Способ лечения субклинического мастита у коров

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СУБКЛИНИЧЕСКОГО МАСТИТА У КОРОВ(71) Заявитель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Гусев Анатолий Алексеевич Новикова Оксана Николаевна Ломако Юрий Васильевич Ивашкевич Олег Петрович(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(56) Методические указания по диагностике и профилактике маститов у коров. Минск, 2006. - С. 9-12, 20-21.2077882 1, 1997.02/03813 1.2004-223 , 2004.(57) Способ лечения субклинического мастита у коров, при котором в качестве раствора для внутримышечных инъекций используют композицию, содержащую тритерпеновые сапонины, формальдегид, натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,10-0,25 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,которую вводят в количестве 5,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч трехкратно. Изобретение относится к области ветеринарии, может быть использовано в качестве способа лечения коров, больных субклиническим маститом. Известен способ профилактики и лечения субклинического мастита у лактирующих коров путем введения через канал соска - , , , мастисана, пенэрсина и др. 1. Недостатком этого способа лечения субклинического мастита у коров является то, что антибиотики, сульфаниламиды, входящие в состав препаратов, раздражают ткани молочной железы, угнетают местную резистентность, нарушают естественный биоценоз молочной железы, что ведет к развитию дисбактериоза, частому рецидивированию патологического процесса. В течение длительного времени компоненты препаратов (антибиотики, сульфаниламиды) выделяются с молоком, что создает угрозу здоровью людей. Задачей заявляемого изобретения является разработка способа лечения субклинического мастита у коров с помощью экологически безопасного лекарственного препарата,обладающего иммуностимулирующим и противовоспалительным свойствами. 18394 1 2014.08.30 Поставленная задача достигается тем, что способ лечения субклинического мастита у коров включает использование в качестве раствора для внутримышечных инъекций композицию, содержащую тритерпеновые сапонины, формальдегид, натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,10-0,25 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,которую вводят в количестве 5,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч трехкратно. Кроме того, поставленная задача достигается за счет того, что заявляемый препарат дополнительно содержит тритерпеновые сапонины, которые при взаимодействии с холестерином клетки формируют поры в двойных слоях мембраны клетки, в результате чего повышается биологическая доступность молекул формальдегида, которые при проникновении в клетку модулируют внутриклеточные процессы метаболизма 2, т.е. наблюдается новое свойство заявляемого препарата в результате синергетического эффекта. Кроме того, поставленная задача достигается за счет того, что формальдегид в заявляемых мас.индуцирует замедление обменных процессов в клетке и тем самым блокирует патологические процессы в органе. Обратимость блокирования формальдегидом жизнедеятельности в биологическом объекте доказана на органном, клеточном и молекулярном уровнях 2. Кроме того, поставленная задача достигается за счет применения отработанных мас.соотношений заявляемых компонентов, которое выражается в снижении эффективности применения заявляемого препарата при уменьшении заявленных соотношений мас. , а при увеличении заявленных соотношений мас.