Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНДУКТОР ОКИСЛИТЕЛЬНОГО ВЗРЫВА ФАГОЦИТОВ(71) Заявитель Белорусский государственный университет(72) Авторы Бизунок Наталья Анатольевна Дубовик Борис Валентинович Шадыро Олег Иосифович Полозов Генрих Иванович(73) Патентообладатель Белорусский государственный университет в качестве индуктора окислительного взрыва фагоцитов. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к иммунологии, гематологии, фармакологии, фармации, клеточной биологии, и может быть использовано в лабораторной диагностике и экспериментальной практике для оценки защитной функции фагоцитарных клеток, связанной с их способностью продуцировать активные формы кислорода (АФК). Это явление, присущее фагоцитам и называемое оксидантным (окислительным) взрывом, имеет важное биологическое значение для нормального функционирования иммунитета и его нарушение приводит к тяжелому заболеванию - хронической гранулематозной болезни 1, 2, а также хронизации течения различных инфекционных процессов и опухолевому росту 3. Известен индуктор окислительного взрыва фагоцитов - (-формил-метиониллейцил-фенилаланин -) 4, 5, 6, который представляет собой соединение пептидной структуры. К недостат 16609 1 2012.12.30 кам аналога относятся сложность получения, высокая стоимость, низкая стабильность,требующая глубокого охлаждения, высокая токсичность. Также известен форбол-12-миристат-13-ацетат (12 13-,) - продукт, выделенный из оболочки туберкулезных бактерий 6 К его недостаткам относятся сложность выделения чистого продукта и поэтому высокая стоимость, высокая токсичность, а также низкая стабильность, требующая глубокого охлаждения, фоточувствительность. В качестве прототипа выбран опсонизированный зимозан, который представляет собой сухие пекарские дрожжи, убитые нагреванием и опсонизированные иммуноглобулинами и компонентами комплемента, содержащимися в сыворотке крови 6, 7. Недостатком прототипа является низкая стабильность, высокая вариабельность клеточного ответа и низкая эффективность в качестве индуктора фагоцитарной продукции оксидантов. Задачей изобретения является расширение ассортимента реагентов, стимулирующих окислительный взрыв фагоцитов. Поставленная задача достигается применением для индукции окислительного взрыва фагоцитов ранее известного соединения 4,6-ди-трет-бутил-2,2-диметил-1,3-бензоксатиол 7-ола формулы 33. Заявляемое соединение 4,6-ди-трет-бутил-2,2-диметил-1,3-бензоксатиол-7-ол описано в литературе 8, 9. Авторами обнаружены неочевидные свойства данного соединения, позволяющие применять его в качестве индуктора окислительного взрыва фагоцитов. Сущность изобретения иллюстрируется примером. 2 16609 1 2012.12.30 Пример. Определение влияния заявляемого вещества на окислительный взрыв фагоцитов в перитонеальных макрофагах крыс. Генерируемые макрофагами при окислительном взрыве АФК регистрируют методом люминолзависимой хемилюминесценции (ЛХЛ) на люминометре 1251 (Финляндия). Исследование начинают сразу после внесения соединения 13 в кювету люминометра, содержащую 106 жизнеспособных макрофагов в среде Хенкса и люминол (710-5 М),контрольные пробы не содержат заявляемого соединения. Конечные концентрации соединения 13 составляют 10-7-10-4 М. Для сравнения опсонизированный зимозан (представлен под шифром ) вносят в кюветы с макрофагами (106) и люминолом (710-5 М) в количестве 5107 частиц (максимальная эффективная концентрация). Объем пробы составляет 1 мл, питательной средой является раствор Хенкса без индикатора. Регистрацию ЛХЛ проводят при 37 С на протяжении 30 минут. Количественную оценку образования АФК проводят по площади под кривой ЛХЛ ( ХЛ, мВ) и максимальному значению люминесценцииХЛ, мВ. Показатели ЛХЛ проб, содержащих соединение 13, выражают вк контрольным значениям (без индуктора). Статистическую обработку результатов проводят с использованием парного -критерия, различия считают достоверными при вероятности ошибки 5 . Сравнительное действие заявляемого вещества (соединения 13) и прототипа на окислительный взрыв макрофаговХЛ, мВ (103)ХЛ, мВ Индуктор,С, Относительная Относительная шифр мкмоль/л 1 эффективность 2 эффективность Без инКонтроль 9 17,82,1 0,1 8,81,9 0,1 дуктора 149,423,3 1,0 145,434,3 1,0 5107/мл 3 9 13 0,1 3 14,62,5 0,1 7,21,2 0,1 1,0 9 19,43,8 0,1 10,53,5 0,1 3,0 6 32,37,4 0,2 19,35,6 0,1 6,0 4 150,837,9 1,0 267,887,0 1,8 10,0 8 417,389,2 2,8 891,7198,9 6,1 30,0 6 551,2121,4 3,7 1145,1247,5 7,9 100,0 9 249,054,1 1,7 326,259,1 2,2 Примечание. 