Способ прогнозирования индивидуальной радиочувствительности больного плоскоклеточным раком легкого

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ РАДИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БОЛЬНОГО ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ ЛЕГКОГО(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Чакова Наталья Николаевна Полонецкая Светлана Николаевна Михаленко Елена Петровна Крупнова Эвелина Вячеславовна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси(56) Чакова Н.Н. и др. Фундаментальные и прикладные проблемы радиобиологии и радиоэкологии Сборник материалов Научно-практической конференции молодых ученых. - Минск, 2002. - С. 219221. Муравская Г.В. и др. Клиническая онкология Сборник научных работ. Минск, 1999. - С. 113-120.2140086 1, 1999.(57) Способ прогнозирования индивидуальной радиочувствительности больного плоскоклеточным раком легкого, включающий забор крови из пальца до и после однократного терапевтического облучения и подсчет количества лимфоцитов с микроядрами в фиксированных мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза, отличающийся тем, что дополнительно подсчитывают количество лимфоцитов с признаками апоптоза, рассчитывают абсолютную величину изменения для каждого из исследуемых показателей Хабсол. по формуле Хабсол.Хинд.- Хспонт., Фиг. 1 9788 1 2007.10.30 где Хинд. - количество лимфоцитов с микроядрами или с признаками апоптоза после облучения,Хспонт. - количество лимфоцитов с микроядрами или с признаками апоптоза до облучения,и при значении Хабсол. для лимфоцитов с микроядрами более 0,25 и значении Хабсол. для лимфоцитов с признаками апоптоза более 2,00 судят о наличии радиочувствительности больного. Изобретение относится к областям радиобиологии, медицины, в частности к способам прогнозирования результатов лечения при лучевой терапии, и может использоваться для выявления радиочувствительных пациентов среди больных плоскоклеточным раком легкого. Аналогами данного способа исследования являются методы прогнозирования индивидуальной радиочувствительности, основанные на общности реакции организма на воздействие различных физических факторов (постоянного магнитного поля, термонагрузки) 1. Известны также способы оценки радиочувствительности тканей онкологических больных путем цитогенетического анализа лимфоцитов периферической крови после нескольких дней инкубации с применением тестирующего облучения 2, 3. В работе других авторов 4 радиочувствительность лимфоцитову больных хроническим лимфоцитарным лейкозом была исследована при использовании способа дифференциального окрашиванияи подсчета живых и погибших клеток. Прототипом по отношению к заявляемому может считаться способ прогнозирования радиочувствительности лимфоцитов периферической крови онкологических больных, основанный на применении тестирующего облученияс последующим культивированием клеток в течение нескольких суток и использованием метафазного анализа хромосом 5. Сущность этого способа заключается в следующем у пациентов, облученных,осуществляется забор крови из вены, после культивирования лимфоцитов и цитохолазинового блокаопределяют частоту аберраций хромосом. Недостатками этого метода являются значительные затраты времени для проведения анализа сложность забора крови (кровь из вены) стерильные условия для взятия и культивирования крови из вены специальное лабораторное оборудование и реактивы. Задачей заявляемого способа является сокращение длительности и упрощение процесса прогнозирования индивидуальной чувствительности тканей у больных плоскоклеточным раком легкого к лучевой терапии для проведения более адекватного лечения. Для решения поставленной задачи разработан комплексный подход, основанный на цитогенетическом анализе популяций лимфоцитов периферической кровиспонтанного и индуцированного однократным облучением уровня клеток с микроядрами и с признаками апоптоза. Сущность заявленного способа заключается в том, что до и после однократного терапевтического облучения у пациентов берут обычным способом каплю крови из пальца. Получают из нее мазок, фиксируют его и окрашивают по РомановскомуГимза, как делается обычно для подсчета лейкоцитарной формулы в лабораторных условиях клиники. С помощью светового микроскопа определяют частоту встречаемости лимфоцитов с микроядрами и признаками апоптоза. Клетки с микроядрами показаны на фиг. 1, а клетки с признаками апоптоза - на фиг. 2 и 3. Количество проанализированных лимфоцитов на каждого пациента должно быть не менее 500 клеток. На основании проведенных цитогенетических и морфоцитологических исследований на группе мужчин (91 человек) в возрасте 50-75 лет, из них 46 мужчин вошли в контрольную группу, установлено, что в периферической крови радиочувствительных пациентов 2 9788 1 2007.10.30 спонтанная частота лимфоцитов с микроядрами и признаками апоптоза, зафиксированная до лечения, выше, чем в контрольной группе. У радиорезистентных пациентов уровень анализируемых показателей не отличается от данных контрольной группы. Выявлено, что в контрольной группе и у радиорезистентных пациентов лимфоциты с микроядрами встречаются с частотой от 0 до 0,24 , а у радиочувствительных больных - от 0,25 и выше, поэтому в качестве диагностического теста за количественные критерии могут быть взяты значения выше верхней границы контрольной группы - 0,24 , как указано в таблице. Количество лимфоцитов с признаками апоптозной гибели в контрольной группе варьирует от 0,74 до 5,20 , поэтому значение 5,20 взято в качестве прогностического. После однократного терапевтического облучения прогностическими являются следующие уровни для клеток с МЯ - 0,50 , для апоптозных клеток - 5,20 . Большой информативностью обладают абсолютная величина исследуемых показателей, которая представляет собой частоту анализируемого признака после облучения (инд.) за вычетом значения показателя, зарегистрированного у этого же больного на первом этапе обследования (спонт.),и вычисляется по формуле хабсол.хинд. - хспонт. Прогностическими для данного показателя являются следующие уровни для клеток с МЯ - 0,25 , для апоптозных клеток - 2,00 . Превышение перечисленных значений указывает на чувствительность пациентов к лучевой терапии. При этом важно оценивать все перечисленные показатели, потому что чувствительность к облучению контролируется множеством генов, реализуется с помощью различных механизмов и в результате этого на цитогенетическом уровне может проявляться изменением различных признаков. Примеры выполнения Пример 1 У пациента 1 количественный анализ до облучения позволил выявить 0 лимфоцитов с микроядрами 7,97 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. После облучения наблюдались следующие значения 0,77 лимфоцитов с микроядрами 10,77 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. Абсолютная величина индуцированного уровня составила 0,77 лимфоцитов с микроядрами 2,80 лимфоцитов с апоптотической формой гибели (табл.). Заключение радиочувствительный. Пример 2 У пациента 2 обнаружено 0 лимфоцитов с микроядрами 7,02 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. После облучения наблюдались следующие значения 1,50 лимфоцитов с микроядрами 13,00 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. Абсолютная величина индуцированного уровня составила 1,50 лимфоцитов с микроядрами 5,98 лимфоцитов с апоптотической формой гибели (табл.). Заключение радиочувствительный. Пример 3 У пациента 3 - 0,52 лимфоцитов с микроядрами 2,58 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. После облучения наблюдались следующие значения 0 лимфоцитов с микроядрами 15,57 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. Абсолютная величина индуцированного уровня составила 0 лимфоцитов с микроядрами 12,99 лимфоцитов с апоптотической формой гибели (табл.). Заключение сверхрадиочувствительный. Пример 4 У пациента 4 - 0,24 лимфоцитов с микроядрами 2,82 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. После облучения наблюдались следующие значения 0,49 лимфоцитов с микроядрами 4,85 лимфоцитов с апоптотической формой гибели. Абсолютная величина индуцированного уровня составила 0,25 лимфоцитов с микроядрами 2,03 лимфоцитов с апоптотической формой гибели (табл.). Заключение радиорезистентный. 3 9788 1 2007.10.30 Результаты цитогенетического анализа радиочувствительности у больных плоскоклеточным раком легкого Лимфоциты с признаками апоптоза Лимфоциты с микроядромпримера резистентные чувствительные резистентные чувствительные Обследование до облучения 5,205,200,240,241 7,97 0,00 2 7,02 0,00 3 2,58 0,52 4 2,82 0,24 Обследование после первого терапевтического облучения 5,205,200,500,501 10,77 0,77 2 13,00 1,50 3 15,57 0,00 4 4,85 0,49 Абсолютная величина изменения значений показателей после облучения 2,002,000,250,251 2,80 0,77 2 5,98 1,50 3 12,99 0,00 4 2,00 0,25 Для подтверждения прогноза у обследуемых больных было проведено изучение клинической радиочувствительности ткани, которая определялась по степени резорбции опухоли. Цитогенетическое исследование лимфоцитов периферической крови, включающее в себя анализ данных, полученных до и после однократного терапевтического облучения,позволяет индивидуально подойти к лечению, скорректировать его и увеличить тем самым количество больных с полной резорбцией опухоли. По предложенным нами критериям осуществляется прогноз чувствительности больных плоскоклеточным раком легкого к лучевой терапии, которая проводится по радикальной программе расщепленным курсом методом поэтапной смены режимов фракционирования дозы. Предложенный нами цитогенетический методна мазках периферической крови имеет ряд преимуществ намного ускоряет и облегчает анализ индивидуальной радиочувствительности (осуществляется без культивирования) более точно отражает реакцию тканей организма на облучение, так как учитывает влияние совокупности внутренних и внешних факторов не требует специальных стерильных условий и сложного лабораторного оборудования и реактивов. Источники информации 1. Даренская Н.Г., Григорьев А.Ю., Кузнецова С.С. Общность реакции организма на воздействие различных физических факторов и ионизирующего излучения как основа для прогнозирования радиочувствительности организма // Радиация и организм. - Обнинск,1984. - 80 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5