Средство для фотодинамического лечения и профилактики послеоперационного панкреатита и гнойного осложнения при резекции поджелудочной железы в эксперименте

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОГО ПАНКРЕАТИТА И ГНОЙНОГО ОСЛОЖНЕНИЯ ПРИ РЕЗЕКЦИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Стенько Александр Александрович Жук Игорь Георгиевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Применение нильского синего А для фотодинамического лечения и профилактики послеоперационного панкреатита и гнойного осложнения при резекции поджелудочной железы в эксперименте. Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и может быть использовано для лечения и профилактики послеоперационного панкреатита и гнойных осложнений при резекции поджелудочной железы. В результате резекции поджелудочной железы встречается ряд осложнений, возникающих самостоятельно или вследствие развившегося панкреатита. Среди них частота септических осложнений после ранних операций на билиопанкреатической зоне достигает 47 . Гнойно-некротические осложнения включают в себя абсцессы, флегмону парапанкреатической клетчатки, образование кист и свищей. Чаще при этом осложняются тяжелые формы деструктивного послеоперационного панкреатита. Задача изобретения - расширение арсенала средств для фотодинамического лечения и профилактики послеоперационного панкреатита и пострезекционных гнойно-некротических осложнений в поджелудочной железе, обладающих выраженной терапевтической активностью. Поставленная задача достигается путем использования препарата нильский синий А(химическое название 3-амино-7-диэтиламино-1,2-бензофеноксазоний сульфат). Препарат нильский синий является красителем, применяемым в гистологии для дифференцировки жировых веществ и окрашивания жиросодержащих тканей. Также известно,что нильский синий является фотосенсибилизатором и применяется для фотодинамической терапии злокачественных опухолей и их диагностики 1, 2, 3, 4. Однако из известных сведений не вытекает, что данный препарат можно использовать для фотодинамического лечения и профилактики послеоперационного панкреатита и пострезекционных гнойно-некротических осложнений в поджелудочной железе. Исследования проводились на белых крысах-самцах массой 200-250 г. Выполняли дистальную резекцию поджелудочной железы под внутримышечным калипсоловым нар 11768 1 2009.04.30 козом. Интраоперационно в брюшную полость вводили 1 мл водного раствора нильского синего (концентрация 10-6 моль/л) с последующей его активацией (через 3 мин) гелийнеоновым лазером аппарата (мощность 20 мВт длина волны 632,7 нм экспозиция 5 мин). В послеоперационном периоде выполнялось чрескожное в зоне проекции поджелудочной железы облучение гелий-неоновым лазером с указанными выше параметрами курсом 7 дней. Для оценки эффективности лечения осуществляли динамическое наблюдение за общим состоянием животных, местными реакциями в культе железы и ходом репаративных процессов. В опытную и контрольную группу вошли по 30 крыс. В контрольной группе послеоперационного лечения не проводили. Все животные контрольной группы в течение 12 ч после операции были вялыми, адинамичными, медленно передвигались по клетке. Наблюдалось учащение дыхания, выраженная тахикардия, послабление стула. Однако уже на первые сутки послеоперационного периода состояние животных стабилизировалось крысы стали активными, принимали пищу, пили воду, произошла нормализация функций дыхательной и сердечно-сосудистой систем, а также физиологических отправлений. Погибло 4 животных в ранние сроки (3-7 суток) послеоперационного периода вследствие несостоятельности культи и развития деструктивных изменений в поджелудочной железе. При аутопсии в брюшной полости обнаруживалась серозно-геморрагическая жидкость (1-2 мл). Брюшина была бледная, покрыта хлопьями фибрина. Поджелудочная железа была увеличена в объеме, плотная, темно-красного цвета с несколько синюшным оттенком. Большой сальник - набухший, отечный, с множественными очаговыми (местами сливающимися между собой) кровоизлияниями. Микроскопически наблюдались дискомплексация ацинозных структур, некробиоз и некроз ацинарных клеток, на периферии густая лейкоцитарная инфильтрация и выраженное полнокровие. На 3 сутки у забитых животных в брюшной полости отмечали незначительное количество серозного экссудата, к месту резекции был припаян большой сальник, наблюдалась умеренно выраженная отечность ткани культи поджелудочной железы. Интраорганные сосуды при наливке тушью-желатином очень слабо контрастировались или вовсе не определялись. Микроскопически в зоне резекции наблюдались множественные очаговые некрозы,резко выраженная лейкоцитарная инфильтрация, обширные поля кровоизлияний, характерные