появляется отрицательный эффект в виде гемолитического эффекта - разрушение эритроцитов (табл. 1, 3-6). Таблица 1 Изучение гематологических показателей у поросят при курсовом введении иммуностимулирующего препарата Доза препаГемоглоГруппа рата,ЭритроциТромбоци- ЛейкоциГематокрит бин,мл/10 кг животных ты, 1012/л ты, 109/л ты, 109/л ммоль/л массы тела Препарат 1,0 4,30,8 0,250,03 8,31,6 367,869,4 11,22,5 Препарат 2,0 3,60,6 0,200,05 7,60,9 355,873,1 12,93,1 Препарат 3,0 3,240,4 0,190,03 6,41,2 327,884,5 10,22,7 без обработКонтроль 4,50,5 0,290,04 8,51,5 322,853,2 12,83,2 ки Примечание- при 05,- при 0,01. Тритерпеновые сапонины - высокомолекулярные сложные органические соединения гликозидного характера - растворяются в воде с образованием коллоидных растворов,уменьшают величину поверхностного натяжения и, подобно мылу, образуют пену, способствуют повышению проникающей способности клеточных мембран 3, 4. Кроме того, для тритерпеновых сапонинов характерно адаптогенное, антиоксидантное, противовоспалительное, противоопухолевое действие 4. Формальдегид - первый представитель класса альдегидов . Представляет собой бесцветный газ с резким запахом, мол. массой 30,03, плотность его при 20 С равна 0,815,температура плавления 92 С температура кипения 19,2 С. Хорошо растворим в воде,спирте. В чистом виде легко полимеризуется, образуя параформальдегид, и используется в качестве биологического модулятора обменных процессов в клетке 2, 5. Натрия хлорид - кубические кристаллы или белый кристаллический порошок соленого вкуса, без запаха. Растворим в воде (13). Используется в качестве образующего компонента для физиологического раствора 6. 2 18394 1 2014.08.30 Дистиллированная вода - 2 - бесцветная прозрачная жидкость без запаха и вкуса,используется в качестве растворителя 7. Пример 1. Приготовление иммуностимулирующего препарата. Поставленная задача достигается тем, что способ лечения субклинического мастита у коров включает использование в качестве раствора для внутримышечных инъекций композицию, содержащую тритерпеновые сапонины, формальдегид, натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,10-0,25 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,которую вводят в количестве 5,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч трехкратно. Стабильность физико-химических свойств иммуностимулирующего препарата изучали с использованием метода ускоренного старения путем повышения температуры хранения препарата на 15 С 8. Результаты изучения стабильности заявляемого препарата представлены в табл. 2. Таблица 2 Результаты изучения органолептических, физико-химических и биологических показателей иммуностимулирующего препарата в зависимости от показателя концентрации водородных ионов раствора Показатель концентрации водородных ионов , единиНаименование Характеристика и норма показателя цы 4,0 5,0-7,0 8,0 1. Внешний вид, цвет,Прозрачная бесцветная или запах, наличие осадка и светло-соломенного цвета, опамеханических примесей лесцирующая жидкость без осадка и без запаха, при встря- не соотне соотсоответхивании которой наблюдается ветствует ветствует ствует пенообразование. Допускается осадок осадок наличие механических примесей в 3 от общего количества флаконов в партии. 2. Стерильность Должен выдерживать испытастерилен стерилен стерилен ние 3. Массовая доля тритер 0,03-0,05 0,030 0,030 0,030 пеновых сапонинов,4. Подлинность содерДолжен выдерживать испыта- выдервыдервыдержания тритерпеновых ние живает живает живает сапонинов 5. Подлинность содерДолжен выдерживать испыта- выдервыдервыдержания формальдегида ние живает живает живает 6. Массовая доля фор 0,10-0,25 0,10 0,10 0,10 мальдегида,7. Безвредность Препарат не должен вызывать гибель и признаки заболеваний у клинически здоровых белых нетокси- нетокси- нетоксимышей при его однократном чен чен чен введении под кожу в объеме 0,30 см 3 3 18394 1 2014.08.30 Пример 2. Способ лечения иммуностимулирующим препаратом субклинического мастита у коров. Для установления лечебного действия иммуностимулирующего препарата при субклиническом мастите была проведена диагностика лактирующих коров на наличие субклинического мастита, по результатам которой были сформированы 3 группы коров. Препарат, приготовленный согласно