Способ прогнозирования развития тяжелого неврологического нарушения у ребенка с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы на первом году жизни

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛОГО НЕВРОЛОГИЧЕСКОГО НАРУШЕНИЯ У РЕБЕНКА С ПОСТГИПОКСИЧЕСКИМ ПЕРИНАТАЛЬНЫМ ПОРАЖЕНИЕМ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ НА ПЕРВОМ ГОДУ ЖИЗНИ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр Мать и дитя(72) Авторы Мордовина Татьяна Григорьевна Вильчук Константин Устинович Перковская Алла Федоровна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр Мать и дитя(57) Способ прогнозирования развития тяжелого неврологического нарушения у ребенка с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы на первом году жизни, отличающийся тем, что в крови ребенка в возрасте 3-6 месяцев определяют уровни лимфоцитов с поверхностными антигенами 34 , 38 , 3 8 , 356 , 3 - 56 , 3, 3 -, 325 и 3 - 25 , а также уровни антител к белкам нервной ткани 100, , основному белку миелина и фактору роста нервов и при повышенном уровне лимфоцитов с поверхностными антигенами 3 - 8 , 356 , 3 - 56 , 3, 3, 325 , 3 - 25 , пониженном уровне лимфоцитов с поверхностными антигенами 34 и 38 и уровне 124,25 У.Е. или выше по меньшей мере у двух из указанных выше антител прогнозируют развитие тяжелого неврологического нарушения. Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и может быть использовано для прогнозирования развития тяжелых неврологических нарушений у детей первого года жизни с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы(ЦНС). Актуальность разработки способа прогнозирования тяжелой неврологической патологии у детей первого года жизни, перенесших перинатальное постгипоксическое поражение мозга, на основании иммунологического обследования продиктована следующим. Согласно последним данным, в основе хронизации нейродегенеративного процесса, который определяет течение и исход перинатального поражения нервной системы, лежит повышенная аутоиммунная реакция организма к структурам собственной нервной ткани Чехонин В.П. - М. Медицина, 2000. - С. 32 Полетаев А.Б. Нейроиммунология. - 2003.14715 1 2011.08.30 С. 11-17. Оценить активность аутоиммунного процесса и механизмы, контролирующие его течение, возможно благодаря комплексному иммунологическому обследованию,включающему определение идиотипических (АТ 1) и антиидиотипических (АТ 2) аутоантител к белкам нервной ткани в сыворотке крови, а также фенотипирование субпопуляционного состава лимфоцитов в периферической крови. К тому же по изменению уровня специфических аутоантител можно диагностировать и прогнозировать заболевание еще на ранних стадиях. Это обусловлено тем, что еще задолго до клинической манифестации любой болезни в тех или иных клетках начинаются долговременные или перманентные патохимические изменения, неизбежно сопровождающиеся изменениями со стороны синтеза тех или иных антигенов в специализированных клетках органа. Стойкие сдвиги в продукции аутоантигенов ведут к долговременным изменениям продукции сывороточного содержания соответствующих аутоантител, специфически связывающихся с данными антигенами. Определение аутоантител к белкам нервной ткани 100, , ОБМ, ФРН дает возможность судить о целостности соответствующих структур мозга, структурными компонентами коих являются указанные нейробелки Полетаев А.Б. Клиническая и лабораторная иммунология. - М., 2007, 180 с Манифестация неврологической патологии у части детей, перенесших перинатальное поражение ЦНС, происходит не при рождении, а в последующие месяцы жизни, что ведет к позднему назначению патогенетической терапии и значительно осложняет течение восстановительного периода Барашнев Ю. Росс. вестник перинатологии и педиатрии. - 1998.4. - С. 6-12 Пальчик А.Б. - СПб., 2000. - С. 47. В ряде случаев исход заболевания, в том числе и неблагоприятный, становится очевидным лишь к 9-12 месяцам жизни. При этом клиническая симптоматика не всегда отражает истинную тяжесть состояния, степень поражения ЦНС и дальнейший прогноз развития ребенка Бочанцев С.