Способ диагностики псориатического артрита

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАТИЧЕСКОГО АРТРИТА(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Кундер Елена Владимировна Литвяков Александр Михайлович Генералов Игорь Иванович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(56) Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследований.М., 1973.- С. 149-153.1807413 А 1, 1993. КУНДЕР Е.В. и др. Иммунопатология,аллергология, инфектология.- 2005. 3.- С. 26-34.(57) Способ диагностики псориатического артрита, отличающийся тем, что сыворотку крови больного смешивают и инкубируют с раствором ДНК, определяют ДНКазную активность сыворотки по реакции нераспавшейся ДНК с риванолом, и если при добавке риванола выявляют помутнение реакционной смеси и наличие в ней единичных хлопьев или нитей ДНК, ДНКазную активность сыворотки определяют как очень высокую и диагностируют псориатический артрит. Изобретение относится к медицине (ревматологии, иммунологии) и может быть использовано для диагностики и дифференциальной диагностики псориатического артрита. Для диагностики псориатического артрита в настоящее время используются неспецифические лабораторные показатели (определение ревматоидного фактора, С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов и аутоантител). Все перечисленные критерии не являются специфичными для псориатического артрита и не позволяют провести дифференциальную диагностику между данной патологией и другими заболеваниями из группы серонегативных спондилоартритов. В настоящее время для диагностики ряда патологических состояний предлагают использовать определение ферментативной активности сыворотки крови. В частности, установлено повышение сывороточной ДНКазной активности при остром инфаркте миокарда 2, определение активности этого сывороточного фермента предлагают использовать в качестве нового эффективного маркера для ранней диагностики инфаркта миокарда наряду с биохимическими и электрокардиографическими признаками. Проводилось исследование 3 сывороточной ДНКазной активности у больных с системной красной волчанкой. Показано достоверное снижение уровня данной активности у обследованных пациентов по сравнению со здоровыми лицами. 12255 1 2009.08.30 Определение сывороточной ДНКазной активности для диагностики серонегативных артритов (псориатического артрита, анкилозирующего спондилита и реактивных артритов) до настоящего времени не применялось. Прототипом заявляемого способа диагностики псориатического артрита является метод определения ревматоидного фактора 1. Метод включает несколько стадий получение сыворотки от больного определение ревматоидного фактора. Недостатком метода является то, что данный способ диагностики является неспецифичным для псориатического артрита. Несмотря на то, что псориатический артрит относится к группе серонегативных артритов, в названии которых отражена их отрицательность по этому признаку, тем не менее, в настоящее время число случаев заболевания с увеличением титров ревматоидного фактора достигает 154. Задачей изобретения является разработка метода лабораторной диагностики псориатического артрита на основе определения сывороточной ДНКазной активности. Сущность изобретения заключается в том, что после забора у больных сыворотки крови определяется ее ДНКазная активность. По окончании кратковременной (не более 2 часов) инкубации реакционной смеси проводится полуколичественный визуальный учет результатов активности в баллах. Способ осуществляется следующим образом. Негепаринизированную человеческую кровь в количестве 2-3 мл инкубируют при температуре 4 С до образования сгустка. Затем центрифугируют 10-15 мин в центрифужных пробирках в центрифуге с бакетным ротором (1500 об/мин). Аккуратно забирают чистую сыворотку. Для постановки ДНКазной реакции сыворотку разводят 1/5 изотоническим раствором хлорида натрия. Постановку реакции проводят в центрифужных пробирках. К 0,1 мл разведенной сыворотки прибавляют 0,2 мл стандартизованного раствора ДНК в концентрации 300 мкг/мл и 0,1 мл трисбуфера, содержащего 0,01 2, рН 8,3. В контроле вместо сыворотки используют физиологический раствор. Пробы инкубируют при 37 С в течение 2 часов. После инкубации к пробам прибавляют по 20 мкл 0,75 этакридина лактата (риванола). Результат оценивают полуколичественно по величине сгустка нераспавшейся ДНК в баллах. Отсутствие активности (сгусток ДНК) принимают за 0 баллов, минимальная активность(рыхлый сгусток) - 1 балл, умеренная активность (рыхлый сгусток, хлопья, нити комплекса ДНК) - 2 балла, высокая активность (хлопья, нити) - 3 балла, очень высокая активность (хлопья, нити, распад сгустка) - 4 балла и распад сгустка ДНК - 5 баллов. Нами обследовано 77 больных серонегативными артритами (31 пациент с псориатическим артритом, 22 - с анкилозирующим спондилитом и 24 - с реактивными артритами). Результаты определения уровней ДНКазной активности сывороток у больных представлены в таблице. Уровни ДНКазной активности сывороток крови у больных серонегативными артритами ДНКазная активность сы- Статистическая достоОбследованные лица вороток, баллы верность различий Все обследованные пациенты 2,680,14577 р 0,001 Пациенты с псориатическим артритом 3,810,17631 р 0,001 Пациенты с анкилозирующим спон 1,720,14922 р 0,05 дилитом Пациенты с реактивными артритами 2,160,17724 р 0,05 Здоровые лица 1,580,13436 12255 1 2009.08.30 При сравнении уровней сывороточной ДНКазной активности у пациентов с изученными нозологическими формами серонегативных артритов оказалось, что данный вид активности у больных псориатическим артритом статистически достоверно превышает аналогичные показатели у больных анкилозирующим спондилитом (р 0,001) и реактивными артритами (р 0,001). Проведенная оценка ДНКазной активности сывороток крови у больных серонегативными артритами демонстрирует достоверное преобладание этого параметра у больных псориатическим артритом по сравнению с другими заболеваниями из данной группы. Из 31 обследованного пациента с установленным псориатическим артритом ДНКазная активность сыворотки крови 4 балла и выше наблюдалась у 19 человек (61,3 ), а 3 и более балла - у 28 человек (90,3 ). Среди 21 пациента с анкилозирующим спондилитом ДНКазная активность сыворотки 4 и более баллов не выявлялась, 3 и более баллов присутствовала у 3 больных (14,3 ). При исследовании ДНКазной активности сыворотки крови у пациентов с реактивными артритами оказалось, что активность 4 и более баллов присутствует у 2 больных из 25 (8 ), 3 и более баллов - у 7 из 25 больных (28 ). Среди 36 обследованных здоровых лиц ДНКазную активность сыворотки 4 и более баллов не демонстрировал ни один человек, 3 и более баллов - 7 человек (19,5 ). Если за диагностический уровень псориатического артрита принять ДНКазную активность сыворотки крови, равную 4 баллам и более, то чувствительность метода составляет 61,3 , а специфичность равна 95,6 . Если диагностическим уровнем признать активность 3 и более баллов, то чувствительность метода составляет 90,3 , а специфичность 78,3 . Эффективность определения сывороточной ДНКазной активности для диагностики и дифференциальной диагностики псориатического артрита определяется тем, что этот метод является простым и дешевым, не требует специальных навыков и оборудования, позволяет получить результат в течение 2,5-3 часов от взятия крови. Источники информации 1. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследований.-М., 1973.- С. 149-153 (прототип). 2. , .// .- 2004.- . 109.- . 2398-2400. 3. , .//.- 2005.- .1.- . 56-59. 4..,// . . .- 2005.- .17.- . 395-399. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3