примеру 1, вводят коровам внутримышечно по следующей схеме первая опытная группа животных - в объеме 3,0 мл трехкратно с интервалом 24 ч, вторая опытная группа - в объеме 5,0 мл трехкратно с интервалом 24 ч (табл. 3). При необходимости курс применения препарата повторяли через 7-10 суток согласно аналогичной схеме. Животным контрольной группы вводили, согласно наставлению, базовый препарат мастилекс, который наиболее широко используется в ветеринарной практике для лечения коров с этой патологией. Таблица 3 Перевод объемных единиц препарата (мл) в весовые единицы (г) Объем препарата, мл Эффективность мероприятий определяли спустя 5-7 суток после введения препаратов с помощью диагностикума Беломастин (10 раствор разводили дистиллированной водой в соотношении 13, затем в углубление пластинки МКП-1 вносили по 1,0 см 3 испытуемого молока, после чего добавляли по 1,0 см 3 рабочего раствора диагностикума и перемешивали путем горизонтального вращения). Результат реакции учитывали в первые 10-20 с-- (отрицательная реакция) жидкая смесь остается однородной- (сомнительная реакция) в смеси образуются слизистые нити- (положительная реакция) смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка. Полученные результаты по изучению эффективности способа лечения коров, больных субклиническим маститом, представлены в табл. 4. Таблица 4 Эффективность способа лечения иммуностимулирующим препаратом субклинического мастита у коров Количество больных коров 51 41 12 В том числе выздоровело После первого После второго Всего курса курса голов При изучении неспецифических гуморальных и клеточных факторов иммунитета было выявлено повышение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови коров и стимуляция фагоцитарной активности гранулоцитов. 18394 1 2014.08.30 Таблица 5 Влияние заявляемого способа лечения иммуностимулирующим препаратом на бактерицидную активность сыворотки крови коров с субклиническим маститом Бактерицидная активность сыворотки крови,8-е сутки после первого 10-е сутки после второго Группа коров До начала лечения курсового введения пре- курсового введения препаратов паратов 1. Опытная 33,55,0 37,85,3 40,55,2 2. Опытная 26,55,0 29,84,2 44,56,8 Контрольная 35,99,2 36,66,5 34,64,1 Примечание- при 0,01. Таблица 6 Влияние способа лечения иммуностимулирующим препаратом на лизоцимную активность сыворотки крови коров с субклиническим маститом Лизоцимная активность сыворотки крови,10-е сутки после второго Группа коров До начала 8-е сутки после первого курсокурсового введения прелечения вого введения препаратов паратов 1. Опытная 1,910,2 2,230,5 2,10,4 2. Опытная 1,900,2 2,130,2 2,80,3 Контрольная 1,950,1 2,00,2 2,170,4 Примечание- при Р 0,01. Таблица 7 Влияние способа лечения иммуностимулирующим препаратом на фагоцитарную активность гранулоцитов крови коров субклиническим маститом Фагоцитарный показатель,Группа коров 8-е сутки после пер- 10-е сутки после До начала введения вого курсового вве- второго курсового препарата дения препарата введения препарата 1. Опытная 65,65,7 78,35,2 81,63,3 2. Опытная 65,65,7 79,34,2 82,65,3 Контрольная 69,36,3 73,13,5 75,55,3 Примечание- при 0,01. Установлено, что молоко коров до и после применения заявляемого препарата по внешним признакам представляло собой однородную жидкость белого или слабокремового цвета без запаха, осадка и хлопьев, приятного вкуса. В молоке коров, больных субклиническим маститом, определяли показатели плотности, кислотности, содержания соматических клеток. До введения препарата указанные показатели не соответствовали предъявляемым требованиям 9, и только на 7-й день после введения препарата молоко этих животных относилось по всем показателям (за исключением соматических клеток) к сорту экстра или высшему. Ингибирующие свойства молока после применения иммуностимулирующего препарата не зарегистрированы (табл. 8). 