В. Автореф. дис канд. мед. наук 01.00.14. Омская гос. мед. акад., 2000. - 25 с Известен способ прогнозирования нарушений здоровья детей с перинатальными повреждениями ЦНС на первом году жизни 2121682, 1998. Исследуют пуповинную кровь ребенка, при этом определяют относительное содержание теофиллинчувствительных клеток и при их содержании 9 и более прогнозируют сохранение неврологической симптоматики к концу первого года жизни. Способ позволяет уменьшить объем инвалидизирующих последствий и избежать излишних медикаментозных воздействий при благоприятном прогнозе. Способ имеет следующие недостатки исследование относительного содержания теофиллинчувствительных клеток не отражает степень повреждения нервной ткани, что в свою очередь не позволяет прогнозировать тяжесть течения патологического процесса в нервной ткани. Известен способ определения состояния новорожденного 1416917 1, 1988, который предусматривает непосредственно после рождения определение содержания малонового диальдегида в плазме крови, взятой из пульсирующей артерии и вен пуповины, с последующим вычислением отношения первого показателя ко второму, и при величине 1,0-1,3 констатируют удовлетворительное состояние, 1,4-1,6 - состояние с высоким перинатальным риском, 1,7 и более - тяжелое. Однако этот способ имеет ряд недостатков необходим двухкратный забор крови (из артерии и вены) артериовенозная разница зависит от большого числа параметров, которые трудно учесть, кроме того, показатели ПОЛ изменяются при большом спектре патологических состояний, что делает метод менее точным и специфичным создание специальных условий и временных затрат. Наиболее близким, принятым за прототип, является способ прогнозирования течения неврологических расстройств у детей раннего возраста с перинатальным поражением ЦНС 2286575 1, 2006 путем исследования крови. С этой целью в сыворотке крови новорожденного определяют уровень нейроспецифического белка (НСБ) - нейроспецифическая енолаза и гомокарнозин, и рассчитывают прогностический коэффициент Р 0,328 ГК 0,0004 НСЕ 2 - 0,41 НСЕ 0,604, где НСЕ - нейроспецифическая енолаза (в 2 14715 1 2011.08.30 нг/м), ГК - гомокарнозин (в нмоль/м). Если величина рассчитанного коэффициента меньше 0,54, то прогнозируют благоприятное течение заболевания на фоне стандартной базисной терапии с исчезновением неврологической симптоматики к концу первого года жизни. Если рассчитанный коэффициент будет больше 0,54, прогнозируют неблагоприятное течение заболевания. Однако этот способ имеет недостатки в сыворотке крови определяется уровень только одного НСБ, что не в полной мере может отразить поражение различных структурных элементов нервной ткани. К тому же уровень НСБ в сыворотке крови у новорожденного отражает только острую фазу нейродегенеративного процесса. Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего с точностью не ниже 72 прогнозировать формирование тяжелой патологии ЦНС у детей первого года жизни с постгипоксическим перинатальным поражением ЦНС. Поставленная задача достигается в способе прогнозирования развития тяжелых неврологических нарушений у детей первого года жизни с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы путем исследования крови, при этом в венозной крови ребенка 3-6 месяцев определяют уровень лимфоцитов с поверхностными антигенами 34, 38, 3 - 8, 356, 3 - 56,3, 3 -, 325, 3 - 25, в сыворотке крови определяют содержание идиотипических и антиидиотипических антител к белкам нервной ткани 100, , ОБМ, ФРН и при повышенном содержании лимфоцитов 3 - 8, 356, 3 - 56, 3, 3 -,325, 3 - 25 и пониженном 34, 38, уровне по меньшей мере двух типов антител 124,25 У.Е. и выше прогнозируют формирование тяжелых неврологических нарушений. Авторами доказано, что в основе хронизации нейродегенеративного процесса у детей первого года жизни, индуцированного перинатальной гипоксией-ишемией, лежит повышенная аутоиммунная реакция организма к структурным компонентам нервной ткани на фоне недостаточности Т-клеточного звена иммунитета. Предлагаемые иммунологические исследования позволяют оценить аутоиммунную реакцию организма против компонентов собственной нервной ткани, а также дать характеристику состояния Т-клеточного звена иммунитета. Новизна заявляемого способа заключается в том, что авторы впервые предлагают прогнозировать формирование тяжелых последствий перинатального поражения ЦНС гипоксически-ишемического генеза по уровню лимфоцитов с фенотипом 34,38, 3 - 8, 356, 3 - 56, 3, 3, 325, 3 - 25 и содержанию аутоантител к 100, , ОБМ,ФРН. Способ осуществляют следующим образом. У ребенка 3-6 месяцев с постгипоксическим поражением ЦНС берут 1 мл венозной крови для исследования. Для фенотипирования субпопуляционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии требуется свежая (24 часа) венозная кровь с сольюв качестве антикоагулянта. В пробирки для анализа клинических образцов добавляют конъюгат антител, затем добавляют по 100 мкл цельной венозной крови и перемешивают на вортексе. Инкубируют в течение 15-20 минут при комнатной температуре 18-25 С в защищенном от света месте. Добавляют лизирующий раствор и перемешивают в вортексе в течение 1 секунды, снова инкубируют 10 минут и добавляют 2 мл буферного раствора. Подсчет результатов проводят на проточном цитометре. Для определения уровня аутоантител к белкам нервной ткани методом ИФА использовали тест-систему ИФА-НЕЙРО-АТ с набором 100, , ОБМ, ФРН антигенов Морозов С.