1 Среднее значение и ошибка среднего значения. 2 Рассчитывается как отношение люминесценции проб, содержащих 13 к пробам, содержащим . Отличие отдостоверно с 0,050,01 по парному -критерию (двусторонний вариант). 3 Максимальная эффективная концентрация . При внесении соединения 13 в клеточную систему макрофаги-люминол на 5-10 минуте развивается интенсивное свечение, которое носит нелинейный дозозависимый характер с экстремумом при 10-30 мкМ (таблица). Интенсивность свечения, вызванного соединением 13, превосходит люминесценцию, индуцированную опсонизированным зимозаном, в 4 раза поХЛ и в 8 раз поХЛ. Сущность изобретения поясняется фиг. 1- фиг. 2. На фиг. 1 представлено действие соединения 13 и прототипана оксидантный взрыв макрофагов. Видно, что на пике продукции АФК эффект соединения 13 на порядок превышает эффект . На фиг. 2 представлено влияние состава среды на эффективность соединения 13 и прототипа . Видно, что в среде ФСБ-А, лишенной ионов 2 и 2(ФСБ-А), индукторы генерации АФК - соединение 13 и- утрачивают активирующие свойства. 3 16609 1 2012.12.30 Повторное внесение обоих индукторов динамики люминесценции не изменяло(фиг. 1). Подтверждением активного стимулирующего действия соединения 13 на клеточный механизм образования АФК является тот факт, что в среде ФСБ-А, лишенной ионов 2 и 2, которые необходимы для реализации клеточного ответа, как зимозан, так и соединение 13, утрачивают эффективность (фиг. 2). Внесение соединения 13 в среду с люминолом, не содержащую макрофаги (люминол-Хенкс) или содержащую убитые клетки, также не приводило к вспышке свечения. Представленные данные свидетельствуют, что эффект 4,6-ди-трет-бутил-2,2-диметил 1,3-бензоксатиол-7-ола обусловлен индукцией естественных АФК-генерирующих механизмов, присущих только жизнеспособным клеткам 6. Таким образом, заявляемый реагент позволяет решить поставленную задачу. Применение 4,6-ди-трет-бутил-2,2-диметил-1,3-бензоксатиол-7-ола приводит к мощной индукции окислительного взрыва в макрофагах. Заявляемый реагент может быть использован в лабораторной практике для диагностики функциональных нарушений фагоцитарной функции при иммунодефицитах, а также в экспериментально-исследовательской работе для изучения клеточных механизмов иммунитета и разработки лекарственных средств для коррекции иммунитета и лечения иммунодефицитов. Источники информации 1. Гомес Л.А., Ярцев М.Н., Барсуков А.А., Присяжнюк В.Л. Хроническая гранулематозная болезнь спектр клинико-лабораторных нарушений, тактика терапии // Педиатрия. 1991. -8. - С. 65-70. 2.// . . . - 1993. - . 67. - . 2-15. 3..// .. . - 2000. - . 76. - . 457-465. 4. Патент 98/45466, МПК 12 9/00,07 9/02,61 31/66, 1998. 5. Патент 006121237, МПК 01 33/567,01 33/48, 2000. 6.., ,,,., , ,23187// . . - 1988. . 17. - . 3. - . 419-426. 7. Патент 005108899, МПК 61 38/08,61 38/10,61 38/16,1992. 8. Патент 11659, МПК 61 31/39,61 31/00, 2009. 9. Метелица Д.И., Наумчик И.В., Карасева Е.И., Полозов Г.И., Шадыро О.И. Ингибирование пероксидазного окисления ароматических аминов замещенными фенолами // Прикладная биохимия и микробиология. - 2003. - Т. 39/ -4. - С. 401-412. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5

МПК / Метки

МПК: A61K 31/39, A61P 37/00, C07D 327/04

Метки: окислительного, фагоцитов, взрыва, индуктор

Код ссылки

<a href="https://by.patents.su/5-16609-induktor-okislitelnogo-vzryva-fagocitov.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Индуктор окислительного взрыва фагоцитов</a>

Похожие патенты