Способ получения препарата для профилактики эндометрита у свиноматок

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЭНДОМЕТРИТА У СВИНОМАТОК(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Гусев Анатолий Алексеевич Новикова Оксана Николаевна Ломако Юрий Васильевич Ивашкевич Олег Петрович(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(57) Способ получения препарата для профилактики послеродового эндометрита у свиноматок, при котором в водный раствор хлорида натрия добавляют тритерпеновые сапонины, полученный раствор стерилизуют при 100 С в течение 5-7 мин, охлаждают до 3035 С, добавляют формальдегид в виде 37-40 -ного раствора, доводятдо значения 5,0-7,0, затем раствор перемешивают при температуре 10-40 С при скорости мешалки 100-150 об/мин в течение 10-20 мин до получения раствора однородного цвета со следующим соотношением компонентов, мас.натрия хлорид 0,80-0,85 тритерпеновые сапонины 0,06-0,08 формальдегид 0,05-0,07 дистиллированная вода остальное. Изобретение относится к области ветеринарии, может быть использовано в качестве способа получения препарата для профилактики эндометрита у свиноматок. Известен способ получения иммуностимулирующего препарата, описанный в заявке на изобретение Иммуностимулирующий препарат, который заключается в смешивании активного начала - формальдегида с физиологическим раствором натрия хлорида на основе дистиллированной воды, причем в качестве активного начала он содержит формальдегид 0,07-0,24 , а в качестве целевых добавок содержит натрия хлорид - 0,9-0,95 дистиллированную воду - остальное до 100 . Препарат используют в качестве стимулятора естественной резистентности, восстанавливающего иммунный статус организма и обеспечивающего иммунологическую перестройку в отношении опухолевых клеток, воз 18392 1 2014.08.30 будителей инфекционных заболеваний, антигенов и гаптенов при заболеваниях не выясненной этиологии 1. Недостатком этого способа является получение иммуностимулирующего препарата со сравнительно низкой фармакологической активностью. Задачей заявляемого изобретения является разработка способа, позволяющего получить препарат с расширенным спектром фармакологической активности, обладающего иммуностимулирующим и противовоспалительным действием. Поставленная задача достигается тем, что способ получения препарата для профилактики эндометрита у свиноматок заключается в добавлении в водный раствор хлорида натрия тритерпеновых сапонинов, полученный раствор стерилизуют при 100 С в течение 57 мин, охлаждают до 30-35 С, добавляют формальдегид в виде 37-40 -ного раствора,доводятдо значения 5,0-7,0, затем раствор перемешивают при температуре 10-40 С при скорости мешалки 100-150 об/мин в течение 10-20 мин до получения раствора однородного цвета со следующим соотношением компонентов, мас.натрия хлорид 0,80-0,85 тритерпеновые сапонины 0,06-0,08 формальдегид 0,05-0,07 дистиллированная вода остальное. Кроме того, поставленная задача достигается за счет того, что препарат содержит тритерпеновые сапонины, которые при взаимодействии с холестерином клетки формируют поры в двойных слоях мембраны клетки 3, в результате чего повышается биологическая доступность молекул формальдегида, который является модулятором биохимических процессов в клетке 4. Кроме того, поставленная задача достигается за счет того, что тритерпеновые сапонины в указанных мас.обладают кортикотропным действием 5. Кроме того, поставленная задача достигается за счет применения отработанных мас.соотношений, заявляемых компонентов, которое выражается в снижении эффективности применения заявляемого препарата при уменьшении заявленных соотношений мас. , а при увеличении заявленных соотношений мас.