Г., Гнеденко Б.Б., 2004. 14715 1 2011.08.30 В лунки планшета, на поверхности которых сорбированы соответствующие антигены,добавляют разведенную контрольную сыворотку и анализируемые пробы сыворотки крови. После инкубации в течение 14-16 часов при температуре 2-8 С содержимое лунок удаляют и вносят в них раствор конъюгата кроличьих антител кчеловека с пероксидазой хрена. На связанных антителах происходит сорбция молекул конъюгата в количестве, прямо пропорциональном количеству связавшихся антител. После удаления избытка несвязанного конъюгата проводят ферментативную реакцию для определения активности пероксидазы, входящей в состав конъюгата. Регистрацию результатов (оптическая плотность раствора в лунке) цветовой ИФА-реакции осуществляют с помощью фотометра вертикального сканирования при длине волны 450 нм в течение 5-10 минут после остановки реакции. На основании результатов исследования группы здоровых детей первого года жизни, а также детей с постгипоксической перинатальной патологией ЦНС различной степени выраженности получено значение уровня АТ для всех исследуемых белков нервной ткани,равное 124,25 У.Е. При этом значении чувствительность теста равнялась 72- при тяжелой патологии ЦНС и 16- при незначительных неврологических нарушениях. Специфичность теста составила 96,6 . Таким образом, оптимальный порог классификации нормальных показателей от патологических, обеспечивающий максимум чувствительности и специфичности теста, - это значение 124,25. Если уровни хотя бы двух видов определяемых АТ превышают соответствующее максимальное значение 124,25 У.Е., то следует считать, что имеется повышенная аутоиммунная реакция организма к структурным компонентам собственной нервной ткани, что представляет высокий риск для формирования тяжелой патологии ЦНС. Предлагаемый способ иллюстрируется примерами. Пример 1. Ребенок К-й. Родился 31.12.06 (ист. болезни 81) у женщины 20 лет от 1 беременности, протекавшей на фоне хронических очагов инфекции, осложненной фетоплацентарной недостаточностью, угрозой прерывания, от 1 родов в удовлетворительном состоянии, массой 2280 г, оценка по шкале Апгар 7/8 баллов. С рождения у ребенка отмечаются неврологические нарушения. Ребенок осмотрен неврологом. Диагноз перинатальное поражение ЦНС средней степени тяжести гипоксически-ишемического генеза, гипертензионный синдром. В возрасте 5 месяцев у ребенка взята кровь для иммунологического исследования, выявлено снижение 34, 38 повышение 3 - 8, 356,3 - 56, 3, 3 - 25. Уровень АТ к ОБМ - 129 У.Е., АТ к ФРН 250 У.Е. Полученные показатели уровня АТ свидетельствуют о повышенной аутоиммунной реакции организма к структурам собственной нервной ткани. Сниженное содержание основных регуляторных клеток 34, 38 говорит о недостаточности Т-клеточного звена, осуществляющего контроль за аутоиммунными процессами. Таким образом, данный ребенок имеет высокий риск формирования тяжелой неврологической патологии. В возрасте 12 месяцев жизни ребенок консультирован неврологом. Диагноз Детский церебральный паралич, спастический тетрапарез, выраженная задержка психического и речевого развития. Пример 2. Ребенок Б-нь. Родился 07.09.07 (ист. болезни 244) у женщины 26 лет от 1 беременности, протекавшей с угрозой прерывания, от 1 родов в удовлетворительном состоянии,массой 3240 г, оценка по шкале Апгар 8/8 баллов. С рождения у ребенка отмечаются неврологические нарушения. Ребенок осмотрен неврологом. Диагноз перинатальное поражение ЦНС средней степени тяжести гипоксически-ишемического генеза, гипертензионный синдром. 4 14715 1 2011.08.30 В возрасте 4 месяцев у ребенка взята кровь для иммунологического исследования, выявлено показатели клеточного состава лимфоцитов в пределах нормы. Уровень АТ к белкам нервной ткани не превышает 124,25 У.Е. Данный ребенок не имеет риска развития тяжелой неврологической патологии. В возрасте 12 месяцев жизни ребенок консультирован неврологом. Диагноз Здоров. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5