сложность выполнения, необходимость большого количества дорогостоящих реактивов и специальных условий для получения субстанции. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения эллаговой кислоты более простым способом с использованием нового широко распространенного источника данной субстанции - листьев ольхи. Реализация данной задачи достигается за счет того, что эллаговая кислота выделятся в виде осадка из эфирной фракции после обработки отфильтрованного водного раствора,полученного при растворении упаренного сухого, объединенного после 3-х кратной экстракции метанольного извлечения из листьев ольхи черной, хлороформом и диэтиловым эфиром. Предлагаемый способ заключается в следующем. Получают метанольное извлечение из листьев ольхи. Для этого 100 г сырья экстрагируют 500 мл метанола в течение 2 часов,нагревают на водяной бане при температуре 80 С трижды. Затем полученные извлечения процеживают через вату, объединяют и упаривают досуха под ваакумом. К полученному сухому остатку приливают 100 мл воды и нагревают до 100 С в течение 1 мин, и оставляют в холодильнике на 12 часов. Затем осадок отфильтровывают, а водный остаток последовательно обрабатывают хлороформом и диэтиловым эфиром. Эфирную фракцию оставляют на сутки, по истечении времени образовавшийся осадок отделяют от растворителя и растворяют в метаноле. Полученный осадок очищают, используя колоночную хроматографию с применением в качестве неподвижгой фазы -- 20, в качестве подвижной фазы - метанол. Полученные фракции контролируют методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), в качестве неподвижной фазы используют силикагель, подвижной фазы - 15 уксусную кислоту. В ультрафиолетовом (УФ) свете эллаговая кислота имеет сине-фиолетовую окраску, после обработки парами аммиака приобретает желтую окраску. Подлинность полученной субстанции была установлена с помощью инфракрасной (ИК) спектроскопии и спектрофотометрии в сравнении со стандартом эллаговой кислоты. Положительный эффект изобретения заключается в том, что способ прост в воспроизведении, не требует дорогостоящих реактивов и специального оборудования, в качестве источника субстанции выбран широко распространенный объект лекарственного растительного сырья (листья ольхи черной), который не требует специальных условий культивирования. Эллаговая кислота является высокоактивным кровоостанавливающим, противоопухолевым, антимутагенным, антивирусным агентом растительного происхождения 3, 4. Разработаны таблетки эллаговой кислоты, которые обладают антиоксидантной,противовоспалительной и кардиопротекторной активностью 5. Эллаговая кислота используется в качестве реактива (контактного активатора) для определения активированного частичного тромбопластинового времени 6. Кроме того, субстанция эллаговой кислоты может использоваться в качестве стандарта в различных методах качественного и количественного анализа (ТСХ, высокоэффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ), ИК- спектроскопии и др.). Источники информации 1. Хворост О.П. , Малый В.В. , Сербии А.Г. , Яковлева Л.В. Эллаговая кислота, распространенность в растительном мире и аспекты биологического действия // Провизор.1998.-22. 2. Патент Украины 23109 А, МПК А 61 К 35/78, 1995. 3. Малый В.В. Подтверждение аутентичности соединений, выделенных из отечественных растений с эллаговой кислотой // Провизор.- 1999.-4. 2 12564 1 2009.10.30 4. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека.- М. Наука, 1984.- 160 с. 5. Малиновская С.М. Разработка состава и технологии таблеток эллаговой кислоты Автореф. дис. 6. Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования гомеостаза. Российская академия медицинских наук. Гематологический научный центр / Сост. А.А. Козлов,А.А. Берковский, Н.Д. Качанова, Т.М. Простакова.- М., 2003.- 93 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3