для острого панктеатита. В прилежащих участках железы отмечался отек междольковой ткани, дискомплексация ацинусов, зернистая и вакуольная дистрофия ацинарных клеток мелкие протоки расширены и заполнены белковым секретом. К 7 суткам на аутопсии брюшина была без видимых макроскопических изменений, выпота не наблюдали. В области резекции - спаечный процесс, незначительная отечность культи железы. В 2 случаях были обнаружены в зоне спаек культи с сальником плотноэластические образования, представляющие собой на разрезе инкапсулированные гнойно-некротические массы. Микроскопически интраорганное сосудистое русло получило более четкое изображение сужение капилляров и расширение венул. Гистологически к 7 суткам в зоне резекции появлялись очаги грануляционной ткани, а в прилежащих отделах железы наблюдались дистрофические и атрофические изменения паренхимы, сохранялась воспалительная инфильтрация, очаговые некрозы. К 30-60 суткам культя железы была обычной формы и цвета, спаяна с сальником. Интраорганные сосуды не приобретали очертаний, свойственных сосудам поджелудочной железы в норме в одних участках органа сосудистая сеть довольно густая, в других - разрежена, а сами сосуды оставались деформированными. На гистологических препаратах в культе поджелудочной железы отмечалась картина хронического панкреатита мелкоочаговый некроз ацинарной ткани, резко выраженные склеротические и атрофические процессы, воспалительная инфильтрация, расширение и деформация выводных протоков. Послеоперационный период у всех наблюдаемых нами опытных животных, получавших фотодинамическую терапию, протекал относительно легко, без выраженных осложнений. Нормализация объективных тестов общего состояния животных (частота дыхания,частота сердечных сокращений, физиологические отправления) наступила через 8-12 час 2 11768 1 2009.04.30 после резекции. В последующем поведение этих животных (активность, прием пищи) фактически ничем не отличались от поведения неоперированных крыс. Все животные в этой группе выжили. На 3 сутки при аутопсии изменений со стороны брюшины и патологического процесса в брюшной полости не обнаруживали. Культя слегка отечная, эластической консистенции,сохраняла свойственную железе бледно-розовую окраску, спаечный процесс не наблюдался. Реакция кровеносной системы на хирургическую травму сводилась к тому, что интраорганная сосудистая сеть была деформирована наблюдались локальные спазмы и паретическая дилятация просвета сосудов, мелкодисперсные элементы инъекционной массы вне сосудистого русла встречались лишь в отдельных участках паренхимы органа. На гистологических препаратах отмечалось разрастание неспецифической грануляционной ткани, богатой сосудами, с наличием значительного количества фибробластов и гистиоцитов. Протоки неравномерно расширены. На 7 сутки культя железы по внешнему виду не отличалась от проксимальной части органа имела розовый цвет и эластическую консистенцию. При изучении микроциркуляторного русла на препаратах, инъецированных тушью,определяли ограниченную зону умеренного сужения артериол и капилляров, некоторого расширения венул при сохранении пространственной ориентации микрососудов. Определяли умеренную лимфогистиоцитарную инфильтрацию с разрастанием молодой соединительной ткани, местами с образованием неспецифической грануляционной ткани. В более поздние сроки, по сравнению с ранними, существенных макроскопических различий в брюшной полости не наблюдалось. К 14-30 суткам культя железы имела вид,цвет и плотность, характерные для интактного органа. На инъецированных тушью препаратах в зоне рубца находили микрососуды в стадии формирования крупноячеистой капиллярной сети. При микроскопическом исследовании в те же сроки грануляционная ткань подверглась склерозу в прилежащих участках железы отмечались компенсаторное расширение ацинусов и скудная лимфогистиоцитарная инфильтрация. На 60 сутки при инъекции тушью микроцируляторного русла существенных отличий в архитектонике сосудов по сравнению с интактными животными мы не наблюдали, т.е. сосуды имели свойственный им рисунок. На всех гистологических препаратах ацинусы обычной формы,воспалительных явлений не наблюдалось. Таким образом, применение фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором нильский синий для профилактики послеоперационного панкреатита и гнойных осложнений при резекции поджелудочной железы позволяет сократить сроки очищения и гранулирования раны культи железы, ускорить репаративные процессы. Источники информации 1.С,,, , ,//. - 1991. -51. - . 1109-1116. 2..,.,.29,1376//. - 2001. 73(6). - . 651-6. 3..,.,.. 2001. - 74(5). - . 707- 1. 4.,,.//. - 2001. 73. -32-8. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3