появляется отрицательный эффект в виде гемолитического эффекта - разрушение эритроцитов (табл. 1, 3, 4). Таблица 1 Изучение гематологических показателей у поросят при курсовом введении иммуностимулирующего препарата, приготовленного по заявляемому способу Доза преГруппа жи- парата, Эритроциты, Гемато- Гемоглобин, Тромбоциты, Лейкоциты,вотных мл/ 10 кг 1012/л крит ммоль/л 109/л 109/л массы тела Препарат 1,0 4,30,8 0,250,03 8,31,6 367,869,4 11,22,5 Препарат 2,0 3,60,6 0,200,05 7,60,9 355,873,1 12,93,1 Препарат 3,0 3,240,4 0,190,03 6,41,2 327,884,5 10,22,7 без обраКонтроль 4,50,5 0,290,04 8,51,5 322,853,2 12,83,2 ботки Примечание- при 0,05,- при 0,01. Тритерпеновые сапонины - высокомолекулярные сложные органические соединения гликозидного характера, растворяются в воде с образованием коллоидных растворов,уменьшают величину поверхностного натяжения и, подобно мылу, образуют пену, способствуют повышению проникающей способности клеточных мембранах 3. Кроме того, для тритерпеновых сапонинов характерно адаптогенное, антиоксидантное, противовоспалительное, кортикотропное действие 5. Тритерпеновые сапонины не обладают прямым эстрогенным эффектом, однако в заявляемых мас.опосредованно вызывают изменения в репродуктивном тракте за счет стимуляции или модификации функций гипоталамуса и гипофиза 6. 2 18392 1 2014.08.30 Формальдегид - первый представитель класса альдегидов . Представляет собой бесцветный газ с резким запахом, мол. массой 30,03, плотность его при 20 С равна 0,815,температура плавления 92 С температура кипения 19,2 С. Хорошо растворим в воде,спирте. В чистом виде легко полимеризуется, образуя параформальдегид 7, используется в качестве биологического модулятора обменных процессов в клетке 4. Натрия хлорид - кубические кристаллы или белый кристаллический порошок соленого вкуса, без запаха. Растворим в воде (13). Используется в качестве образующего компонента для физиологического раствора 8. Дистиллированная вода - 2, бесцветная прозрачная жидкость без запаха и вкуса,используется в качестве растворителя 9. Пример 1. Приготовление препарата, полученного по заявляемому способу. Диапазон концентраций активнодействующих веществ в формуле препарата определяет его фармакологическую активность. Способ получения препарата для профилактики эндометрита у свиноматок заключается в добавлении в водный раствор хлорида натрия тритерпеновых сапонинов, полученный раствор стерилизуют при 100 С в течение 57 мин, охлаждают до 30-35 С, добавляют формальдегид в виде 37-40 -ного раствора,доводятдо значения 5,0-7,0, затем раствор перемешивают при температуре 10-40 С при скорости мешалки 100-150 об/мин в течение 10-20 мин до получения раствора однородного цвета со следующим соотношением компонентов, мас.натрия хлорид 0,80-0,85 тритерпеновые сапонины 0,06-0,08 формальдегид 0,05-0,07 дистиллированная вода остальное. Кроме того, доведение концентрациираствора до значения 5,0-7,0 с перемешиванием в течение 10-20 минут при температуре 10-40 С при скорости мешалки-шейкера 100-150 об/мин до получения раствора однородного цвета позволяет получить однородную композицию со стабильными качественными и количественными характеристиками. Стабильность физико-химических свойств иммуностимулирующего препарата изучали с использованием метода ускоренного старения путем повышения температуры хранения препарата на 15 С 10. Результаты изучения стабильности заявляемого препарата представлены в табл. 2. Таблица 2 Результаты изучения органолептических, физико-химических и биологических показателей препарата, приготовленного по заявляемому способу, в зависимости от показателя концентрации водородных ионов раствора Наименование показателя 1. Внешний вид,цвет, запах, наличие осадка и механических примесей Показатель концентрации водородных ионов , единицы 4,0 5,0-7,0 8,0 прозрачная бесцветная или светло-соломенного цвета,опалесцирующая жидкость без осадка и без запаха,при встряхивании которой не соответст- соответст- не соответстнаблюдается пенообразовует осадок вует вует осадок вание. Допускается наличие механических примесей в 3 от общего количества флаконов в партии 3 характеристика и норма должен выдерживать испытание Продолжение