18394 1 2014.08.30 Таблица 8 Физико-химические показатели молока после лечения коров заявляемым способом Норма для сорта молока Группа животных Время Больные Показатель исследо- здоро- субклиниЭкстра Высшего Первого Второго вания вые ческим маститом до введе 1028 1025 ния 24 ч 1028 1025 3 Плотность, кг/м 1,028 1,027 48 ч 1028 1026 72 ч 1028 1027 96 ч 1028 1027 7 дней 1028 1028 до введе 17,10 15,65 ния 24 ч 17,22 15,35 От 16 до Кислотность, Т От 16 до 18 включительно 20 вклю 48 ч 17,19 15,52 чительно 72 ч 17,94 15,75 96 ч 17,19 16,10 7 дней 17,23 16,54 до введе 3,47 3,20 ния 24 ч 3,45 3,30 Массовая доля 3,4 48 ч 3,43 3,32 жира,72 ч 3,50 3,38 96 ч 3,57 3,49 7 дней 3,52 3,50 до введе 3,36 3,20 ния 24 ч 3,40 3,10 Массовая доля 3,0 48 ч 3,45 3,30 белка,72 ч 3,35 3,20 96 ч 3,38 3,20 7 дней 3,30 3,15 Не допускается содержание антибакте- до введериальных веществ (антибиотики, сульния фаниламиды, хинолоны, анаболитичес 24 ч Ингибирующие кие, гормональные, бета-агностические 48 ч свойства препараты), ингибирующих веществ,72 ч включая перекись водорода, моющих,96 ч дезинфицирующих, нейтрализующих 7 дней(сода, аммиак и другие) веществ до введе 190,3 1909,7 ния Количество со 24 ч 229,7 1252,7 матических кле 300 тыс. 500 тыс. 750 тыс. 1000 тыс. 48 ч 210,5 1192,5 ток в 1 см 3, не 72 ч 190,2 1097 более 96 ч 205,3 981,5 7 дней 180,7 581,2 Примечание Изменение 2 СТБ 1598/2006. Молоко коровье. Требование при закупках. 18394 1 2014.08.30 Таким образом, представленные в табл. 4-8 экспериментальные данные свидетельствуют о том, что при применении заявляемого способа лечения субклинического мастита суммарный эффект составил 66,6-70,7 против 75 в контрольной группе. Однако следует отметить, что в отличие от препарата сравнения (мастилекс), заявляемый способ с применением иммуностимулирующего препарата стимулировал гуморальные и клеточные факторы иммунитета организма животных и не обладал ингибирующими свойствами,т.е. после применения заявляемого способа лечения молоко использовали на общих основаниях. Разработан способ лечения субклинического мастита у коров с помощью экологически безопасного лекарственного препарата, обладающего иммуностимулирующим и противовоспалительным свойствами. Способ лечения субклинического мастита с помощью иммуностимулирующего препарата имеет преимущества в отличие от общепринятых в ветеринарии способов лечения. Поскольку молоко после применения предлагаемого способа лечения используется без ограничения на общих основаниях. Источники информации 1. Богуш А.А., Каменская Т.Н., Иванов В.Е., Лукьянчик С.А., Бельмач М.М., Бородич Л.М., Конон А.И. Методические указания по диагностике, лечению и профилактике маститов у коров утв. Главным управлением ветеринарии с Государственной ветеринаринарной и Государственной продовольственной инспекциями Министерства сельского хозяйства Республики Беларусь 04.11.2006. Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь. - Минск РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского НАН Беларуси, 2006. - 25 с. 2. Формалин Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа //.///00/00/0000042/017 - Дата доступа 2.11.2011. 3. Сапонины Электронный ресурс. 2011. - Режим доступа //////. - Дата доступа 2.11.2011. 4. Сапонины Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа . .//отд.//сапонины. - Дата доступа 2.11.2011. 5. Формалин Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа ////Формалъдегид. - Дата доступа 2.11.2011. 6. Хлорид натрия Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа ////Хлорид натрия. - Дата доступа 2.11.2011. 7. Вода дистиллированная - ГОСТ 6709-72. 8. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственного средства на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре. - М., 1974. - 9 с. 9. Молоко коровье. Требования при закупках - СТБ 1598-2006. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 7