таблицы 2 Показатель концентрации водородных ионов , единицы 4,0 5,0-7,0 8,0 стерилен 3. Массовая доля тритерпеновых 0,06-0,08 0,06 сапонинов,4. Подлинность содержания тридолжен выдерживать исвыдерживает терпеновых сапопытание нинов 5. Подлинность должен выдерживать иссодержания форвыдерживает пытание мальдегида 6. Массовая доля 0,05-0,07 0,05 формальдегида,7. Безвредность препарат не должен вызывать гибель и признаки заболеваний у клинически здоровых белых мышей нетоксичен при его однократном введении под кожу в объеме 0,30 см 3 Пример 2. Применение препарата, изготовленного по заявляемому способу, для профилактики эндометрита у свиноматок. Для установления профилактического действия препарата сформированы 4 группы свиноматок. Препарат, приготовленный согласно примеру 1, с профилактической целью вводили свиноматкам внутримышечно за 10-14 суток до предполагаемого опороса по следующей схеме первая группа животных - в объеме 3,0 мл трехкратно с интервалом 24 ч,вторая группа - в объеме 5,0 мл трехкратно с интервалом 24 ч, третья группа - в объеме 7,0 мл с интервалом 24 ч (табл. 3, 4). Контролем служили свиноматки без обработки препаратом. Таблица 3 Перевод объемных единиц препарата (мл) в весовые единицы (г) Объем препарата, мл 3,0 5,0 7,0 Количество активнодействующих веществ, г Тритерпеновые сапонины Формальдегид 18,010-4 15,010-4 Полученные результаты по изучению эффективности применения заявляемого препарата для профилактики эндометрита у свиноматок представлены в табл. 4. 18392 1 2014.08.30 Таблица 4 Результаты изучения профилактической эффективности препарата, приготовленного по заявляемому способу, у свиноматок Клиническое проявление эндометрита Группа свиноматок Кол-во в группе голов 1. Препарат 47 16 34 2. Препарат 49 10 24 3. Препарат 48 27 56 Контроль без обработки 19 11 57,9 При изучении неспецифических гуморальных и клеточных факторов иммунитета было выявлено, что заявляемый препарат повышал бактерицидную активность сыворотки крови свиноматок и стимулировал фагоцитарную активность гранулоцитов (табл. 5, 6). Таблица 5 Влияние препарата, приготовленного по заявляемому способу, на бактерицидную активность сыворотки крови свиноматок Бактерицидная активность сыворотки крови,Группа коров 21 сутки после курсового До введения препарата введения препарата 1. Опытная 43,56,4 49,84,5 2. Опытная 41,63,8 53,84,1 3. Опытная 39,53,2 43,55,8 Контрольная 38,97,2 33,63,9 Примечание- при 0,05. Таблица 6 Влияние заявляемого препарата на фагоцитарную активность гранулоцитов крови свиноматок Фагоцитарный показатель,До начала введения препара- 21 сутки после курсового введения та препарата 1.Опытная 44,64,8 48,35,2 2. Опытная 43,34,5 52,34,2 3. Опытная 42,43,8 41,04,5 Контрольная 45,34,2 39,45,8 Примечание- при 0,05. Таким образом, представленные экспериментальные данные свидетельствуют о том,что заявляемый способ дает возможность получить препарат с расширенным спектром фармакологической активности, обладающим иммуностимулирующим и противовоспалительным действием. Группа свиноматок Источники информации 1. Патент 2077882 1, МПК 661 31/115, 1997 (прототип). 2. Образование устойчивых форм микробов Электронный ресурс. -2011. - Режим доступа ./ - Дата доступа 18.11.2011. 3. Сапонины Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа //отд//сапонины. - Дата доступа 18.11.2011. 5.// - Дата доступа 18.11.2011. 6. Сапонины Электронный ресурс. 2011. - Режим доступа / Дата доступа 18.11.2011. 7. Формалин Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа ////Формальдегид. - Дата доступа 2.11.2011. 8. Хлорид натрия Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа ////Хлорид натрия. - Дата доступа 2.11.2011. 9. Вода дистиллированная - ГОСТ 6709-72. 10. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственного средства на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре. - М., 1974. - 9 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6